DB32-T 4450-2023 固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒操作規(guī)程

CCSC00江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4450—2023固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒操作規(guī)程o-2023-02-06發(fā)布2023-03-06實(shí)施江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局DB32/T4450—2023前言 Ⅲ1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 24.1受試物來(lái)源 24.2受試物分類處理 24.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備 24.4實(shí)驗(yàn)儀器準(zhǔn)備 24.5劑量設(shè)計(jì) 25實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容 35.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒環(huán)境 35.2染毒系統(tǒng)過(guò)程控制 35.2.1染毒穩(wěn)定狀態(tài)確定 35.2.2染毒濃度控制和采樣要求 35.2.3染毒濃度計(jì)算 35.2.4染毒氣溶膠的粒徑檢測(cè) 45.2.5染毒過(guò)程中動(dòng)物監(jiān)護(hù)和記錄 45.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作 45.3.1染毒結(jié)束清洗消毒 45.3.2廢棄物處置 4參考文獻(xiàn) 5IDB32/T4450—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省疾病預(yù)防控制中心提出。本文件由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位:江蘇省疾病預(yù)防控制中心、北京慧榮和科技有限公司、江蘇恒生檢測(cè)有限公司、南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院。ⅢDB32/T4450—2023固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒操作規(guī)程1范圍本文件確定了固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒的程序,規(guī)定了經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒的實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備和實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容。本文件適用于化學(xué)品毒性鑒定機(jī)構(gòu)和其他科研機(jī)構(gòu)的固態(tài)化學(xué)品經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒試驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T15670.12—2017農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法第12部分:短期重復(fù)吸入染毒(28天)毒性試驗(yàn)GB/T21605—2008化學(xué)品急性吸入毒性試驗(yàn)方法GB/T21754—2008化學(xué)品28天/14天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)方法GB/T21765—2008化學(xué)品亞慢性吸入毒性試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入染毒dynamicexposurefororal-nasalinhalation采用經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入設(shè)備,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保定在動(dòng)物固定器內(nèi),使其口鼻部充分暴露在染毒腔,在一定時(shí)間內(nèi)持續(xù)吸入通過(guò)專用發(fā)生裝置發(fā)生的質(zhì)量濃度穩(wěn)定的受試樣品的染毒方式。3.2半數(shù)致死濃度(LC50)medianlethalconcentration在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)呼吸道吸入受試樣品后引起受試動(dòng)物發(fā)生死亡概率為50%的濃度,以單位體積空氣中受試樣品的質(zhì)量(mg/m3)來(lái)表示。[來(lái)源:GB/T21605—2008,2.2]3.3質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑massmedianaerodynamicdiameter;MMAD由空氣動(dòng)力學(xué)直徑大小不一的顆粒組成的氣溶膠樣品中,小于和等于某一空氣動(dòng)力學(xué)直徑(例如5μm)的顆粒占?xì)馊苣z樣品總質(zhì)量或總重量50%時(shí),則該氣溶膠顆?？諝鈩?dòng)力學(xué)直徑即為此氣溶膠樣品的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(5μm)。[來(lái)源:GB/T15670.12—2017,3.8]1DB32/T4450—20234實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備4.1受試物來(lái)源受試物為固態(tài)化學(xué)品。