《干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像操作規(guī)程》

ICS11.100

CCSC27

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/XXXXX00XX—2023

干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像操作規(guī)程

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（征求意見(jiàn)稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

發(fā)布

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干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像操作規(guī)程

1范圍

本文件確立了干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像的操作程序，規(guī)定了操作中使用的試劑材料與儀器設(shè)

備，干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像操作程序的構(gòu)成，以及各步驟的操作指示和各步驟之間的轉(zhuǎn)換條件，

描述了干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像的追溯方法。

本文件適用于干細(xì)胞小鼠體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像試驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489—2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

HJ421醫(yī)療廢物專(zhuān)用包裝袋、容器和警示標(biāo)志標(biāo)準(zhǔn)

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4符號(hào)和縮略語(yǔ)

下列符號(hào)和縮略語(yǔ)適用于本文件。

CAS：美國(guó)化學(xué)文摘服務(wù)社（ChemicalAbstractsService）

CCK-8：細(xì)胞試劑（CellCountingKit-8）

DAPI：4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)

FLI：熒光成像（fluorescenceimaging）

FBS：胎牛血清（fetalcalfserum）

PBS：磷酸緩沖鹽溶液（phosphatebufferedsaline）

PbS：硫化鉛（leadsulfide）

Rnase—A：核糖核酸酶A(RibonucleaseA)

Sulfo—SMCC：4-(N-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽

（4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylicacid3-sulfo-N-hydroxysuccinimideester

sodiumsalt）

α-MEM：α最低必須培養(yǎng)基（alphaminimalessentialmedium）

5試劑材料與儀器設(shè)備

1

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5.1試劑材料

5.1.1除非另有說(shuō)明，本試驗(yàn)所有試劑應(yīng)符合制造商認(rèn)證的細(xì)胞培養(yǎng)等級(jí)。其他試劑應(yīng)選盡可能高的

純度。

5.1.2本試驗(yàn)所用的水應(yīng)為電阻率大于5MΩ?cm的純水。其他試劑材料應(yīng)符合表1的要求。

表1試劑材料清單

序號(hào)試劑材料名稱(chēng)用途濃度配比要求調(diào)配方法

1Ⅱ型膠原酶細(xì)胞培養(yǎng)0.03g/mlCASNo:9001-12-1

1000mg/LD-葡萄糖，

292mg/LL-谷氨酰胺，

2α—MEM培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)/110mg/L丙酮酸鈉，

2200mg/L碳酸氫鈉，

pH值7.0～7.4

3胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)0.02g/ml

4青霉素（PNC）細(xì)胞培養(yǎng)100U/ml

5鏈霉素（SM）細(xì)胞培養(yǎng)100U/ml

6胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)2mg/ml

7地塞米松細(xì)胞培養(yǎng)0.1μmol/L

維生素C磷酸細(xì)胞培養(yǎng)50μmol/L

8

鹽

9β--磷酸甘油細(xì)胞培養(yǎng)10mmol/L

3--異丁基--1--細(xì)胞培養(yǎng)0.5mmol/L

10

甲基黃嘌呤

11胰島素細(xì)胞培養(yǎng)10μmol/L

12鈣黃綠素細(xì)胞活性檢測(cè)2μmmol/L

13碘化丙啶細(xì)胞周期測(cè)試8μmmol/L

14油紅O染液染色5mg/ml

15硫代硫酸鈉量子點(diǎn)合成10mmol/L

16醋酸鉛Pb（ACO2）量子點(diǎn)合成10mmol/L

17硫化鈉（Na2S）量子點(diǎn)合成10mmol/L

18氫氧化鈉（NaOH）量子點(diǎn)合成1/6mol/L

19Rnase--A酶細(xì)胞標(biāo)記50mg/ml

20穿膜肽Tat化學(xué)交聯(lián)10mg/ml

21Sulfo--SMCC染色1mg

22DAPI染液穩(wěn)定性試驗(yàn)5mg/ml

23酒精消毒75%醫(yī)用酒精

24CCK--8試劑盒細(xì)胞增值能力測(cè)試/

堿性磷酸酶檢測(cè)細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化測(cè)試/

25

試劑盒

26小鼠細(xì)胞提取與動(dòng)物模型建立/近交系，6周齡以上

5.2儀器設(shè)備

2

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儀器設(shè)備的用途及要求應(yīng)符合表2的規(guī)定。

表2儀器設(shè)備清單

序號(hào)儀器設(shè)備名稱(chēng)用途要求

1制冰機(jī)細(xì)胞試驗(yàn)雪花樣冰

2自動(dòng)酶標(biāo)儀細(xì)胞試驗(yàn)200nm～1000nm全波長(zhǎng)

