血細(xì)胞直方圖ppt課件.ppt

1、血細(xì)胞直方圖,檢驗(yàn)科 馬燕,1,血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理,一、電阻抗法 庫爾特原理(亦稱：電阻法、電脈沖法與電感應(yīng)區(qū)技術(shù))：懸浮在電解液中的顆粒隨電解液通過小孔管時，取代相同體積的電解液，在恒電流設(shè)計(jì)的電路中導(dǎo)致小孔管內(nèi)外兩電極間電阻發(fā)生瞬時變化，產(chǎn)生電位脈沖。脈沖信號的大小和次數(shù)與顆粒的大小和數(shù)目成正比。,與等滲電解質(zhì)溶液相比，血細(xì)胞為不良導(dǎo)體，血細(xì)胞電阻值稀釋液的電阻值 血細(xì)胞通過檢測器小孔管微孔的孔徑感受器區(qū)時，檢測器內(nèi)外電極之間的恒流源電路上電阻值瞬間增大，產(chǎn)生一個電壓脈沖信號。脈沖信號數(shù)=細(xì)胞數(shù),2,小孔管： 電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個重要組成部分。 當(dāng)電流接通，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生恒定電流。若

2、供給的阻抗是穩(wěn)定的，則小孔的電壓不變。 當(dāng)有一個細(xì)胞通過小孔時，電阻會增加，瞬間引起電壓變化，即“通過脈沖” 細(xì)胞體積越大，脈沖振幅越高；細(xì)胞數(shù)量越多，脈沖數(shù)量越多,各種大小不同細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖信號分別送入儀器內(nèi)電腦的各個通道，運(yùn)算出各種細(xì)胞參數(shù)。 細(xì)胞群體大小分布情況的圖形，就成為“細(xì)胞體積直方圖”,3,脈沖信號經(jīng)過以下步驟，得出細(xì)胞計(jì)數(shù)： 信號發(fā)生：各種微粒通過檢測小孔時，“信號發(fā)生器”產(chǎn)生脈沖信號 放 大： 將血細(xì)胞產(chǎn)生的微弱脈沖信號，通過“放大器”放大 閾值調(diào)節(jié)： “閾值調(diào)節(jié)器”在一定范圍內(nèi)調(diào)節(jié)參考電平的大小，能區(qū)分不同群細(xì)胞合適的信號電平，使計(jì)數(shù)結(jié)果盡可能符合實(shí)際 甄 別：利用“甄別器

3、” ，根據(jù)閾值調(diào)節(jié)器提供的參考電平，將低于參考電平的假信號（細(xì)胞碎片、雜質(zhì)微粒）去掉 整 形：通過“整形器” ，將脈沖信號波形修整成一致標(biāo)準(zhǔn)的平頂波，顯示為不同類群的細(xì)胞數(shù) 計(jì) 數(shù)：經(jīng)過以上步驟偶，進(jìn)入“計(jì)數(shù)系統(tǒng)” ，得出結(jié)果 電阻抗法可精確測出細(xì)胞（或類似顆粒）大小，是三分類的主要應(yīng)用原理，也與光學(xué)檢測原理，共同應(yīng)用于五分類血細(xì)胞分析儀中。,4,儀器將每個細(xì)胞的脈沖根據(jù)其體積大小分配并儲存在相應(yīng)體積通道中，每個通道收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計(jì)出：相對數(shù)，表示在Y軸上；體積，表示在X軸上。 白細(xì)胞體積從30-450fl分為256個通道，每個通道1.64fl，依據(jù)體積大小分別放在不同通道中，得出直方圖。,第