受試物應(yīng)注明樣品名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量(或規(guī)格)、保存條件、開封日期、配制方法、配制日期及有效期等。如使用賦型劑,所用賦形劑應(yīng)標(biāo)明批號(hào)、規(guī)格和生產(chǎn)廠家。4.2受試物分類處理實(shí)驗(yàn)前應(yīng)使用合適尺寸的超分篩等設(shè)備把受試物篩出較細(xì)顆粒物。根據(jù)受試物特性,其發(fā)生處理方式可分為以下幾類?！鲃?dòng)性強(qiáng),吸濕性較弱,易于發(fā)生的受試物,可使用相應(yīng)粉塵發(fā)生器直接發(fā)生;—流動(dòng)性強(qiáng),吸濕性較強(qiáng),開封后不能長(zhǎng)時(shí)間放置的受試物,發(fā)生過(guò)程中應(yīng)保持密封?？墒褂貌捎眯D(zhuǎn)電刷式原理的發(fā)生器或者其他在發(fā)生過(guò)程中能夠保持受試物密封的發(fā)生器發(fā)生;—流動(dòng)性弱的受試物,需與賦形劑混勻后發(fā)生處理。用于配比的賦形劑如無(wú)明確數(shù)據(jù)表明其毒性作用,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)增加空白對(duì)照組確認(rèn)賦形劑對(duì)受試動(dòng)物的影響。注:受試物的處理和發(fā)生,應(yīng)考慮操作人員的安全。對(duì)于毒性較高的受試物,建議稀釋后進(jìn)行染毒實(shí)驗(yàn)。若受試物具有潛在的易燃性或易爆性,應(yīng)采取相應(yīng)的防燃防爆措施。4.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,選擇合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,嚙齒類動(dòng)物首選健康成年大鼠,非嚙齒類動(dòng)物首選健康成年犬,必要時(shí)可以選擇非人靈長(zhǎng)類,也可以選擇其他敏感動(dòng)物,但應(yīng)說(shuō)明原因。應(yīng)使用具有質(zhì)量合格證的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,同性別的各劑量組個(gè)體間體重相差不超過(guò)平均體重的±20%。試驗(yàn)開始前,應(yīng)進(jìn)行固定器預(yù)適應(yīng),根據(jù)動(dòng)物種屬選擇相應(yīng)固定器,預(yù)適應(yīng)時(shí)間由短逐漸延長(zhǎng)至正式實(shí)驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)度,一般為3天至5天,非人靈長(zhǎng)類宜增加適應(yīng)性訓(xùn)練的時(shí)間和頻率。在染毒時(shí),動(dòng)物固定器不宜對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物施加不適當(dāng)?shù)奈锢?、熱或壓迫?過(guò)強(qiáng)的外力限制會(huì)影響動(dòng)物的生理指標(biāo)。4.4實(shí)驗(yàn)儀器準(zhǔn)備應(yīng)使用經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入儀器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入儀器包括但不限于粉塵發(fā)生器、吸入暴露塔、質(zhì)量濃度檢測(cè)儀、流量稀釋器、濾膜采樣器、流量級(jí)聯(lián)撞擊器、粒徑譜儀、環(huán)境參數(shù)監(jiān)測(cè)調(diào)節(jié)設(shè)備、送排風(fēng)及廢氣處理設(shè)備等。正式實(shí)驗(yàn)開始前,應(yīng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定合適的實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置,包括進(jìn)氣流量、抽氣流量、稀釋流量、采樣流量及時(shí)間、壓差、氣溶膠發(fā)生器的樣品進(jìn)給速度,受試物的使用量等。4.5劑量設(shè)計(jì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康陌凑障鄳?yīng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行劑量設(shè)計(jì),急性吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)按照GB/T21605—2008中的5.2條款內(nèi)容,28天/14天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)按照GB/T21754—2008中的4.1.2條款內(nèi)容,亞慢性吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)按照GB/T21765—2008中的4.4條款內(nèi)容,慢性吸入毒性試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)參照《化學(xué)品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)監(jiān)督發(fā)〔2005〕272號(hào))的相關(guān)規(guī)定。當(dāng)儀器需要重復(fù)使用時(shí),不同劑量染毒試驗(yàn)應(yīng)由低濃度到高濃度進(jìn)行。2DB32/T4450—20235實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容5.