銅綠假單胞菌實驗活動風險評估報

銅綠假單胞菌實驗活動風險評估報告

一、生物學特性

(一)種類和細菌分型

銅綠假單胞菌原稱綠膿桿菌,在自然界分布廣泛,為土壤中存在的最常見的細菌之各種水、空氣,人的皮膚、呼吸道和腸道等都有本菌的存在。本菌存在的重要條件是潮濕的環(huán)境。假單胞菌屬根據其RNA/DNA的同源性可分為五個主要型,銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)是其代表菌種。本菌生長對營養(yǎng)要求不高。菌體O抗原有兩種成分:一種為內毒素蛋白,是一種保護性抗原;另一種為酯多糖,具有特異性。根據其結構可將銅綠假單胞菌分成12個血清型,此外還可利用噬菌體或銅綠假單胞菌素分型。

(二)來源

銅綠假單胞菌的學名是Pseudomonasaeruginosa,當中的Pseudomonas是由希臘語的pseudo及monas所組成,意即虛假的單元,是早期微生物學用作描述病菌用的。而Aerug1nosa則是銅綠,即銅與空氣中的氧氣、二氧化碳和水等物質反應產生的物質,又稱銅銹,化學式為Cu2(OH)2CO3,正好表達了這種細菌所產生的青色色素。綠膿素(Pyo-cynin)的生物合成是以群體效應來調控的,就像充滿囊腫性纖維化病人肺部的銅綠假單胞菌的生物膜一樣。

(三)傳染性

銅綠假單胞菌是人體正常菌群之一,在腸道中繁殖,為環(huán)境中主要污染源之一,銅綠假單胞菌可由各種途徑傳播,但主要是通過污染醫(yī)療器具及帶菌醫(yī)護人員引起的醫(yī)源性感染而傳播的。

(四)傳播途徑

通過污染醫(yī)療器具及帶菌醫(yī)護人員引起醫(yī)源性感染。感染多見于皮膚黏膜受損部位,如燒傷、創(chuàng)傷或手術切口等。感染部位與細菌的入口及病人的易感性有關。

(五)易感性

人類對銅綠假單胞菌沒有天然免疫力,人群普遍易感。

(六)潛伏期

銅綠假單胞菌平均潛伏期為48h至72h。(七)劑量一效應關系

銅綠假單胞菌是重要的醫(yī)院內病原菌之一。在醫(yī)院的洗滌槽、防腐溶液和貯尿容器中?？砂l(fā)現(xiàn)這種細菌,并可通過醫(yī)護人員將病菌傳給病人,特別是在灼傷和新生兒重癥監(jiān)護室。但目前尚未見有銅綠假單胞菌對人準確感染劑量的報道。

(八)致病性

綠膿假單胞菌在正常情況下不致病,當機體抵抗力低下時可致病,還可引起病人死亡。本菌為條件致病菌,該菌通常伴隨毒力較強的細菌而存在于病灶中,但偶爾也可單獨引起暴露于外部的組織感染。銅綠假單胞菌的主要致病物質是內毒素,此外尚有菌毛、莢膜、胞外酶和外毒素等多種致病因子。

(九)變異性

銅綠假單胞菌感染的治療易產生耐藥性,但沒有找到耐藥是銅綠假單胞菌變異引起的證據,但可以肯定細菌生物膜(Biofilm)在銅綠假單胞菌感染中廣泛存在,是導致抗菌治療失敗的重要原因之一。

(十)環(huán)境中的穩(wěn)定性

銅綠假單胞菌對外界環(huán)境的抵抗力較強,在潮濕處能長期生存,對紫外線不敏感,濕熱55℃1h才被殺滅。

(十一)藥物敏感性

治療銅綠假單胞菌的臨床感染,以復合青霉素類、三或四代頭孢菌素、三或四代喹諾酮類等藥物為好。有些菌株對磺胺、鏈霉素、氯霉素敏感,但極易產生耐藥性。青霉素對此菌無效,但慶大霉素和多粘菌素B、E,氨基甙類、第三和第四代頭孢菌素(頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢匹羅、頭孢唑南等,后兩種為三線抗菌藥物,應慎用)等抗生素作用較明顯,一些半合成的青霉素類抗生素,比如阿洛西林和哌拉西林對綠膿桿菌也有很強的抗菌作用,其有效率約為80%,磷霉素對其也有效,但效果不如以上的抗生素。聯(lián)合用藥可減少耐藥菌株的產生。

(十二)消毒劑敏感性

本菌對化學藥物的抵抗力比一般革蘭陰性菌強大。1:2000的氯己定、度米芬和新潔爾滅、1:5000的消毒凈,5min內均可將其殺死。0.5%~1%醋酸也可迅速使其死亡,對多種化學消毒劑與抗生素有抗性或耐藥性。