4、一群：小細(xì)胞群， 主要為淋巴， 體積35-90fl 第二群：中間細(xì)胞群，主要為單核， 體積90-160fl 第三群：大細(xì)胞群， 主要為中性粒，體積可160fl,5,Plat和RBC共用一個孔管。 正常人RBC體積和Plat體積有明顯的界限，因此Plat計(jì)數(shù)準(zhǔn)確容易。 當(dāng)血細(xì)胞懸液中含有異常血細(xì)胞(如小RBC）時，則劃分界限不清。 為使Plat計(jì)數(shù)有較高的準(zhǔn)確性，計(jì)算機(jī)對Plat和RBC分布圖進(jìn)行判斷，將Plat計(jì)數(shù)的上限閾值判定線放在RBC和Plat分布圖交叉部分的最低處計(jì)數(shù)。,6,白細(xì)胞直方圖,7,三分類血球儀一般以電阻抗原理進(jìn)行WBC分類。 依據(jù)大多數(shù)正常形態(tài)的WBC在溶血素作用后的大小排

5、列，人為設(shè)置4個鑒別線，將直方圖分為三個區(qū)域。,計(jì)數(shù)WBC時，加入溶血素，使RBC破壞，而WBC膜受到破壞后胞漿流失，WBC體積大小發(fā)生變化。因此，WBC直方圖上細(xì)胞排列順序不是細(xì)胞的原始大小，而是經(jīng)溶血液修飾后的細(xì)胞大小。,電阻抗原理：血細(xì)胞非導(dǎo)電性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞顆粒，通過檢測小孔時，引起電阻的變化，從而對血細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類,加入溶血素前的細(xì)胞大小,加入溶血素后的細(xì)胞大小,8,一、設(shè)置鑒別線： 低鑒別線(LD)：自動尋找30-60fl之間最適位置 高鑒別線(UD)：定在300fl，用作粒度分布異常監(jiān)視 鑒別線1(T1):自動尋找從LDUD之間WBC分布曲線的波谷，第一波谷值設(shè)為

6、“TROUGH”T1 鑒別線2(T2):自動尋找從LDUD之間WBC分布曲線的波谷，第二波谷值設(shè)為“TROUGH”T2,儀器是如何分類WBC?,9,報(bào)警信息列表 WL：LD的相對度數(shù)規(guī)定值，可能 存在Plat聚集？較多巨大Plat? WU：UD的相對度數(shù)規(guī)定值，可能 溶血不充分？較多異常細(xì)胞？ T1：當(dāng)?shù)谝还戎挡荒軟Q定時 T2：當(dāng)?shù)诙戎挡荒軟Q定時 F1：小WBC分布異常。T1的相對度數(shù)規(guī)定值 F2：中WBC分布異常。T1或T2的相對度數(shù)規(guī)定值 F3：小WBC分布異常。T2的相對度數(shù)規(guī)定值,2、監(jiān)視WBC粒度分布的情況，提供異常分布信息 分布正常時，直方圖為三峰性分布，在LD、UD之間有兩個谷

7、值T1和T2 當(dāng)各值鑒別線不能設(shè)定，或在設(shè)定的鑒別線位置的度數(shù)比規(guī)定值高時，將標(biāo)有WBC粒度分布的異常報(bào)警。,二、鑒別線作用： 1、對正常形態(tài)的WBC進(jìn)行粒度分類 LDT1：為W-SCR%，相當(dāng)于LYM% T1T2：為W-MCR%，相當(dāng)于MEX%(M、E、B） T2UD：為W-LCR%，相當(dāng)于NEUT%,10,1.3. LD度數(shù)高，無T1、T2： WBC有結(jié)果，但標(biāo)有報(bào)警“WL”。 其余結(jié)果無，報(bào)警“WL”。,1.1. LD度數(shù)高： 所有結(jié)果都有，但標(biāo)報(bào)警“WL”。 常見于：存在RBC溶血不全？有核RBC？大Plat增多？Plat聚集?纖維蛋白析出？,1.2. LD度數(shù)高、無T2： WBC、L

