急性經(jīng)口毒性實驗.ppt

1、急性口服毒性試驗(Acute Oral Toxicity Test )，一、實驗?zāi)康模?(一)通過本次實驗掌握口服胃給藥技術(shù)、半數(shù)致死量的意義。 (2)通過這次的實驗學(xué)習(xí)了半數(shù)致死量的修正算法和毒性判定。 二、測定方法：本實驗采用灌胃方式測定敵畏DDV(80g/100ml )半數(shù)致死量(LD50 )。 (1)與實驗動物分組：健康成年小鼠(18g25g )和大鼠(180g220g )優(yōu)先。 實驗前的動物在實驗環(huán)境中適應(yīng)35天，了解正常的活動狀況和健康狀況，要淘汰不健康或體重不合要求的動物。 本次實驗采集體重18-25 g的小鼠，實驗時，將小鼠稱為體重、編號，以隨機分組的原則，將實驗動物分為5組，

2、每組分為8只。 (2)給藥量的選擇：首先，調(diào)查與被試化學(xué)物的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)相近的化學(xué)物的LD50，將該值作為被試化學(xué)物的預(yù)想毒性中值的中間給藥量群，再上下各按12個給藥量群，進行預(yù)備實驗。 各劑量組的間距可以根據(jù)LD50的計算方法的要求而以等比級數(shù)或等差級數(shù)來配置。 本實驗要求用概率單位法修正LD50，以等比級數(shù)排列，常用1:0.8，如敵畏最高劑量為125 mg/kg，下一劑量組為125 mg/kg *0.8=100 mg/kg，依次類推為80，64 (3)受試化學(xué)脂溶性受試者化學(xué)物質(zhì)用吐溫-80、二甲基亞砜、植物油等配制。 (3)受試者化學(xué)物質(zhì)的調(diào)制和稀釋，2 .受試者的稀釋等容量稀釋法，各

3、給藥量群的動物給予相同的單位體重體積的受試者化學(xué)物質(zhì)，根據(jù)預(yù)先訂定的給藥量稀釋調(diào)制各自不同濃度的受試者溶液。 例如，本次實驗的5個劑量組：的各劑量組動物，給每單位體重體積的受試者10ml/kg。 等容量稀釋法，d :設(shè)定的染毒量，mg/kg V :動物給藥量(相同的單位體重體積)全部為10ml/kg X :各組應(yīng)調(diào)制的受試者溶液的濃度(mg/ml )，例如第一組的染毒量d=依次類推： 5組所需的受試者濃度10ml第二組： 64mg/10ml第三組： 80mg/10ml第四組： 100mg/10ml第五組： 125mg/10ml 1000g各劑量組小鼠劑量：小鼠劑量=V ml各組受試者濃度小鼠的

4、胃內(nèi)給藥方法：用左手拇指和食指摘除小鼠頭部兩耳后皮膚，無名指或小指尾部壓在手上，小鼠腹部向上，右手持連接胃內(nèi)給藥針的注射器，將胃內(nèi)給藥針從動物口腔側(cè)插入，避開牙齒，沿咽后壁慢慢滑動食道。 有抵抗的話，可以輕輕地上下滑動進行探索，抵抗消失后，即使胃里有深度的人進入，一般在深小鼠2.54cm處插入針，然后注入受試者溶液。 動物受苦的時候，不要停止針頭，拔針，刺破食道，或者迷路進入氣管，以免動物馬上死亡。 小鼠一次胃內(nèi)給藥體積為10-20ml/kg，(5)觀察并記錄中毒體征和死亡情況，觀察并記錄感染后中毒體征和出現(xiàn)時間，死亡數(shù)量和時間及死亡前特征。 高劑量組動物死亡多發(fā)生于即時，染毒后應(yīng)立即密切觀察

5、。 根據(jù)觀察情況分析中毒特點和毒作用靶器官。(1)中樞神經(jīng)系統(tǒng)與神經(jīng)肌肉系統(tǒng)：體位異常、叫聲異常、不安、停滯、痙攣、痙攣麻痹、運動失調(diào)、對外反應(yīng)過敏或遲鈍。 (2)植物神經(jīng)系統(tǒng)：瞳孔擴大或縮小，流涎或流淚；(3)呼吸系統(tǒng)：鼻孔流液、鼻翼煽動、血性分泌物、呼吸深緩、呼吸急促、仰臥呼吸； (4)泌尿生殖系統(tǒng)：有會陰部污垢、分泌物、陰道或乳房腫脹；(5)皮膚和毛：皮膚充血，發(fā)紺，毛蓬松，污垢；(6)眼：眼球突出，結(jié)膜充血，角膜混濁，血性分泌物；(7)消化系統(tǒng)：拉肚子，厭食。 三、LD50的修正計算：LD50可以用多種方法測定，有概率單位法、雙方法、寇法等，概率單位法可以修正任何反應(yīng)率水平的給藥量，可

6、以是實驗2-5組。 概率單位法遵守的要求：1.劑量按等比級數(shù)排列，相鄰2個劑量組之間的比通常為1:0.8 2。 各實驗組的動物數(shù)相等，概率單位法是LD50式(使用5個劑量組時) X3 -是第3組的劑量對數(shù)(x3=log 80，80 mg/kg ) I- -是鄰接的2組的線量比(以高劑量組為分子)的對數(shù)(I=log (125/kg ) ) 5.0-死亡率為50%時相當?shù)姆磻?yīng)率的概率單位，LD50的95%可靠界限=log-1(X 1.96 SX )、4，結(jié)果評價：根據(jù)實驗動物，5，注意事項：1 .胃內(nèi)給藥時的操作必須避免損傷食道和誤入氣管2 .準確抓住動物，防止咬傷，避免損傷動物。 3 .注入量的修正和操作如果不正確，結(jié)果4 .防止操作者中毒。 注意通風(fēng)，不要把藥品撒在手、臉的皮膚、身體其他部位，操作時要注意。 六、實驗報告應(yīng)包括以下內(nèi)容：1實驗動物的屬種。 2實驗動物的體重