(十三)物理滅活

本菌的抵抗力較其他革蘭陰性菌強,56℃需1h才可殺死該菌

(十四)在宿主體外存活

在生長過程中,本菌對營養(yǎng)的要求不高。對有正常菌群存在的臨床標本或采自環(huán)境中的標本應接種選擇性培養(yǎng)基,如麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(MAC);對無正常菌群存在的臨床標本如血液、腦脊液、穿刺液等可接種普通或血瓊脂培養(yǎng)基。在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長18~24h可以見到扁平、濕潤的菌落。該菌所產生的帶熒光的水溶性青膿素與綠膿素相結合,將使得培養(yǎng)基呈亮綠色。在血瓊脂平板上生長時,可以見到在菌落的周圍有溶血環(huán),菌落呈金屬光澤;如果是在液體培養(yǎng)基中,則呈渾濁狀生長,在液體表面形成菌落,而在培養(yǎng)基底部細菌的生長不良。(十五)與其他生物和環(huán)境的交互作用

銅綠假單胞菌引起的很多感染發(fā)生在衰弱或免疫受損的住院病人身上。它是重癥監(jiān)護室感染的第二位最常見的病原菌,是引起呼吸機相關性肺炎的常見原因,除醫(yī)院內獲得感染外,HIV感染者很容易在社區(qū)獲得該菌的感染,而且-一且被銅綠假單胞菌感染,?？沙霈F(xiàn)晚期HI感染的體征,本菌所致感染的臨床表現(xiàn)取決于受累部位,在住院病人中,若口咽部有綠膿桿菌和其他革蘭陰性桿菌共同繁殖,則氣管插管,氣管切開或間歇性壓呼吸可引起肺部感染。

(十六)預防和治療方案

(1)銅綠假單胞菌廣泛存在于于自然界,通過多種途徑在醫(yī)院內傳播,因此,必須嚴格消毒器械、數(shù)料,醫(yī)務人員及護理員勤洗手,認真執(zhí)行無菌操作,對于于患者應子隔離,對于數(shù)料應子焚毀。同時,積極治療原發(fā)疾患,去除誘發(fā)因素等,銅綠假單胞菌菌苗分多價和單價兩種,兩者對感染的防治均有一定效果,與多價高效抗血清合用可以提高菌苗的免疫原性。其他如內毒素菌苗、OPE菌苗等以細菌組分制備的化學疫苗對保護同型菌株的攻擊也有一定作用。

(2)在治療方面,若感染位于外表而且局限,可用1%醋酸沖洗或局部應用多粘菌素B或多粘菌素E.即可奏效。壞死組織必須擴清,而膿腫則必須引流。若需腸外給藥治療,用妥布霉素或慶大霉素5mg/(kg·d)分劑給予,可治愈大多數(shù)銅綠假單胞菌性尿路感染。根據臨床反應,可將劑量減少到3mg/(kg·d)以盡量減少副作用。

(3)對全身性感染或粒細胞缺乏的病人,應該用一種對銅綠假單胞菌有效的氨基糖與一種抗假單胞菌青霉素合用。對嗜中性白細胞減少并且腎功能處于邊緣狀態(tài)的病人,可用非氨基糖苷類聯(lián)合療法,例如雙重B內酰胺或B內酰胺加一種氟喹諾酮,也是安全的。尿路感染常可用羧芐西林或環(huán)丙沙星或其他氟喹諾酮類藥物治療。但氟唑諾酮類不應該用于兒童,因為該藥對軟骨有不良作用。兩種抗假單胞菌藥物合用時,在治療過程中出現(xiàn)耐藥菌株的機會明顯減少。

二、實驗相關活動風險評估與控制

(一)實驗室感染性因子的種類、來源和危害

1.感染性因子的種類根據銅綠假單胞菌生物學特性和本中心實驗室檢測能力范圍,本實驗室可能的感染因子為銅綠假單胞菌病原體本身。

2.感染性因子的來源

(1)用于銅綠假單胞菌檢測的醫(yī)療機構的各類樣品、化妝品、一次性使用衛(wèi)生用品、飲用天然礦泉水等及血液標本。

(2)樣本采集和抗體檢測過程涉及的所有實驗場所。

(3)實驗室操作中可能產生的含病毒的氣溶膠。

3.感染性因子可能造成的危害(1)在實驗室工作中,被銅綠假單胞菌污染的銳器刺傷造成的皮膚黏膜感染。

(2)各種原因導致的感染性液體飛濺或微滴濺出從而污染器物表面或地面等,造成意外食入感染。

(3)工作人員帶菌等引起感染是較可能的實驗室獲得性感染方式。(4)被污染的實驗器材、器Ⅲ等對實驗立至環(huán)境造成污。

(5)實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。

(二)實驗室常規(guī)活動過程中的風險評估與控制

1.實驗方法

(1)風險點識別未采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測;使用新的或變更的國家標準或行業(yè)標準前,未經技術確認,可能存在安全風險。

(2)風險控制措施盡量采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測,在使用新的或變更的國家標準、行業(yè)標準前,必須經過嚴格的技術確認。

2.樣品采集

(1)水樣、一次性使用衛(wèi)生用品、消毒產品、醫(yī)療器械、化妝品的采集

①主要實驗設備和器材采樣剪刀或鑷子、盛樣容器等。

②主要風險點識別水樣、一次性使用衛(wèi)生用品、消毒產品、醫(yī)療器械、化妝品等樣品中可能存在感染性病原體。采樣人員采樣不規(guī)范、盛樣容器密合不嚴、意外破損等,可導致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境;同時,銳器使用不當,存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。

