小麥抗赤霉病評價技術(shù)規(guī)范DB41-T 2391-2023

ICS65.020.20

CCSB15

41

河南省地方標準

DB41/T2391—2023

小麥抗赤霉病評價技術(shù)規(guī)范

2023-03-07發(fā)布2023-06-06實施

河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2391—2023

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4抗性鑒定圃設(shè)置.....................................................................2

5病原物接種體.......................................................................2

6接種方法...........................................................................2

7病情調(diào)查...........................................................................2

8抗性評價標準.......................................................................3

9抗性評價...........................................................................4

10重復(fù)鑒定..........................................................................4

11鑒定記載表格......................................................................4

附錄A（資料性）小麥赤霉病病原物.....................................................5

附錄B（資料性）小麥赤霉病抗性鑒定原始記錄及結(jié)果鑒定表...............................6

I

DB41/T2391—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所、河南省植物保護檢疫站。

本文件主要起草人：宋玉立、李好海、徐飛、張國彥、楊共強、李鐵樁、蘇東、李金秀、樊驊、王

俊美、馮超紅、韓景紅、胡玉紅、路敏、朱曉紅。

II

DB41/T2391—2023

小麥抗赤霉病評價技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了小麥抗赤霉病接種體制備、接種方法、病害調(diào)查及抗性評價的技術(shù)規(guī)范。

本文件適用于普通小麥、野生小麥和小麥近緣種等。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5009.111食品安全國家標準食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測定

NY/T1443.4小麥抗病蟲性評價技術(shù)規(guī)范第4部分：小麥抗赤霉病評價技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

小麥赤霉病

由禾谷鐮孢（FusariumgraminearumSchwabe［有性世代為Gibberellazeae（Schw.）Petch］）

等鐮孢屬真菌侵染小麥穗部，引起小麥穗枯，產(chǎn)生紅色霉層，同時在籽粒中可產(chǎn)生脫氧雪腐鐮刀菌烯醇

（DON）和玉米赤霉烯酮（ZEN）等多種真菌毒素，造成小麥減產(chǎn)和品質(zhì)下降的小麥病害。

3.2

抗侵染

寄主植物避免、終止或阻滯病原物侵入，減輕發(fā)病和損失程度的可遺傳特性。

3.3

抗擴展

寄主植物阻滯病原物擴展，減輕發(fā)病和損失程度的可遺傳特性。

3.4

抗毒素積累

病原物侵入后寄主植物限制病原物毒素分泌或降解毒素，減少組織中毒素含量的可遺傳特性。

3.5

嚴重度

發(fā)病植物單元上發(fā)病面積或體積占該單元總面積或總體積的百分率，亦可用分級法表示，即將發(fā)病

的嚴重程度由輕到重劃分出幾個級別，分別用一些代表值表示，說明病害發(fā)生的嚴重程度。

3.6

病情指數(shù)

綜合衡量發(fā)病率和嚴重度的病情評價指標。計算公式如下（1）：

1

DB41/T2391—2023

nn

···············································(1)

DI(XiSi)/(XiSmax)100

i0i0

式中：

DI——病情指數(shù)；

i——病級數(shù)（0～n）；

Xi——i級的單元數(shù)；

Si——i級嚴重度的代表值；

Smax——嚴重度的最高級值。

4抗性鑒定圃設(shè)置

4.1鑒定圃選址

鑒定圃應(yīng)設(shè)置在小麥赤霉病適發(fā)區(qū)，選擇具備良好的自然發(fā)病環(huán)境和灌溉條件、地勢平坦、地力均

勻的地塊。鑒定圃不施用任何殺菌劑。

4.2鑒定對照品種

高抗對照品種為‘寧麥13’、中抗對照品種為‘鄭麥9023’、中感對照品種為‘西農(nóng)979’、高感

對照品種為‘矮抗58’。

4.3種植要求

種植管理同大田生產(chǎn)。每畝播量為10kg～12.5kg。

鑒定材料順序排列，重復(fù)2次，每50～100份鑒定材料設(shè)1組高抗、中抗、中感和高感對照品種。

鑒定小區(qū)行長100cm～150cm，行距20cm。每份鑒定材料種植2行。

5病原物接種體

經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定為禾谷鐮孢（見附錄A中A.1），進行致病力測定后，選擇強致病力菌株。