8、%、L#有結(jié)果，但標(biāo)有報(bào)警“WL”。 其余結(jié)果無，報(bào)警“WL”。 無T2：不能設(shè)定中間細(xì)胞與中性粒細(xì)胞之間的波谷鑒別線 常見于：幼稚粒細(xì)胞？RBC溶血不全？標(biāo)本放置時間過長？,WL LD的相對度數(shù)規(guī)定值,11,1.4. 黃疸病人的特征性改變： 黃疸病人RBC膜上脂質(zhì)含量增多，蛋白質(zhì)含量減少，對溶血素的拮抗作用增加，RBC難于破碎,WL：LD的相對度數(shù)規(guī)定值,2. 無T1、無T2： WBC數(shù)無報(bào)警，但WBC分類結(jié)果無,且報(bào)警“T1” 常見于：幼稚粒細(xì)胞？RBC溶血不全？,T1 T1相對度數(shù)規(guī)定值,第一谷值不能決定,12,WBC數(shù)無報(bào)警，L%、L#結(jié)果報(bào)警“F1”，其余結(jié)果無，且報(bào)警“T2” 常見

9、于：幼稚粒細(xì)胞？M增多？E增多？B增多？RBC溶血不全？標(biāo)本放置時間過長？,T2 T2相對度數(shù)規(guī)定值 第二谷值不能決定,F1 T1相對度數(shù)規(guī)定值 小WBC群分布異常,3.1. T1高、無T2： WBC數(shù)、L%、L#無報(bào)警，其余結(jié)果無，報(bào)警“T2”,13,3.2. 僅T1高： WBC數(shù)、N%、N#有結(jié)果，無報(bào)警； L%、L#結(jié)果報(bào)警“F1”， M%、M#結(jié)果報(bào)警“F2”,3.3. 僅T2高： WBC數(shù)、L%、L#有結(jié)果，無報(bào)警； M%、M#結(jié)果報(bào)警“F2”、N%、N#結(jié)果報(bào)警“F3”,3.4. T1、T2都高： WBC數(shù)報(bào)警“WU” ；L%、L#結(jié)果報(bào)警“F1”， M%、M#結(jié)果報(bào)警“F2” ；

10、 N%、N#報(bào)警“F3” 常見于：原始細(xì)胞？幼稚粒細(xì)胞？M增多？E增多？B增多？RBC溶血不全？標(biāo)本放置時間過長？,F1 T1相對度數(shù)規(guī)定值 小WBC群分布異常 F2 T1或T2相對度數(shù)規(guī)定值 中WBC分布異常 F3 T2的相對度數(shù)規(guī)定值 大WBC分布異常,14,4. LD高、UD高： LD高：Plat值標(biāo)有報(bào)警“AG” UD高：WBC報(bào)警“WU”,其余結(jié)果無報(bào)警 常見：溶血不充分?Plat聚集？異常細(xì)胞？,WU UD的相對度數(shù)規(guī)定值,15,16,17,小結(jié),一、“結(jié)果不輸出”原因分析： T1負(fù)責(zé)監(jiān)視淋巴區(qū)域和中間細(xì)胞區(qū)域 T2負(fù)責(zé)監(jiān)視中間區(qū)域和中性粒區(qū)域 當(dāng)WBC粒度分布曲線異常，儀器找不到

11、谷底T1和/或T2時，T1、T2負(fù)責(zé)監(jiān)視的細(xì)胞群結(jié)果就不輸出。 二、“WBC直方圖異?！痹蚍治?1、病理因素： 直方圖的變化，可反映血液中WBC群體的變化，但無特異性。引起血液學(xué)變化的病 因很多，但其直方圖變化是相近的。因此，出現(xiàn)提示報(bào)警，就是給檢驗(yàn)師命令，要求我們進(jìn)行鏡檢復(fù)核。 2、非病理因素： 1）儀器因素：凡影響細(xì)胞脈沖信號的因素，都可以使直方圖發(fā)生變化血細(xì)胞自身體積、儀器的閾值、孔電壓、脈沖的增益 2）試劑因素：試劑性能好壞直接影響直方圖，因此，應(yīng)使用配套試劑 稀釋液的電導(dǎo)率、滲透壓、離子強(qiáng)度 溶血劑的種類、濃度、用量、溶血時間： 抗凝劑的種類、濃度：EDTAK2 1.5-2.2mg