③風險控制措施采集容器必須防水、防漏,容器外面要包裹足量的吸收性材料,以便容器打破或泄漏時,能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀、鑷子、玻璃容器等銳器時必須規(guī)范操作,做好防護,防止刺傷或劃傷。

(2)血樣的采集

①主要實驗設備和器材一次性采血針、真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。

②主要風險點識別血液樣品可能存在不明感染性病原體,真空采血管密封蓋意外脫落或采血針內殘留血滴落,造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境;采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。

③風險控制措施使用一次性采血針和真空采血管,采樣人員經過正規(guī)采血培訓,并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護(防護服、乳膠手套、口罩);認真、仔細、謹慎操作,抽血后的針頭直接放入利器盒內,禁止用手直接接觸使用后的針頭或將使用后的針頭重新套上針頭套;采好血后直立于試管架中,防止倒翻;消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中,統(tǒng)一消毒處理。

3.樣品的包裝和運送

(1)主要實驗設備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐管)主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱(UN3373冷藏箱)、運送車輛。

(2)主要風險點識別盛樣容器不堅固、密合不嚴,有可能存在樣品濺灑、溢出、滲漏;樣本運輸包裝不符合生物安全要求,可能導致樣品的側翻、滲漏,造成污染擴散。

(3)風險控制措施盛裝樣品容器必須堅固、不易破碎,盡可能選用塑料制品,采樣后必須檢查容器的密合性。樣品嚴格按照B類要求包裝和運送,由采樣人員專車運回實驗室。

4.樣品接收和前處理

(1)主要實驗設備和器材剪刀、鑷子、振蕩器、均質器、均質袋、離心機、生物安全柜、潔凈工作臺等。

(2)主要風險點識別樣品管理員未按實驗室《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求接收樣品;樣品前處理時,打開感染性樣本包裝的動作過猛,會造成樣品側翻;離心操作時發(fā)生離心管破裂等意外情況。

(3)風險控制措施

①樣品接收必須在專用的區(qū)域進行,合同評審人員和收樣人員嚴格按照《樣品管理程

序》(ⅪJK/CX32)要求交接樣品,不得擅自打開樣品包裝,收樣后及時洗手。

②開始檢測前,對盛裝感染性材料樣品的容器,必須在生物安全柜中緩慢打開,開啟的容器管口不能對著操作者。

③對含有感染性的樣品離心振蕩時,必須將離心蓋封嚴實,并關上離心機蓋。

④實驗室應配備應急藥箱,發(fā)生手剪傷等意外事件時應立即進行消毒包扎處理。

⑤當發(fā)生離心管或均質袋意外破裂、濺出時,及時對所有涉及污染的部位進行消毒處理。同時,按《二級生物安全實驗室建設與管理》“實驗室意外事故的處置”章節(jié)處置。

5.樣本檢測過程

(1)主要實驗設備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、微生物膜過濾系統(tǒng)、細菌鑒定和藥敏測試儀、生物安全柜、振蕩器、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿等。

(2)主要風險點識別

①對水樣、一次性使用衛(wèi)生用品、消毒產品、醫(yī)療器械、化妝品等樣品進行分離鑒定生化試驗、藥敏試驗等實驗活動均涉及活菌操作。在檢測過程中移液、水樣過濾、混勻震蕩、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產生氣溶膠。雖然銅綠假單胞菌不通過呼吸道感染,但由于樣品可能含有其他未知的病原體,也不應忽視。

②實驗過程中玻璃器材意外破碎或滲漏、離心操作時離心管意外破裂等事故,可造成液體濺出從而污染設備表面或工作臺面等環(huán)境,間接污染操作者的皮膚、黏膜。

(3)風險控制措施

①開展檢測時檢測人員應按照二級生物安全防護要求做好自身防護措施,涂抹物等具有感染性的材料的操作必須在生物安全柜內進行,實驗結束后必須對桌面、臺面及時進行消毒處理。

②必須使用移液器或吸球移取樣液,旋蓋和移液操作的動作要輕緩,所有吸管應用棉塞,移液頭盡可能使用帶濾芯的,以減少對移液器或吸球的污染。

③使用直徑2~3mm且完全封閉、手柄的長度小于6cm的接種環(huán)分離細菌,盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán),避免在酒精燈的明火上加熱從而引起感染性物質的爆濺。

④盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿,若必須使用玻璃器皿,只能用實驗室級玻璃(硼硅酸鹽),且任何破碎或有裂紋的器皿都應丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片玻璃碎片等銳器。嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液,更不可當吸管用,用過的銳器應直接放入利器盒,消毒后廢棄。

⑤在任何可能導致潛在的傳染性物質濺出的操作過程中,應保護好面部、眼睛和嘴。6.菌株使用、保存和運輸

(1)主要實驗設備和器材接種針(環(huán))、菌株保存管、生物安全柜、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱(UN3373冷藏箱)、運送車輛。