3常溫離心機(jī)量子點(diǎn)合成3000rpm/min

4電子天平量子點(diǎn)合成精度0.0001g

5脫色搖床細(xì)胞標(biāo)記轉(zhuǎn)速0rpm～240rpm，定時(shí)范圍＞24h

6高壓蒸汽滅菌器細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物試驗(yàn)121℃，103.4kPa

7細(xì)胞培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)條件：37℃，CO25%

8流式細(xì)胞儀細(xì)胞試驗(yàn)熒光分辨率2%

9熒光倒置顯微鏡細(xì)胞試驗(yàn)配備汞燈

近紅外熒光倒置顯微鏡細(xì)胞試驗(yàn)配備808nm激發(fā)光源、1250nm長(zhǎng)通或1300nm帶通濾

10

光片

環(huán)形聚焦單模微波合成系統(tǒng)量子點(diǎn)合成反應(yīng)參數(shù)：70℃，30s

11

微波反應(yīng)器

小動(dòng)物近紅外活體成像系統(tǒng)小動(dòng)物活體成像配備808nm激發(fā)光源、1250nm長(zhǎng)通或1300nm帶通濾

12

光片

電感耦合等離子體發(fā)射光譜量子點(diǎn)理化特性測(cè)量波長(zhǎng)：200nm～1500nm

13

儀

6干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像程序的構(gòu)成

干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像程序包括間充質(zhì)干細(xì)胞提取、間充質(zhì)干細(xì)胞檢驗(yàn)、近紅外PbS量子

點(diǎn)的制備（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“量子點(diǎn)制備”）、曝光觀察、近紅外PbS量子點(diǎn)標(biāo)記間充質(zhì)干細(xì)胞（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“細(xì)

胞標(biāo)記”）、近紅外PbS量子點(diǎn)標(biāo)記后間充質(zhì)干細(xì)胞體外成像（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“體外成像”）、近紅外PbS

量子點(diǎn)與間充質(zhì)干細(xì)胞的生物相容性測(cè)試（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“生物相容性測(cè)試”）、近紅外PbS量子點(diǎn)標(biāo)記間

充質(zhì)干細(xì)胞的穩(wěn)定性和靈敏性（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“穩(wěn)定性和靈敏性測(cè)試”）、制作小鼠岡上肌腱撕裂模型（以

下簡(jiǎn)稱(chēng)“動(dòng)物模型建立”）、活體成像10個(gè)階段。程序流程圖如圖1所示。

3

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圖1干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像程序流程圖

7干細(xì)胞體內(nèi)近紅外二區(qū)示蹤成像

7.1間充質(zhì)干細(xì)胞的提取

7.1.1近紅外二區(qū)示蹤成像體內(nèi)觀測(cè)使用的間充質(zhì)干細(xì)胞可為商用間充質(zhì)干細(xì)胞或自行提取的間充質(zhì)

干細(xì)胞。

7.1.2自行從小鼠四肢長(zhǎng)骨骨實(shí)質(zhì)中提取間充質(zhì)干細(xì)胞的操作方法如下：

a)取6周齡至8周齡的BALB/c小鼠，頸椎脫臼處死小鼠后，完全浸泡在75%酒精中消毒5min；

b)分離出小鼠肱骨、股骨和脛骨，去除長(zhǎng)骨上的肌肉及其附著組織；

c)保留肱骨、股骨和脛骨的骨干，去除干骺端，用含有2%FBS的α—MEM培養(yǎng)基（以下簡(jiǎn)稱(chēng)培

養(yǎng)基）反復(fù)沖洗骨髓腔三遍以上去除造血干細(xì)胞；

33

d)沖洗后的骨干剪碎成1mm～3mm細(xì)小骨片，用3%的Ⅱ型膠原酶消化60min；

2

e)用含有2%FBS的α—MEM培養(yǎng)基反復(fù)沖洗細(xì)小骨片去除Ⅱ型膠原酶，然后將骨片種植到25cm

培養(yǎng)瓶中，加入間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系；

f)所有細(xì)胞在37℃，5%CO2和飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)至70%～80%匯合時(shí)，