接種體的制備方法見附錄A中A.2。

6接種方法

穗部噴霧接種：于小麥揚花期，采用禾谷鐮孢分生孢子懸浮液（濃度為每毫升5×104個）噴霧接種，

1m2噴霧50mL。選取30穗進行保濕，10穗為1組，分別套上透明塑料袋保濕2d。接種宜選擇傍晚進行。

單花滴注接種：于小麥揚花期剪去麥穗中部小穗的內(nèi)外穎殼頂部少許，滴入濃度為每毫升5×105

個的禾谷鐮孢分生孢子懸浮液20μL，每個材料接種30穗，每穗接種1個小花，10穗為1組，分別套上透

明塑料袋保濕2d。

接種后若遇干旱天氣，應(yīng)及時進行田間灌溉，以滿足病害發(fā)生所需的條件。

7病情調(diào)查

7.1調(diào)查時間

2

DB41/T2391—2023

乳熟期調(diào)查1次病情，一般為揚花后21d～25d。

7.2調(diào)查方法及項目

調(diào)查接種麥穗的嚴重度，按照NY/T1443.4計算平均嚴重度、發(fā)病率和病情指數(shù)。

嚴重度分級及其對應(yīng)的癥狀描述見表1。

表1小麥赤霉病嚴重度分級及其癥狀描述

嚴重度分級癥狀描述

0麥穗無病

1發(fā)病小穗占總小穗數(shù)＜25.0%

225.0%≤發(fā)病小穗占總小穗數(shù)＜50.0%

350.0%≤發(fā)病小穗占總小穗數(shù)＜75.0%

4發(fā)病小穗占總小穗數(shù)≥75.0%

8抗性評價標準

8.1噴霧接種條件下的抗性評價標準

8.1.1噴霧接種條件下的抗性評價

當(dāng)鑒定圃高感對照品種病穗率達到50%以上，該批次抗赤霉病鑒定視為有效。依據(jù)鑒定材料發(fā)病程

度（病情指數(shù)）確定其對赤霉病的抗性水平（見表2）。

表2噴霧接種條件下小麥赤霉病抗性評價標準

病情指數(shù)抗性評價

DI=0免疫Immune(I)

0＜DI＜DICK-HR高抗HighlyResistant(HR)

DICK-HR≤DI＜DICK-MR中抗Moderatelyresistant(MR)

DICK-MR≤DI≤DICK-MS中感Moderatelysusceptible(MS)

DI＞DICK-MS高感Highlysusceptible(HS)

注：DI：病情指數(shù)；DICK-HR：高抗對照寧麥13病情指數(shù)；DICK-MR：中抗對照鄭麥9023病情指數(shù)；DICK-MS：中感對照西農(nóng)

979病情指數(shù)。

8.1.2噴霧接種條件下的抗毒素積累評價

收獲期將各個品種的麥穗分別裝入網(wǎng)袋10穗一組共3組，分別脫粒，進行DON毒素含量測定。DON毒

素含量測定按照GB5009.111。按照表3進行抗毒素積累評價。

表3噴霧接種條件下小麥抗毒素積累評價標準

DON毒素含量(mg/kg)抗性評價

DON≤1高抗HighlyResistant(HR)

1＜DON≤10中抗Moderatelyresistant(MR)

10＜DON≤20中感Moderatelysusceptible(MS)

DON＞20高感Highlysusceptible(HS)

3

DB41/T2391—2023

8.2單花滴注接種條件下的抗性評價標準

8.2.1單花滴注接種條件下的抗性評價

當(dāng)高感對照品種平均嚴重度達到3級以上時，該批次材料抗赤霉病鑒定視為有效。依據(jù)鑒定材料的

病害發(fā)生平均嚴重度確定其對赤霉病的抗性水平，劃分標準見表4。

表4單花滴注接種條件下小麥赤霉病抗性評價標準

平均嚴重度抗性評價

平均嚴重度=0免疫Immune(I)

平均嚴重度＜平均嚴重度CK-HR高抗HighlyResistant(HR)

平均嚴重度CK-HR≤平均嚴重度＜平均嚴重度CK-MR中抗Moderatelyresistant(MR)

平均嚴重度CK-MR≤平均嚴重度≤平均嚴重度CK-MS中感Moderatelysusceptible(MS)

平均嚴重度＞平均嚴重度CK-MS高感Highlysusceptible(HS)

注：平均嚴重度CK-HR：高抗對照寧麥13平均嚴重度；平均嚴重度CK-MR：中抗對照鄭麥9023平均嚴重度；平均嚴重

度CK-MS：中感對照西農(nóng)979平均嚴重度

8.2.2單花滴注接種條件下的抗毒素積累評價

收獲期將各個品種的麥穗分別裝入網(wǎng)袋10穗一組共3組，分別脫粒，進行DON毒素含量測定。DON毒

素含量測定按照GB5009.111。依據(jù)表5進行抗毒素積累評價。

表5單花滴注接種條件下小麥抗毒素積累評價標準

DON毒素含量(ppm)抗性評價

DON≤1高抗HighlyResistant(HR)

1＜DON≤5中抗Moderatelyresistant(MR)

5＜DON≤10中感Moderatelysusceptible(MS)

DON＞10高感Highlysusceptible(HS)