(2)主要風險點識別

①保菌操作不規(guī)范、個人防護不到位、保菌磁珠管等保菌容器意外破損、磁珠掉落等會導致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員。

②銅綠假單胞菌使用和保存未按照《菌(毒)種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求實施管理,存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。

③運送包裝不符合生物安全要求,或運輸工具無安全保障,則易造成污染擴散,甚至樣本丟失。

(3)風險控制措施

①銅綠假單胞菌分離純化及保菌操作應在生物安全柜內進行。

②銅綠假單胞菌標準菌株的使用、保存嚴格按照《菌(毒)種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求進行操作,實行雙人雙鎖保管,嚴防菌株被惡意使用而造成生物危害。

③銅綠假單胞菌陽性菌株的上送應嚴格執(zhí)行規(guī)范3層包裝(同“樣品采集”),攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運輸許可證”,由專車運送,并由專業(yè)人員全程護送。7.實驗室的清潔和消毒

(1)主要實驗設備和器材70%~75%的酒精、施康清洗消毒液Ⅰ。

(2)主要風險點識別工作完畢后,若不及時對工作臺面、生物安全柜進行消毒,有可能會對下次操作人員造成污染或感染。

(3)風險控制措施工作完畢后,及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進行消毒,使用稀釋100倍的施康清洗消毒液Ⅰ擦拭,用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%~75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢后,先脫去手套,再脫去防護服,并正確用肥皂和流水洗手。

8.廢棄物處置

(1)主要實驗設備和器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器

(2)主要風險點識別

①樣品采集和實驗檢測過程產生的感染性廢棄物,包括培養(yǎng)基、標本和陽性菌種及所有實驗過程涉及的用品,釋放前未按照規(guī)范要求處理,導致感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。

②樣品采集和實驗檢測過程產生的被污染的損傷性廢棄物,如一次性使用采血用具載玻片、玻璃試管、玻璃安瓿、培養(yǎng)皿等,未按照要求規(guī)范處理,存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。

(3)風險控制措施實驗室廢棄物處理應遵循《醫(yī)療廢棄物管理條例》《醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療廢棄物管理辦法》《醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標志標準》等相關法規(guī)要求,分類收集,規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標識的硬質、防漏、防銳器刺破的專用利器盒中;所有感染性廢棄物必須放置于有警示標識的醫(yī)療廢物專用包裝袋中;使用高效消毒液浸泡或高溫高壓滅菌后集中處理,集中存放至中心指定的醫(yī)療廢棄室,由有資質的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集、集中處置。同時,做好廢棄物處置交接記錄,所有相關記錄應定期整理歸檔。

(三)實驗室常規(guī)活動中其他風險評估與預防控制措施

1.電力

(1)主要風險點識別斷電或電壓不穩(wěn),存在引發(fā)電氣設備故障的隱患。斷電可使運行中的生物安全柜、檢測設備突然停止工作,致使實驗活動被迫中斷,存在感染性物質外溢從而污染操作人員和環(huán)境的風險。

(2)預防控制措施實驗室由雙路市電供電,并為關鍵儀器設備配備應急電源(UPS),避免實驗室由斷電可能引發(fā)的生物安全風險,確保檢測工作順利進行。

2.電氣操作

(1)主要風險點識別實驗室活動涉及的電氣操作,包括實驗室工作區(qū)內電氣設備的啟動、關閉、安裝和維修;設備層內UPS、空調機組等電氣設備的啟動、關閉和維修等。這些電氣操作的過程可能產生觸電、電擊、造成電氣故障等風險

(2)預防控制措施

①電氣設備的設計及制造符合相關安全標準的要求。實驗室工作區(qū)內若有380V電源插座,則需明確標識,并由有資質的專業(yè)人員進行操作。

②新的、改裝過的或修理過的電氣設備在未經專業(yè)人員(如有資質的電工)完成電氣安全測試和設備符合安全使用要求之前,不允許使用

③電氣設備使用人員接受正確操作的培訓,操作方式不降低電氣安全性。電氣設備使用人員要定期檢查設備可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員才可從事電氣設備和電路工作。禁止未經授權的工作。

④采取措施對設備去污染,以減少維護人員被病原菌感染的風險

3.實驗室給排水設施設備

(1)主要風險點識別實驗室含有給排水的設施設備,包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。水管道意外破裂、排水管道阻塞可能導致感染性材料溢出,有污染實驗人員和環(huán)境的風險。

(2)預防控制措施實驗室產生的所有染菌物及器具,必須先經高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌,洗消產生的污水集中排入中心污水池消毒處理,嚴禁直接排放。按照GB18466中6.1污水取樣與監(jiān)測的要求執(zhí)行。

4.實驗室設施設備管道

(1)主要風險點識別實驗室設施設備管道穿越維護結構的部位可能造成密封不嚴,當感染性材料溢出時,有污染環(huán)境的風險

(2)預防控制措施所有管道穿越維護結構的部位嚴格密封,定期進行檢查檢測,避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境的風險