0.25%胰酶消化傳代。留取第三代細(xì)胞（P3）備用。

7.1.3只準(zhǔn)許符合下列要求的間充質(zhì)干細(xì)胞用于量子點(diǎn)標(biāo)記。

a)為自然貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)為梭形，-80℃冷凍保存的細(xì)胞需復(fù)蘇使用。

b)活力良好（95%以上），增值能力，分化能力（成脂、成骨）正常。

7.1.4提取的間充質(zhì)干細(xì)胞若不滿(mǎn)足7.1.3要求，應(yīng)按7.1.2步驟重新提取或重新購(gòu)買(mǎi)商用間充質(zhì)干

細(xì)胞

7.2量子點(diǎn)的制備

近紅外二區(qū)PbS量子點(diǎn)制備的操作方法如下：

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a)將500μl的10mmol/LPb(ACO2)2溶液加入10ml可微波試管中，隨后加入50mg/mlRnase

—A溶液500μl，吹打混勻。再加入1/6mol/LNaOH溶液30μl～33μl（確保體系的pH在9～

11的范圍內(nèi)），吹打混勻，得到澄清的反應(yīng)母液；

c)在反應(yīng)母液中加入50μl的10mmol/LNa2S溶液后，放入功率為30W、動(dòng)態(tài)模式（dynamic

model），溫度為70℃的微波反應(yīng)器中30s；

7.3曝光觀察

7.3.1將合成的PbS量子點(diǎn)放入小動(dòng)物近紅外活體成像系統(tǒng)中，采用808nm激光光源激發(fā)，1100nm

長(zhǎng)通濾光片，曝光時(shí)間為30ms觀察樣品熒光。

7.3.2當(dāng)樣品熒光在曝光時(shí)間小于30ms時(shí)達(dá)到過(guò)曝狀態(tài)，即可進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記。

7.3.3若不滿(mǎn)足7.3.2要求，應(yīng)返回7.2重新進(jìn)行PbS量子點(diǎn)制備。

7.4細(xì)胞標(biāo)記

7.4.1進(jìn)行PbS量子點(diǎn)標(biāo)記間充質(zhì)干細(xì)胞操作方法如下：

a)將1mg的Sulfo—SMCC和1mg的PbS量子點(diǎn)加入到1mlPBS緩沖液（PH7.4）中，使用脫

色搖床在室溫下以小于等于60rpm的轉(zhuǎn)速反應(yīng)2h后，用常溫離心機(jī)在室溫下，3500rpm透

析離心10min，去除多余的Sulfo—SMCC；

b)PbS量子點(diǎn)與穿膜肽Tat以1:1000比例混合，使用脫色搖床在室溫下以小于等于60rpm的轉(zhuǎn)

速反應(yīng)1.5h后，在4℃保存10h以上；

c)過(guò)夜后經(jīng)3500rpm室溫透析離心10min，去除多余的穿膜肽Tat；

d)收集P3間充質(zhì)干細(xì)胞；

e)穿膜肽Tat連接的PbS量子點(diǎn)（10μg/ml）加入到間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基中，37℃孵育12h；

f)棄去原培養(yǎng)基，PBS反復(fù)清洗細(xì)胞，去除未結(jié)合的PbS量子點(diǎn)，直至在清洗液中檢測(cè)不到近紅

外二區(qū)熒光信號(hào)。

g)細(xì)胞懸液在37℃，5%CO2和飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞12h后方可進(jìn)行體外成像。

7.4.2Pb(ACO2)2、Na2S和Rnase-A酶在微波作用下合成的PbS量子點(diǎn)，應(yīng)在808nm激光光源激發(fā)和

1100nm長(zhǎng)通濾光片的條件下發(fā)出明亮熒光，該熒光位于近紅外二區(qū)波段（見(jiàn)圖2）。

圖2PbS量子點(diǎn)的白光和近紅外二區(qū)熒光圖像示意圖

7.5體外成像

5

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7.5.1進(jìn)行近紅外二區(qū)PbS量子點(diǎn)標(biāo)記后的間充質(zhì)干細(xì)胞體外成像的操作方法如下：

a)吸去培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，向PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞中加入4%多聚甲醛，室溫下固定

10min；

b)吸去多聚甲醛，用PBS反復(fù)清洗三遍去除剩余多聚甲醛，加入DAPI染色液，室溫等待10min。

c)PBS反復(fù)清洗三遍，去除多余DAPI染色液，在配有近紅外二區(qū)波段的熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞

質(zhì)的熒光；

7.5.2被標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞的白光、近紅外二區(qū)熒光、DAPI熒光和疊加的顯微圖像參見(jiàn)圖3，標(biāo)尺