12、抗凝1ml全血 3）樣本放置時間：一般認(rèn)為樣本采集后20分鐘2h內(nèi)檢測。 過短，可能存在Plat未完全解離，抗凝劑未完全溶解等； 過長，則細(xì)胞變形，特別是免疫功能亢進(jìn)的病人，其淋巴細(xì)胞容易變成異型淋巴，從而影響直方圖變形。,18,紅細(xì)胞直方圖,19,紅細(xì)胞直方圖,分析范圍：36-360fl 正常RBC主要分布在50-200fl 直方圖上可見兩個細(xì)胞群： 50 - 150 fl 幾乎兩側(cè)對稱、較狹窄、正態(tài)分布; 125 - 200 fl 大RBC和Ret,分類規(guī)則（按體積）： 在RLRU之間分析 RBC RL Plat和RBC的分界線?？煞从吵鲂BC、大Plat 、血小板簇 RU 可反映出RB

13、C聚集,20,RL與直方圖交點(diǎn)高：,電子噪聲干擾、破碎RBC、大Plat增多、Plat聚集,MCV 高 MCHC 低 RDW 高,21,RU與直方圖交點(diǎn)高 DW：相對度數(shù)20%處的鑒別線與直方圖曲線交點(diǎn)增高,RU：電子噪聲干擾、冷凝集素干擾、WBC極度增高 DW: RBC明顯大小不均,MCV 高 MCHC 低 RDW無法得出,22,RBC曲線跨度大 ：,小RBC干擾?,曲線不光滑： 抬尾,RDW:明顯增高,Plat:報(bào)警PL PDW: 報(bào)警DW MPV: 報(bào)警PL 無法測出,RBC大小不均,RBC大小不均,23,主峰位于65fl: 小RBC,MCV: 低 MCH: 低 MCHC：低 RDW：

14、輕度增高,抬尾、不與橫坐標(biāo)重合、浮動界標(biāo)PU在20fl定位：小RBC出現(xiàn),缺鐵性貧血,RBC外觀無異常,24,雙峰 ：,接受貧血治療、輸血，出現(xiàn)多種大小的RBC群,MCHC：低 RDW: 高 報(bào)警MP,25,26,治療2w后（輸血、鐵劑）：雙峰,MCV: 低 MCH: 低 MCHC：低 RDW： 高 報(bào)警MP,治療4w后：雙峰，但以正常RBC為主,MCV: 低 MCH: 低 MCHC：低 RDW： 高 報(bào)警MP,缺鐵性貧血治療后,27,無T2：,出現(xiàn)連續(xù)體積大小的細(xì)胞,RBC : 低 Hb: 低 HCT： 低 MCV： 高,WBC：高 M: 無法得出 報(bào)警T2 N: 無法得出 報(bào)警T2,曲線右

15、移 大細(xì)胞性貧血：,大細(xì)胞性貧血（CML）,28,29,血小板直方圖,30,分析范圍：2-30fl 正常Plat直方圖： 左偏態(tài)，主要分布在2-15fl 3條鑒別線： 2條固定鑒別線： PL：2-6fl; PU:12-30fl 1條浮動鑒別線：12fl,RBC分析范圍：36-360fl,對于和Plat大小相似的細(xì)胞大小，成為“非Plat顆?！保ㄐBC、RBC碎片、WBC碎片、細(xì)菌、真菌、免疫復(fù)合物，誤認(rèn)為Plat，使得假性增高； 對于聚集的Plat因體積增大，而不歸類為Plat，使得假性減低,PU Plat和RBC的分界線。可反映出 小RBC、大Plat 、血小板簇,31,報(bào)警PL:LD 相對度數(shù)超過設(shè)定值,Plat: 報(bào)警PL PDW: 報(bào)警PL MPV: 報(bào)警PL P-LCR：報(bào)警PL 低,存在電子噪聲、冷凝蛋白、破碎RBC、白血病性WBC碎片等的干擾,32,報(bào)警P