5.主要檢測儀器設備

(1)細菌鑒定和藥敏測試儀(ATB儀)等設備

①主要風險點識別對疑似銅綠假單胞菌鑒定時要用到ATB儀進行生化鑒定及藥敏試驗,如果不按操作規(guī)程進行規(guī)范操作,則會導致病原體濺出、滲漏而污染實驗環(huán)境。

②風險控制措施嚴格按ATB儀等設備操作規(guī)程操作和維護,每次使用完畢后對設備箱體及可能污染的實驗環(huán)境進行消毒。

(2)離心機①主要風險點識別未正確配備密閉蓋離心機、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管,高速離心時可產生氣溶膠擴散;離心血樣時沒有做好平衡,可能會發(fā)生離心管破裂離心管蓋脫落。

②風險控制措施實驗室配備密閉蓋離心機、密封頭的真空采血管、耐壓螺旋蓋離心管;離心前做好平衡,選擇正確的離心速度和離心力;規(guī)范正確操作;每次使用后做好清潔消毒和使用維護記錄,定期進行功能檢查,確保離心機性能正常。

(3)微生物膜過濾系統(tǒng)

①主要風險點識別未按照儀器使用要求規(guī)范操作,可能發(fā)生濾杯松動,導致待檢樣品濾液外流從而污染實驗臺面和設備。

②預防控制措施實驗室嚴格按照儀器使用說明規(guī)范操作,儀器啟動前,必須檢查濾杯與濾器接口的密封性,保證密閉狀態(tài),并做好個人生物安全防護;每次使用后做好清潔消毒和使用維護記錄,定期進行功能檢査,確保儀器機性能正常。

6.生物安全設施設備

(1)生物安全柜

①主要風險點識別沒有按照設備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護,使生物安全柜的氣溶膠防護效果明顯降低或消失,失去安全防護效果。設備長時間使用未及時更換HEPA過濾膜,可出現(xiàn)工作窗口氣流速度降低或流向紊亂等功能失常狀況。生物安全柜使用后未徹底消毒處理,對于清潔、維護人員將會產生污染。設備長期關停,將會使部分電器元件老化從而失去正常功能。

②預防控制措施使用人員接受相關操作、維護培訓,做到規(guī)范使用和維護。每月進行空氣沉降菌檢測,每年請有資質的服務機構對生物安全柜風速、氣流、塵埃粒子數(shù)、紫外線強度等主要性能指標進行檢測,確保其功能正常。

(2)高壓滅菌器

①主要風險點識別沒有正確配備高壓滅菌器,存在氣溶膠污染環(huán)境的隱患;沒有按照設備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護,可能使高壓滅菌器效果明顯降低或失效,失去去污染與無害化的作用;壓力鍋長時間使用又不定期監(jiān)測滅菌效果,對壓力容器的滅菌效果無從考證,存在滅菌不徹底從而引發(fā)污染的隱患。壓力鍋長期關停期間,如果不及時排干鍋體水分,將會使內部器件老化從而失去正常功能。

②預防控制措施持證上崗。選擇下排式高壓滅菌器,防止氣溶膠污染,正確規(guī)范操作,定期維護,確保高壓滅菌器性能正常,做好使用記錄。對壓力滅菌器按照WS310.3《醫(yī)院消毒供應中心第3部分:清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標準》規(guī)定,每次監(jiān)測化學指示物,監(jiān)控記錄溫度、壓力、時間等滅菌參數(shù),每周進行生物監(jiān)測,以保證滅菌質量。

(3)個人防護用品①主要風險點識別實驗室不提供足夠數(shù)量的、符合質量要求的防護服、防護眼罩、一次性乳膠手套、口罩和覆蓋足背的防滑鞋等,使用大小不合適的個人防護用品,個人防護用品穿戴、脫卸的程序、方法不符合要求,均可能造成人員感染或污染環(huán)境的風險。

②預防控制措施選擇正規(guī)、符合質量要求的防護用品,使用前進行必要的培訓。

(4)應急救治設施和用品①主要風險點識別實驗室若沒有配備洗器、應急藥箱等必要的應急設施和物品,或配備的急救用品種類不全、不合適或過期,導致急用時無法發(fā)揮作用。

②預防控制措施在實驗室內正確配備洗眼器,確保功能正常。配備的75%乙醇碘附或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實驗活動相適應并在有效期內使用,專人負責管理,定期維護、清理、更新。

(5)消毒滅菌劑

①主要風險點識別消毒劑產品無生產許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理,將會導致消毒效果降低、生物滅活能力降低或對物品腐蝕性增加、對皮膚造成刺激等問題。

②預防控制措施選擇符合國家標準的正規(guī)廠家生產的產品,選擇合適的消毒劑按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度(劑量)進行消毒,避免使用過期產品;消毒過程中消毒人員應做好必要的個體防護,防止發(fā)生意外。根據銅綠假單胞菌特點,選用70%~75%酒精和稀釋10~25倍、50~100倍、200倍的施康消毒劑I(主要成分為次氯酸鈉)作為實驗室常用消毒劑。