9抗性評價

應(yīng)選擇一種或多種方法進行抗性評價。若用兩種接種方法綜合確定抗性水平時，通常以最高級別（病

情指數(shù)或平均嚴重度）為準。

10重復(fù)鑒定

鑒定中表現(xiàn)為高抗、中抗和中感的材料，次年重復(fù)鑒定。當(dāng)兩年抗性鑒定結(jié)果不一致時，以記載的

最高病情級別（病情指數(shù)或平均嚴重度）為準。

11鑒定記載表格

小麥抗赤霉病鑒定原始記錄及結(jié)果記載表格見附錄B。

4

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附錄A

（資料性）

小麥赤霉病病原物

A.1接種菌株的分離、鑒定和選擇

從發(fā)病麥穗上，切取病組織（穎、籽?；蛩胼S等），用75%的乙醇表面消毒3min～5min后，于馬

鈴薯蔗糖瓊脂（PDA）平板上進行培養(yǎng)，分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子鑒定后，通過分離物純化及致病性測定，

篩選強致病力菌株，冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

形態(tài)學(xué)鑒定：無性態(tài)為禾谷鐮孢FusariumgraminearumSchwabe，屬半知菌類鐮孢屬（Fusarium）

真菌。其大型分生孢子鐮刀形，有隔膜3～7個，頂端鈍圓，基部足細胞明顯，單個孢子無色，聚集在一

起呈粉紅色黏稠狀。小型孢子很少產(chǎn)生。有性態(tài)為玉蜀黍赤霉Gibberellazeae(Schiwein)Petch，屬

子囊菌門（Ascomycotina）、核菌綱（Pyrenomycetes）、肉座菌目（Hypocreales）、肉座菌科（Hypocreaceae），

赤霉屬（Gibberella）真菌。子囊殼散生或聚生于寄主組織表面，略包于子座中，梨形，有孔口，頂部

呈疣狀突起，紫紅或紫藍至紫黑色。子囊無色，棍棒狀，大小70.0μm～74.2μm×8.9μm～9.2μm，內(nèi)

含8個子囊孢子。子囊孢子無色，紡錘形，兩端鈍圓，多為3個隔膜，19.6μm～22.4μm×3.6μm～4.6μm。

分子生物學(xué)鑒定：收集菌絲并提取DNA，然后用禾谷鐮孢特異性引物Fg16F/R（Fg16F:5'-

CTCCGGATATGTTGCGTCAA-3'，F(xiàn)g16R:5'-GGTAGGTATCCGACATGGCAA-3'）進行擴增，條帶大小為400bp～

500bp；或用EF-1α（EF1:5'-ATGGGTAAGGA(A/G)GACAAGAC-3'，EF2:

5'-GGA(G/A)GTACCAGT(G/C)ATCATGTT-3'）擴增測序，序列比對參照GenBank登錄號:AF212455(禾谷鐮

孢菌株NRRL5883)。

推薦使用保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心的5個代表性強致病力菌株（表A.1）。

表A.1標準菌株（保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心）

菌株編號來源名稱保存編號

14AY1-2河南省安陽市禾谷鐮孢CGMCC3.20314

14KF3-8河南省開封市禾谷鐮孢CGMCC3.20318

14LY9-2-4河南省洛陽市禾谷鐮孢CGMCC3.20317

14YY1-3河南省新鄉(xiāng)市禾谷鐮孢CGMCC3.20315

14ZK1-4河南省周口市禾谷鐮孢CGMCC3.20316

A.2接種體的制備

分生孢子接種體制備：稱取一定量的綠豆，按綠豆：水=6:100比例加入水，加熱煮沸，換小火繼

續(xù)加熱10min，分裝至三角瓶中，在121℃下滅菌30min，冷卻后即制成綠豆培養(yǎng)液。將PDA培養(yǎng)基平板

活化培養(yǎng)的病菌接種于經(jīng)高壓滅菌的綠豆培養(yǎng)液中，在25℃下振蕩培養(yǎng)（150r/min），4d～5d后進

行鏡檢，確認大量產(chǎn)生分生孢子后，配制接種懸浮液。懸浮液中分生孢子濃度調(diào)至每毫升5×105個和5

×104個，分別用于單花滴注接種和噴霧接種。若暫時不接種，可將接種懸浮液置于4℃冰箱中冷藏保

存5d～6d。

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附錄B

（資料性）

小麥赤霉病抗性鑒定原始記錄及結(jié)果鑒定表

小麥赤霉病抗性鑒定原始記錄及結(jié)果鑒定表見表B.1。

表B.1年小麥赤霉病抗性鑒定原始記錄及結(jié)果鑒定表

噴霧接種單花滴注接種

編品種來嚴重度及病情指數(shù)嚴重度抗性

抗性抗性

號名稱源01234病情01234平總評

評價評價

級級級級級指數(shù)級級級級級均

注1：鑒定地點茬口

注2：接種病原菌分離物編號

注3：接種日期調(diào)查日期

注4：播種日期收獲日期

6

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目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4抗性鑒定圃設(shè)置.....................................................................2

5病原物接種體.......................................................................2

6接種方法...........................................................................2

7病情調(diào)查...........................................................................2

8抗性評價標準.......................................................................3

9抗性評價...........................................................................4

10重復(fù)鑒定..........................................................................4

11鑒定記載表格......................................................................4

附錄A（資料性）小麥赤霉病病原物.....................................................5

附錄B（資料性）小麥赤霉病抗性鑒定原始記錄及結(jié)果鑒定