(高清版)DB52∕T 1661-2022 地方雞資源場禽白血病凈化技術(shù)規(guī)程

地方雞資源場禽白血病凈化技術(shù)規(guī)程2022-03-03發(fā)布2022-06-01實施I前言 II 32規(guī)范性引用文件 33術(shù)語和定義 34養(yǎng)殖條件與要求 4 46凈化流程與方法 4 58凈化效果與評估 5 510養(yǎng)殖檔案記錄 5附錄A(規(guī)范性)主要試劑與主要儀器 6附錄B(資料性)養(yǎng)殖檔案記錄 7本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由貴州省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：貴州省畜牧獸醫(yī)研究所、貴州省畜禽資源管理站、榕江縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、貴州省榕江山農(nóng)發(fā)展有限責(zé)任公司。本文件主要起草人：文正常、王璇、唐繼高、張蕓、潘淑惠、王永春、張楊子、冉江、姜兆芳、黎恒銘、沈德林、劉嘉、明煒、陳亞亞、吳瑪彤。3僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682分析實驗室用水規(guī)則和試驗方法GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB/T26436禽白血病診斷技術(shù)NY/T388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY/T680禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫NY5027畜禽飲用水水質(zhì)中華人民共和國農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義禽白血病病毒p27抗原p27抗原為禽白血病病毒衣殼蛋白，該蛋白在各亞群之間具有高度的同源性和保守性，為群特異性44.1資源場養(yǎng)殖環(huán)境空氣質(zhì)量應(yīng)符合GB3095的規(guī)定；飼料衛(wèi)生應(yīng)符合GB13078的規(guī)定；飲用水水質(zhì)應(yīng)符合NY5027的要求；場環(huán)境質(zhì)量應(yīng)符合NY/T388的要求。4.2對實施凈化的核心種雞群要單獨分區(qū)隔離飼養(yǎng)并遠(yuǎn)離其他雞群，安排專職人員管理。4.3對凈化雞群使用弱毒疫苗的質(zhì)量規(guī)范做到疫苗無外源性禽白血病毒污染。4.4場區(qū)消毒每周不少于2次。4.5每天及時清除糞污，并對糞便做無害化處理。5檢測條件5.1檢測實驗室用水規(guī)則和檢測方法應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定。5.2主要試劑與主要儀器見附錄A。6凈化流程與方法6.1.1根據(jù)資源場種群規(guī)模，選定一定數(shù)量的擬凈化核心基礎(chǔ)種群，對凈化種雞群完成生產(chǎn)和繁育性能測定后，采集每只雞的血清和泄殖腔棉拭子并標(biāo)記，用禽白血病Ab和J亞群抗體ELISA檢測試劑盒和泄殖腔棉拭子進(jìn)行ALVp27抗原交叉檢測。淘汰陽性雞，陰性種雞人工授精后收集6.1.2對陰性種雞繁育的第一世代1日齡雛雞(出殼24小時以內(nèi))全部采集胎糞并標(biāo)記，用禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金快速檢測試紙條進(jìn)行ALVp27抗原交叉檢測，按全同胞淘汰陽性雛雞及6.1.3第一世代凈化種雞開產(chǎn)初期，全群采集雞血清和泄殖腔棉拭子，用禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金快速檢測試紙條進(jìn)行ALVp27抗原交叉檢測；公雞采集精液用PCR方法進(jìn)行ALVp27抗原6.1.4在留種前的第28周齡～30周齡，全群采集雞泄殖腔棉拭子，同時每只母雞取2枚種蛋的蛋清，用禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒和膠體金快速檢測試紙條進(jìn)行ALVp27抗原交叉檢測；采集公雞精液用PCR方法進(jìn)行ALVp27抗原檢測。淘汰陽性雞，陰性種雞進(jìn)行人工授精，收集種蛋進(jìn)行孵化。6.1.5在完成第一世代的禽白血病檢測與凈化后，對2~3個世代次的雞群禽白血病檢測與凈化從1日齡雛雞開始，重復(fù)6.1.2～6.1.4操作步驟。6.2.1無菌采集雞泄殖腔棉拭子加入1mL樣品稀釋液后，反復(fù)凍融3次待檢。6.2.2雞翅靜脈無菌采血，用高速離心機(jī)分離血清樣品用于檢測。6.2.3每只種母雞收集2枚種蛋，每枚種蛋吸取1mL蛋清，-20℃反復(fù)凍融3次后用于檢測。6.2.4將種公雞泄殖腔周圍用酒精棉球擦拭干凈，輕輕按摩其腹部至尾部，待泄殖腔外翻時，輕輕擠5壓泄殖腔外緣，將精液接入裝有1mL稀釋液(含青鏈霉素的滅菌PBS液)的滅菌離心管中，混勻后，6.2.5當(dāng)天收集出殼雛雞胎糞，用滅菌指形管按雞只個體分別收集樣品，加入1mL的樣品稀釋液，輕輕擠壓雛雞的腹部，排出胎糞，裝進(jìn)樣品管中，用潔凈小棒攪動指形管里胎糞，待混勻經(jīng)反復(fù)凍融36.3.1禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗方法應(yīng)符合NY/T680的要求。6.3.2禽白血病病毒p27抗原PCR特異性檢測方法符合GB/T26436的規(guī)定。6.3.3禽白血病病毒抗原快速檢測試紙條的操作方法參照試劑盒說明書進(jìn)行。6.4凈化檢測要求6.4.1對用禽白血病病毒p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗和膠體金試紙條檢測方法進(jìn)行交叉檢測時，如同6.4.2要加強(qiáng)對雞群的觀察，密切監(jiān)視8.1對實施凈化后的第三或第四世代核心種群種母雞按10%隨機(jī)進(jìn)行抽檢，若母雞禽白血病A/B亞群、J亞群血清抗體及p27抗原檢測陽性率在1%以下，公雞精液禽白血病p27抗原檢測全部為陰性，則判定為資源場核心種群達(dá)到禽白血病凈化合格標(biāo)準(zhǔn)。若母雞群禽白血病抗原抗體監(jiān)測陽性率高于1%,則需8.2對資源場商品擴(kuò)繁種群按10%隨機(jī)進(jìn)行抽檢，若禽白血病p27抗原檢測陽性率在7%以內(nèi)，則符合9無害化處理9.1病死雞的無害化處理應(yīng)符合農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號的規(guī)定。9.2雞糞、墊料、污水等廢棄物的無害化處理應(yīng)符合GB18596的規(guī)定。每批雞應(yīng)有養(yǎng)殖檔案(附錄B),包括生產(chǎn)、飼料和獸藥使用、消毒、免疫、診療和病死禽無害化6(規(guī)范性)A.1主要試劑：禽白血病Ab和J亞群抗體ELISA檢測試劑盒、禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒、禽白A.2主要儀器：全自動酶標(biāo)儀、臺式高速冷凍離心機(jī)、超低溫