7.管理體系的風險

(1)主要風險點識別管理體系(包括應急預案)是否健全和完善,是否符合實際管理要求,程序文件、作業(yè)指導書和操作規(guī)程是否科學和具有可操作性,是能否確保生物安全的主要因素。如果組織結構不健全、設置不合理,體系文件與實際工作不匹配,以及部門職責不清或銜接不當?shù)?就都可能帶來安全風險。

(2)預防控制措施定期開展對檢測標準操作規(guī)范(SOP)和其他有關管理體系的評審,發(fā)現(xiàn)問題及時修訂、完善,以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運行。

(四)工作人員的風險評估與預防控制措施

1.人員數(shù)量和素質

(1)人員數(shù)量

①主要風險點識別人員過少會因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導致操作過程中工作失誤增加,風險增加。

②預防控制措施采樣和檢測人員數(shù)量應與工作量相匹配,盡量有2名工作人員同時進行采樣和檢測工作。

(2)人員結構

①主要風險點識別實驗室檢測人員職稱分布不合理,新進人員沒有高資歷人員帶、教操作,不能很好應對意外事件,風險增加。②預防控制措施實驗室檢測人員年齡和資歷結構應配備合理,新進人員應由高資人員帶教或監(jiān)督操作。(3)職業(yè)操守①主要風險點識別銅綠假單胞菌檢測存在一定的生物安全風險,若責任心不強的人員參與該項工作,則產生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性。

②預防控制措施加強職業(yè)道德教育,培養(yǎng)工作責任心。

2.健康管理主要風險點識別健康狀況主要包括生理、心理素質與免疫狀態(tài)。當手部皮膚有開放性損傷、身體出現(xiàn)腹瀉等胃腸道癥狀、機體免疫力低下,或其他不適合工作的狀況,職業(yè)暴露風險增加。

(2)預防控制措施建立健康申報制度,遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適合工作的情況,及時向科室負責人報告并暫停工作;裸露皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等應用防水材料嚴密覆蓋。如接觸物的傳染性大,應戴雙層手套。

3.人員資質

(1)主要風險點識別檢測人員不具備衛(wèi)生檢測相關學歷教育背景,不熟悉銅綠假單胞菌檢測方法及操作規(guī)范,無法保證工作質量和安全。

(2)預防控制措施檢測人員必須是檢驗或相關專業(yè)畢業(yè),經過上崗培訓和持證上崗。

4.生物安全培訓要求

(1)主要風險點識別檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進修實習人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全,以及相關生物安全設備操作的技術培訓,易造成生物安全事故發(fā)生。

(2)預防控制措施檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術培訓、考核。上崗前熟練掌握生物安全儀器設備、設施操作技術,具備相關的安全防護能力。進修實習人員參與實驗活動前必須進行生物安全知識的培訓,在帶教老師的監(jiān)督下工作。

5.應急事件處理能力

(1)主要風險點識別實驗人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業(yè)暴露后預防等突發(fā)事件處置的培訓,一旦發(fā)生意外事件,就不能有效地進行早期處理和控制生物安全事件。

(2)預防控制措施實驗室工作人員必須嚴格按照《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應急處置技術方案》中規(guī)定的要求進行應急事件的處置,規(guī)范工作中職業(yè)暴露后現(xiàn)場急救處理。

(五)實驗室非常規(guī)活動中的風險評估與預防控制措施1.主要的實驗室非常規(guī)活動

(1)實驗室外專業(yè)人員對實驗室設施設備的維護、維修、檢定/校準、檢測驗證(如主要設施設備的檢測驗證)和更換(如高效過濾器等的更換)等。

(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材的清洗消毒。

(3)實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查等。2.主要風險點識別

(1)上述人員進入實驗室從事相關活動,特別是不慎打翻、打破標本管或損壞儀器零部件等情況,可能會引起實驗室感染的風險。

(2)實驗室運行過程中某些人員需要進入實驗室參觀,存在影響實驗活動正常運行或者導致相關或不相關的設施設備損壞的風險。

3.預防控制措施

(1)實行人員準入、登記制度。進修實習人員進入實驗室從事檢測活動前,必須先進行生物安全和實驗室規(guī)章制度的培訓。若中心實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員確需進入實驗室進行相關活動,應有中心實驗室人員陪同。

(2)實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員必須要有相應的專業(yè)知識,應對其進行生物安全培訓,提供安全指南,實驗室人員應協(xié)助、指導和規(guī)范進入人員在實驗室內的活動并對其安全行為進行監(jiān)督,進入人員必須遵守實驗室的各項管理規(guī)定,以確保人員和環(huán)境安全。

(3)進入人員未經許可絕對不能私自動用實驗室內有標志的危險品(除非經過授權)

不能將未經消毒處理的物品拿出實驗區(qū)。

(4)在初篩實驗室進行設施、設備維護維修過程中,若發(fā)生意外事件,應立即報告實驗室負責人。實驗室負責人根據造成的事故進行風險評估,采取應對措施。按專業(yè)技術要求進行設施、設備的維護維修時,不能私自動用其他設施設備,若導致相關或不相關的設施設備損壞時應及時報告。

(5)當需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時,應先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后,專業(yè)人員才進行更換。

