DB32T 3627-2019 菊花種質(zhì)資源離體保存技術(shù)規(guī)程　

備案號(hào)：DB32TechnicalRegulationforconservationofchrysanthemumgermplasminvitro江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京華之彩園藝1菊花種質(zhì)資源離體保存技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)適用于菊花種質(zhì)資源的離體保存，菊屬其他種質(zhì)資源保存可參凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）常溫離體保存conservationatroomtemp在常溫（25℃±2℃)下保存正常生長(zhǎng)的離體保存物的方式。低溫離體保存conservationatlowtemperature在液氮（-196℃)中保存離體材料，使之代謝和生長(zhǎng)基本停止，生物學(xué)狀態(tài)相對(duì)穩(wěn)定的離體保存方4材料要求4.1基本要求2b)依據(jù)DNY/T1491規(guī)定的方法進(jìn)行病毒檢測(cè)，采用規(guī)格為直徑(18～30)mm×長(zhǎng)(160～200)mm的試管，用內(nèi)置硅膠圈的密封塑料蓋3蔗糖+7g/L瓊脂，該方法適宜地被、盆栽型菊花b)添加抑制型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)法：低溫（5±2）℃下，MS+0.3mg/6-BA+0.1mg/LNA資源宜添加低劑量ABA或甘露醇，切花型資源宜采用較高選擇符合4.1條件的材料并按照4.2要求詳細(xì)登記，利用生根培養(yǎng)30d左右、生長(zhǎng)整齊一致的無(wú)菌苗（25±2）℃、光照強(qiáng)度2000lx～2500lx、光照時(shí)間16h/d，培養(yǎng)采用規(guī)格為直徑(15～20)mm×長(zhǎng)(120～160)mm試管，用內(nèi)置硅膠圈的密封塑料蓋，在無(wú)菌條件下，通過(guò)解剖鏡逐層剝?nèi)ネ鈱尤~片,切取1mm～2mm大小的莖尖。入裝載溶液中，室溫（25±2）℃下暗處理30min，取出后用無(wú)菌濾紙吸去多余裝載液。將包有莖尖的棉紙團(tuán)轉(zhuǎn)入玻璃化保護(hù)劑PVS2（附錄B冰浴條件下處理15min。4將脫水（玻璃化）處理后包有莖尖的棉紙團(tuán)轉(zhuǎn)移至裝有預(yù)冷新鮮玻璃化試劑凍后再生率≥20%，變異率≤1%；無(wú)菊花B病毒（CVB在無(wú)菌條件下，快速將冷凍管從液氮轉(zhuǎn)移至40℃水浴中，劇烈震蕩120s。然后將包有莖尖的棉紙將化凍后包有莖尖的棉紙團(tuán)轉(zhuǎn)移到卸載液（附錄B室溫（25±2）℃下放置10min，中間5min時(shí)換一次卸載液。然后將棉紙團(tuán)展開(kāi)，莖尖在卸載液中懸浮5min。5