為20μm。

圖3被標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞的顯微圖像示意圖

7.5.3只準(zhǔn)許在細(xì)胞質(zhì)中觀察到均勻的近紅外二區(qū)熒光信號(hào)才能進(jìn)行生物相容性測(cè)試，否則按7.4重

新進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記。

7.6生物相容性測(cè)試

7.6.1按照7.4至7.5的方法分別用0與10μg/ml的PbS量子點(diǎn)標(biāo)記間充質(zhì)干細(xì)胞后，應(yīng)按以下步

驟進(jìn)行近紅外二區(qū)PbS量子點(diǎn)與間充質(zhì)干細(xì)胞的生物相容性測(cè)試。

a)細(xì)胞活力測(cè)試：

1)吸去培養(yǎng)基，PBS清洗3次貼壁間充質(zhì)干細(xì)胞，去除多余培養(yǎng)基；

2)向培養(yǎng)皿加入2μmmol/l的鈣黃綠素和8μmmol/l的碘化丙啶。染液沒(méi)過(guò)單層細(xì)胞，37℃

孵育30min；

3)PBS反復(fù)清洗三遍，熒光顯微鏡下觀察間充質(zhì)干細(xì)胞，記錄活細(xì)胞比例，綠染為活細(xì)胞，

紅染為死細(xì)胞。

b)細(xì)胞增殖能力測(cè)試：

3

1)在24孔板中接種間充質(zhì)干細(xì)胞懸液（2×10/孔），按培養(yǎng)基與CCK-8溶液10:1的比例，

將CCK—8溶液加入至24孔板中。

2)將24孔板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育2h，測(cè)定細(xì)胞在450nm處的吸光度。在PbS量子點(diǎn)標(biāo)記

細(xì)胞后的第1d、3d、5d、7d、9d、11d、15d和17d重復(fù)b)操作以觀察標(biāo)記后不

同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖能力。

c)細(xì)胞周期測(cè)試：

6

1)在PbS量子點(diǎn)標(biāo)記細(xì)胞后的第2d收集細(xì)胞懸液，至少5×10個(gè)細(xì)胞；

2)將收集的細(xì)胞固定在冰浴預(yù)冷的70%乙醇中，在4℃的溫度下保存10h以上；

6

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3)1000g離心3min，沉淀間充質(zhì)干細(xì)胞，小心吸出上清，PBS清洗間充質(zhì)干細(xì)胞兩次；

4)每管細(xì)胞樣品中加入0.5ml碘化丙啶染色液，重懸細(xì)胞沉淀，避光溫浴30min后，用流

式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

d)細(xì)胞自我更新能力測(cè)試：

2

1)將PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的細(xì)胞用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋?zhuān)凑?0個(gè)細(xì)胞/cm的密度接種在

六孔板；

2)接種14d后，PBS清洗貼壁細(xì)胞，4%多聚甲醛室溫固定10min；

3)蒸餾水清洗5次，結(jié)晶紫染液室溫染色15min，PBS清洗細(xì)胞兩次，計(jì)數(shù)每組的細(xì)胞集落

數(shù)目。

e)油紅染色細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化測(cè)試：

1)收集不同濃度的PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞，添加成脂誘導(dǎo)體系；

2)在誘導(dǎo)培養(yǎng)第14d，PBS清清洗貼壁細(xì)胞，加入洗貼壁細(xì)胞，加入0.5%的油紅染液，避

光孵育20min；

3)吸出染液，PBS反復(fù)清洗細(xì)胞；

4)顯微鏡下拍照。

f)堿性磷酸酶染色細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化測(cè)試：

1)收集不同濃度的PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞，添加成骨誘導(dǎo)體系；

2)在誘導(dǎo)培養(yǎng)第14d，PBS清洗貼壁細(xì)胞，4%多聚甲醛室溫固定10min；

3)吸出固定液，滴加配置好的堿性磷酸酶孵育液，避光孵育20min；

4)吸出染液，PBS反復(fù)清洗細(xì)胞，顯微鏡下拍照。

7.6.2進(jìn)入穩(wěn)定性和靈敏性檢測(cè)的PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞，應(yīng)符合下例條件：

a)細(xì)胞活力、增值能力、周期、自我更新能力測(cè)試與對(duì)照組之間沒(méi)有明顯差異；

b)油紅染色顯示各組細(xì)胞出現(xiàn)大量脂滴，脂滴連接成環(huán)狀，脂環(huán)大小與對(duì)照組之間沒(méi)有明顯差異；

c)各組細(xì)胞堿性磷酸酶染色均為陽(yáng)性，著色率與對(duì)照組之間沒(méi)有明顯差異。

7.6.37.6.2中a）、b）、c）各項(xiàng)中描述的細(xì)胞指標(biāo)與對(duì)照組之間的比較應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：

a)將近紅外二區(qū)量子點(diǎn)標(biāo)記后的細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)與未標(biāo)記的對(duì)照組細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)用T檢

驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較，包括活力，增值能力，分化能力等。

b)當(dāng)計(jì)量資料符合正態(tài)分布時(shí)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，否則用中位數(shù)表示；計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表

示。多組計(jì)量資料之間的兩兩比較采用T檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料的總體分布未知時(shí)，采用秩和檢驗(yàn)。

采用統(tǒng)計(jì)產(chǎn)品與服務(wù)解決方案（SPSS）23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)，差異具有

統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

c)若SPSS軟件測(cè)定出P＞0.05，則表明標(biāo)記后細(xì)胞性能未受影響，可進(jìn)行體內(nèi)成像試驗(yàn)；若P

≤0.05，則需重新測(cè)量，最多進(jìn)行3次測(cè)量，若3次測(cè)量P均小于等于0.05，則返回7.5重

做。

7.6.4按7.6.3比較后，細(xì)胞指標(biāo)若不滿(mǎn)足7.6.2各項(xiàng)要求，則重新進(jìn)行7.6.1各步驟。7.6.1的試

驗(yàn)最多重復(fù)進(jìn)行三次，若三次都不滿(mǎn)足7.6.2要求，則應(yīng)返回到7.5重新進(jìn)行體外成像。

7.7穩(wěn)定性和靈敏性測(cè)試

7.7.1PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞體外穩(wěn)定性測(cè)試應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：

a)在細(xì)胞遷移小室（transwell）上室與下室之間隔一層孔徑8μm，僅允許PbS量子點(diǎn)穿過(guò)，間

充質(zhì)干細(xì)胞不能通過(guò)的多孔濾膜；

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b)將PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的1×10間充質(zhì)干細(xì)胞接種在transwell上室，未標(biāo)記的1×10間充質(zhì)干

細(xì)胞接種在transwell下室；

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c)接種后的第1d、3d、5d、7d收集細(xì)胞，并按7.5.1步驟進(jìn)行DAPI染色與成像：

7.7.2PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)靈敏度和穩(wěn)定性測(cè)試應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：

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a)PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的不同數(shù)量的間充質(zhì)干細(xì)胞（1×10、2×10、5×10、2×10和2×10）皮下

移植在裸鼠背部；

b)在移植后的第1d、7d、14d、21d和28d對(duì)裸鼠進(jìn)行近紅外二區(qū)活體成像，采用808nm

激光光源激發(fā)，1100nm長(zhǎng)通濾光片，曝光時(shí)間為100ms，觀察各組細(xì)胞熒光情況；

c)用ImageJ軟件測(cè)定熒光強(qiáng)度，評(píng)估移植后第1天細(xì)胞數(shù)量與近紅外二區(qū)熒光強(qiáng)度的相關(guān)性。

7.7.3只準(zhǔn)許體外細(xì)胞標(biāo)記穩(wěn)定性良好，下室未觀察到熒光信號(hào)，體內(nèi)成像靈敏度達(dá)1×103個(gè)細(xì)胞，

且至少7天穩(wěn)定成像后方可進(jìn)行活體成像。

7.7.4PbS量子點(diǎn)標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞若不滿(mǎn)足7.7.3的要求，則從7.7重新開(kāi)始測(cè)試，若重新測(cè)試

三次仍不能滿(mǎn)足7.7.3的要求，則返回7.4。

7.8動(dòng)物模型建立

7.8.1制備小鼠岡上肌腱撕裂動(dòng)物模型步驟如下：

a)麻醉小鼠后，用碘伏消毒手術(shù)側(cè)整個(gè)前肢；

b)在小鼠肩關(guān)節(jié)外側(cè)行一個(gè)約10mm的橫形切口，暴露三角??；

c)根據(jù)肌肉上的血管辨認(rèn)肌肉邊緣（參見(jiàn)圖4）；

d)切開(kāi)三角肌，外展外旋肩關(guān)節(jié)，暴露岡上?。▍⒁?jiàn)圖5）；

圖4三角肌肌肉邊界示意圖

圖5岡上肌示意圖

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e)辨認(rèn)岡上肌腱，用5-0縫線游離岡上?。▍⒁?jiàn)圖6）；

圖65-0Prolene縫線游離岡上肌示意圖

f)8-0縫線對(duì)岡上肌腱進(jìn)行改良編織縫合（參見(jiàn)圖7）；