(6)為確保自己和他人的安全,禁止未穿防護服的人員隨意進出實驗室的防護區(qū)域同時也禁止穿防護服的人員走出實驗室的防護區(qū)域。

(7)對實驗室的設施、設備進行維護工作時動作輕柔,避免意外事故發(fā)生。

(8)在實驗室內進行設施、設備檢驗維修工作時,至少有2人共同參加。

(9)檢驗維修后,離開實驗室前,必須洗手。

(六)被誤用和惡意使用的風險與預防控制措施

1.主要風險點識別陽性標本未明確標識并未實行雙人雙鎖管理,實驗活動結束后不及時消毒操作場所,工作人員在不知情的情況下可能誤用標本、實驗材料和設施設備等,導致人員感染和實驗室環(huán)境污染、人員受傷或設施設備損壞等事故。2.預防控制措施

(1)實行嚴格的人員準入和持證上崗制度。

(2)所有獲得批準進入實驗室工作的人員,必須嚴格按規(guī)程操作實驗材料和設施設備,以及其他一切實驗活動,不得私自動用實驗室內任何不熟悉物品。

(3)發(fā)生事故時必須及時報告并作必要的處理和記錄。

(4)實驗所用的材料和試劑等必須有明確的標識。

(5)陽性標本嚴格實施雙人雙鎖管理。(七)相關實驗室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示

實驗室人員感染事件正在逐年增加,主要原因是實驗室人員在進行樣本采集、前處理、檢驗、廢棄物處置等工作過程中,操作不規(guī)范、個人防護不到位引起的。銅綠假單胞菌可通過污染醫(yī)療器具及帶菌醫(yī)護人員引起醫(yī)源性感染。因此,應嚴格遵守實驗室相關規(guī)定,做好個人防護,規(guī)范操作。

三、實驗室理化因素風險評估及安全防護措施

(一)紫外線

1.主要風險點識別潔凈實驗室內傳遞窗、生物安全柜、BSL-2實驗室均使用紫外線燈進行物體表面消毒。紫外線波長為250~280nm,主要影響眼睛和皮膚,引起急性角膜炎和結膜炎、慢性白內障等眼疾病,還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時,人員在不知情的情況下進入可造成傷害。

2.安全防護措施在實驗室工作應避免紫外線直接照射人體,特別是眼部。生物安全柜表面固定紫外線危害的標識,提醒實驗人員小心紫外線危害。在進行紫外線消毒時,實驗人員盡量遠離消毒區(qū)域,基本可以規(guī)避紫外線對人體的危害。

(二)輻射

1.主要風險點識別輻射源或輻射事故可以間接導致病原微生物屏障系統(tǒng)的破壞增加實驗人員被病原微生物感染的風險。

2.預防控制措施實驗室應遠離輻射源,如果無法避開,則應采取物理隔離措施,防止輻射源對檢測工作和人員健康產生影響。本中心實驗室內部和周邊建筑群均沒有輻射源,所以輻射風險基本不用考慮。

(三)施康清洗消毒劑

1.主要風險點識別施康清洗消毒劑Ⅰ屬于含氯消毒劑,有效氯的含量為4.55%~5.55%,次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發(fā),長期使用會使人感到頭疼、惡心,刺激黏膜,對于有體質過敏的人,還容易引發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用,可使人流淚、咳嗽,并刺激皮膚和黏膜,嚴重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀,甚至因室息而死。

2.安全防護措施按照使用說明,根據消毒對象不同而配制不同的稀釋倍數(shù),避免使用不必要的高濃度的消毒液,稀釋和使用時戴好手套,消毒后可及時開窗通風,基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。

(四)其他

1.主要風險點識別實驗室內的照明和聲音(生物安全柜等)有可能因強光和噪聲對人員造成損害

2.安全防護措施對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進行檢測,確保合格,避免強光和

噪聲對人員的損害

四、實驗室火災風險評估與預防控制措施

1.主要風險點識別

(1)超負荷用電,電線過長。(2)電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良,例如電纜的絕緣層破舊或損壞。

(3)用火不當?shù)纫l(fā)火災。

(4)儀器設備在不使用時未關團電源。(5)使用的儀器設備不是專為實驗室環(huán)境設計。(6)易燃、易爆品處理、保存不當。(7)不相容化學品沒有正確隔離。(8)在易燃物品和蒸氣附近有能產生火花的設備。(9)通風系統(tǒng)不當或不充分。

2.預防控制措施

實驗室采取以下預防控制措施避免火災發(fā)生,保證發(fā)生火災后能夠全撤離實驗室。

(1)定期檢查電器插座、電線絕緣是否完好,保證用電負荷,對易燃、易爆等危險品進行有效區(qū)域隔離。

(2)實驗室配備火火器。放置在易取的地點,擺放部位張貼滅火器標識,該滅火器用于撲火可控制的火災,幫助人員撤離火場；對滅火器進行期檢查和維護,確保其有效使用。

(3)實驗室需裝設應急燈,所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標識。當出現(xiàn)緊急狀況時,實驗室所有出的鎖必項處于開啟狀態(tài),出口設計保證在不經過高危險區(qū)域就能逃脫,所有出口都能通向一個開放空間。