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒環(huán)境染毒時(shí),應(yīng)保持染毒腔內(nèi)溫度在22℃±3℃,相對(duì)濕度在30%~70%范圍,氧含量不低于19%,二氧化碳含量不高于1%,染毒腔和設(shè)備外部通風(fēng)櫥之間應(yīng)保持微負(fù)壓,以保證染毒腔內(nèi)的受試物氣溶膠不會(huì)擴(kuò)散到外部通風(fēng)櫥。至少每小時(shí)記錄一次環(huán)境參數(shù)和樣品使用量,并確保每個(gè)暴露口足夠的受試物氣溶膠通氣量。5.2染毒系統(tǒng)過(guò)程控制5.2.1染毒穩(wěn)定狀態(tài)確定應(yīng)用經(jīng)口鼻動(dòng)式吸入儀器進(jìn)行染毒實(shí)驗(yàn)前,應(yīng)對(duì)染毒腔受試物濃度進(jìn)行調(diào)試。如果連續(xù)兩次測(cè)定的結(jié)果能夠證明染毒腔內(nèi)受試物的濃度相對(duì)恒定,即固體受試物在目標(biāo)濃度的±20%范圍內(nèi)波動(dòng),則認(rèn)為染毒系統(tǒng)濃度是穩(wěn)定的,并記錄到達(dá)穩(wěn)定所需時(shí)間,否則需要繼續(xù)調(diào)試。待染毒系統(tǒng)濃度確認(rèn)穩(wěn)定后,將動(dòng)物裝入固定器中并盡快固定于染毒腔,記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒開始與結(jié)束時(shí)間、染毒時(shí)進(jìn)氣流量、抽氣流量、稀釋流量、采樣流量及時(shí)長(zhǎng)、壓差、氣溶膠發(fā)生器的樣品進(jìn)給速度、受試物的使用量等。5.2.2染毒濃度控制和采樣要求染毒實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)對(duì)受試物經(jīng)發(fā)生器產(chǎn)生的受試物濃度進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。受試物濃度應(yīng)通過(guò)間斷(至少30min采樣一次)或連續(xù)采樣進(jìn)行測(cè)定。設(shè)置采樣流量時(shí),應(yīng)減少對(duì)染毒腔穩(wěn)態(tài)氣流造成不必要的干擾,在必要情況下,如濃度較低可考慮增加采樣流量或延長(zhǎng)采樣時(shí)間。應(yīng)采用可靠的檢測(cè)方法進(jìn)行濃度監(jiān)控,如濾膜稱重法或光學(xué)檢測(cè)儀檢測(cè)。若使用光學(xué)檢測(cè)儀器檢測(cè)濃度,應(yīng)提前校準(zhǔn)光學(xué)檢測(cè)儀的顯示系數(shù),并且定期檢測(cè)受污染程度確保在可接受范圍,在檢測(cè)多成分受試物時(shí),應(yīng)有相應(yīng)證明氣溶膠狀態(tài)下物質(zhì)和開始物質(zhì)有相似的分析數(shù)據(jù),如無(wú)法證明上述信息,則應(yīng)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有規(guī)律的進(jìn)行間隔采樣分析。固態(tài)化學(xué)品吸入染毒過(guò)程中,變異系數(shù)(CV值=標(biāo)準(zhǔn)差與平均濃度的比值%)不超過(guò)20%。5.2.3染毒濃度計(jì)算染毒濃度應(yīng)直接測(cè)定動(dòng)物呼吸帶的實(shí)際濃度,多次測(cè)定后取平均值,根據(jù)染毒濃度判定受試物的LC50。采用濾膜稱重法測(cè)定濃度時(shí),至少每30min測(cè)定一次,取平均值,以公式(1)計(jì)算:×1000…………(1)式中:C—染毒濃度,單位為毫克每立方米(mg/m3);M2—稱重后濾膜質(zhì)量,單位為毫克(mg);M1—稱重前濾膜質(zhì)量,單位為毫克(mg);Q—采樣流量,單位為升每分鐘(L/min);T—采樣時(shí)間,單位為分鐘(min)。當(dāng)受試樣品采用賦形劑稀釋時(shí),以公式(2)計(jì)算:×1000…………3DB32/T4450—2023式中:R—受試樣品在賦形劑中的含量(%,質(zhì)量比)。注:公式(1)和公式(2)中,1000為單位換算系數(shù)。5.2.4染毒氣溶膠的粒徑檢測(cè)對(duì)于固態(tài)化學(xué)品制備的氣溶膠,應(yīng)對(duì)氣溶膠粒徑進(jìn)行連續(xù)測(cè)定和監(jiān)控,至少每30min采樣一次,氣溶膠的MMAD值應(yīng)在1μm~4μm范圍內(nèi),且連續(xù)兩次測(cè)定的MMAD值的波動(dòng)范圍在10%之內(nèi),幾何標(biāo)準(zhǔn)差在1.5~3.0之間。5.2.5染毒過(guò)程中動(dòng)物監(jiān)護(hù)和記錄染毒過(guò)程中,應(yīng)觀察受試物和固定器對(duì)受試動(dòng)物的影響,并記錄實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物狀態(tài)。如動(dòng)物出現(xiàn)體位反轉(zhuǎn)等異常情況,應(yīng)及時(shí)調(diào)整,受試動(dòng)物的體位變化可能導(dǎo)致吸入染毒濃度不足,或?qū)е轮舷⑺劳?。觀察并記錄動(dòng)物外觀、肢體活動(dòng)、行為方式以及呼吸狀態(tài)等變化發(fā)生的時(shí)間、程度和持續(xù)時(shí)間,尤其需要記錄口鼻部是否有異常分泌物以及眼球部是否有出血充血現(xiàn)象。5.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作5.3.1染毒結(jié)束清洗消毒染毒結(jié)束后,按照染毒開始時(shí)的安裝順序,逐次取下固定器并取出動(dòng)物,拆卸暴露腔和管路,將暴露塔底部沉積樣品收集后,對(duì)暴露腔和管路用洗滌劑浸泡,用清水沖洗干凈,避免殘留樣品對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)影響。對(duì)于難以除去的殘留受試物可用高壓水槍或超聲波清洗,必要時(shí)使用中性洗滌劑清洗。清洗晾干后