(4走廊、流通區(qū)城不得放置障礙物,不受人員流動和滅火設備移動的影響。

(5)在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標識。實驗室每年對工作人員進行消防知識培訓,包括消防器材的使用、火災發(fā)生時的應急行動等。

五、自然災害風險評估與安全防護措施

自然災害可能導致的實驗室緊急狀況主要包括水災和地震等。

(一)水災

1.風險識別水災可能導致實驗室維護結構和設施損壞,實驗內感染性材料隨水外溢。

2.安全防護措施

(1)在因個手朋中制《實驗室緊急事件應急預案》，并對所有實驗室人員進行培訓。

(2)實驗室一旦發(fā)生水災報警時,應立刻停止工作。首先，考慮實驗室內感染性物和人員的轉移。實驗室負責人、中心主任根據條件及時采取對策,第一時間聯(lián)系相關消防人員。消防人員應有防護措施,并在受過訓練的實驗室工作人員陪同下，進入實驗室完成菌毒種和人員的安全轉移。

(二)地震

1.風險識別發(fā)生地震等自然災害會導致實驗室維護結構和設施損壞,導致人員傷害和實驗室感染性材料外溢的風險。

2.安全防護措施實驗室應采取措施降低自然害帶來的險,保證火災發(fā)生后能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先設立實驗室維護結構20m范圍內的封鎖區(qū)。其次,對封鎖區(qū)進行消毒,然后由專業(yè)人員在做好個人防護的前提下對實驗內部環(huán)境邊消毒邊清理,清理到樣品保存地點,如果保藏樣品的容器沒有被破壞,可把它安全轉移到其他安全的實驗室存放,如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢,應立即用可靠方法進行徹底消毒滅菌。處理現(xiàn)場的人需要由生物安全委員會評估暴露級別和暴露源級別,決定是否用藥及確定預防性用藥方案。

六、生物安全及其他緊急事件(事故)處理預案

(一)實驗室生物安全事件(事故)處理措施

(1)離心過程中離心管破裂時,應馬上關閉電源,離心機停止工作,并靜止3min。然后緩慢打開離心機蓋,將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏,用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min,然后棄去消毒和離心片,將離心杯洗后擦干。

(2)發(fā)生污染物潑濺或溢出時,立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處,并倒上10~25倍稀釋的施康消毒液,作用至少30min方可清理全部污染物,用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些操作過程中都應戴手套。如發(fā)生大范圍污染物擴放事故時,應通知主管領導和安全負責人到達事故現(xiàn)場。待其查清情況,確定消毒方案,組織對實驗室進行終末消毒。

(二)其他緊急事件(事故)處理措施

在制訂的應急預案中應包括消防人員和其他緊急救助人員。應事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質,讓他們熟悉實驗室的布局和設備。實驗室人員要熟悉緊急描離的情況及緊急撤離的路線標識,在實驗室發(fā)生不可控制的火災、水災,爆炸或其他危險情況時,為確保工作人員的安全,要進行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和緊急撤離的集合地點。

(三)生物安全及其他緊急事件(事故)報告和記錄

(1)發(fā)生生物安全及其他緊急事件時,在緊急處理的同時必須向中心主管領導和生物安全委員會報告。

(2)對于生物安全事件必須進行登記,記錄發(fā)生的時間、地點及詳細經過、處理方法等。

七、生物安全和生物安全保障風險管理

(1)生物安全風險評估依據標準

風險評估所依據的數(shù)據及擬采取的風險控制措施、安全操作規(guī)程等均應以國家衛(wèi)生和計劃生育委員會、世界衛(wèi)生組織、國際標準化組織等機構或行業(yè)權威機構發(fā)布的指南標準等為依據。

(二)危險發(fā)生的概率評估(見表7-12)

表7-12銅綠假單胞菌實驗活動危險發(fā)生的概率評估序號潛在危險因素危害程度發(fā)生概率固有風險措施合理性殘留風險風險可控程度1樣品運輸過程中容器意外側翻、泄漏、破裂造成污染中度可能中度合理低風險可控2樣品的接收、開啟及加樣等常規(guī)實驗活動中產生的氣溶膠中度較大可能中度合理低風險可控3離心、加樣等實驗活動中意外事故造成盛裝標本容器破裂、溢出瞬間產生的氣溶膠中度可能中度合理低風險可控4檢測未經滅活的樣品對儀器與環(huán)境造成的污染中度較大可能中度合理低風險可控5標本、實驗材料、設施設備等被誤用的風險中度可能中度合理低風險可控6陽性標本被惡意使用的風險高度較小可能高度合理低風險可控7實驗器材未經規(guī)范消毒造成污染中度可能中度合理低風險可控8廢棄物處理不當造成病原微生物擴散中度較大可能中度合理低風險可控9滅菌裝置不符合要求，滅菌不徹底造成污染中度較小可能中度合理低風險可控10檢測人員和工勤人員被銳器誤傷造成職業(yè)暴露中度可能中度合理低風險可控11檢測人員個人防護不當造成的病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控12非檢測人員、進修實習等外來人員進入實驗室的不當