食物中還原型維生素C的測定-26-二氯酚靛酚滴定法.ppt

食物中還原型維生素C的測定 -2, 6-二氯酚靛酚滴定法,營養(yǎng)學(xué)系 李忠霞,理論知識,生理作用 缺乏和過量 需要量 RNI;UL 食物來源 舉例含量豐富的食物。,蔬菜：辣椒、油菜、卷心菜、菜花、芥菜； 水果：獼猴桃、酸棗、柑橘、檸檬、柚子、草莓、沙棘。,抗壞血酸/維生素C 分子式：C6H8O6 相對分子質(zhì)量：176 結(jié)構(gòu)： 六個(gè)碳原子的-酮基內(nèi)酯 酸性多羥化合物 性質(zhì)： 還原性 不穩(wěn)定性 堿性環(huán)境、加熱或銅鐵共存 弱酸性條件下穩(wěn)定草酸,結(jié)構(gòu)與性質(zhì),還原型和氧化型維生素C有一定的生理作用， 水解為2,3-二酮古樂糖酸，失去生理作用。 總抗壞血酸包括還原型、氧化型抗壞血酸和2,3-二酮古樂糖酸。,15:1,測定還原型維生素C 可粗略了解食品中維生素C濃度,一、目的,加深對2，6-二氯酚靛酚滴定法測定果蔬中維生素C的原理的理解，掌握其操作要點(diǎn)，熟練基本操作技術(shù)。 了解烹調(diào)加工對維生素C的影響。,二、實(shí)驗(yàn)原理 2,6 二氯酚靛酚滴定法,染料2，6-二氯酚靛酚的顏色反應(yīng)表現(xiàn)兩種特性，一是取決于其氧化還原狀態(tài)，氧化態(tài)為深藍(lán)色，還原態(tài)變?yōu)闊o色；二是受其介質(zhì)的酸度影響，在堿性溶液中呈深藍(lán)色，在酸性介質(zhì)中呈淺紅色。 用藍(lán)色的堿性染料標(biāo)準(zhǔn)溶液，對含維生素C的酸性浸出液進(jìn)行氧化還原滴定，染料被還原為無色，當(dāng)?shù)竭_(dá) 滴定終點(diǎn)時(shí)，多余的染料在酸性介質(zhì)中則表現(xiàn)為淺紅色。 在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)2，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。所以可以由染料用量計(jì)算樣品中還原型抗壞血酸的含量。,樣品前處理,三、實(shí)驗(yàn)步驟,蔬菜摘、洗、瀝干； 小棵整體取樣，大棵對稱均分取樣； 切條、片、塊等狀； 若樣品顏色較深用白陶土脫色,2%草酸 100g,為什么是 2%的草酸？,標(biāo)準(zhǔn)KIO3溶液 標(biāo)定: 標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液,2, 6-二氯酚靛酚染料 標(biāo)定: 樣品,標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液 標(biāo)定: 2, 6-二氯酚靛酚染料,為什么要進(jìn)行這么多步？,1、標(biāo)準(zhǔn)KIO3溶液標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液,（1）原理,KIO3 + 3H2C2O4 + 5KI = 3I2 + 3K2C2O4 j,（2）操作,KIO3（0.000167M）,維生素C標(biāo)準(zhǔn)品溶液（5ml，0.02mg/ml） 草酸（5ml，1%） KI（0.5ml，6%） 淀粉（3滴，1%）,滴定,白色變?yōu)榈{(lán)色,？,（3）標(biāo)準(zhǔn)液中還原型維生素C濃度,3C(KIO3) V(KIO3) M(VitC),V(Vit C),W標(biāo) （mg/ml）=,nM =,步驟一,步驟二,步驟三,標(biāo)準(zhǔn)KIO3溶液 標(biāo)定: 標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液,2, 6-二氯酚靛酚染料 標(biāo)定: 樣品,標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液 標(biāo)定: 2, 6-二氯酚靛酚染料,2、標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液標(biāo)定2, 6-二氯酚靛酚染料,（1）操作,2, 6-二氯酚靛酚染液（0.2mg/ml）,標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液(5ml，C標(biāo)) 草酸（5ml，1%）,滴定,無色變?yōu)榈t色 15s內(nèi)不褪色,（2）1ml染料相當(dāng)于還原型維生素C的mg,T =,C標(biāo)（mg/ml） V標(biāo)（ml）,V染料（ml）,T = 0.089,步驟一,步驟二,步驟三,標(biāo)準(zhǔn)KIO3溶液 標(biāo)定: 標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液,2, 6-二氯酚靛酚染料 標(biāo)定: 樣品,標(biāo)準(zhǔn)維生素C溶液 標(biāo)定: 2, 6-二氯酚靛酚染料,3、用標(biāo)定后的2, 6-二氯酚靛酚染料滴定樣品，測得其還原型維生素C的濃度,（1）操作,2, 6-二氯酚靛酚染液（0.2mg/ml）,勻漿后的樣品（5ml） 空白組為草酸（5ml，1%）,滴定,無色變?yōu)榈t色 15s內(nèi)不褪色,（2）樣品中原型維生素C濃度,V1：樣品滴定時(shí)所用染料量（ml） V2：空白滴定時(shí)所用染料量（ml） m：滴定時(shí)所用樣品的量（g）,W樣（mg/100g）=,（V1 V2） T,m, 100,四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,1. 樣品Vit C的濃度 2. 烹調(diào)前后Vit C的損失率 生熟比=,五、注意事項(xiàng),因要計(jì)算烹調(diào)后原型維生素C的損失率，故要計(jì)算烹調(diào)前后食物的生熟比；故要記錄食物烹調(diào)前后的質(zhì)量； 測定過程要迅速，因還原型維生素C易被氧化，一般不超過2min; 樣品中可能有其他雜質(zhì)也能還原2, 6-二氯酚靛酚，但還原速度比還原型維生素C慢，故滴定時(shí)以15s內(nèi)粉紅色不褪去為止； 樣品勻漿稀釋定容及脫色時(shí)若產(chǎn)生泡沫可用異戊醇除沫； 白陶土應(yīng)選擇脫色力強(qiáng)且不吸附維生素C的品種，在實(shí)驗(yàn)前一天置于烘箱中105 2h，并立即放入干燥皿中存放； 樣品勻漿稀釋液過濾時(shí)若存在困難，可離心后再取上清測定；,配制保存試劑時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng) 6%KI溶液:現(xiàn)用現(xiàn)配、棕色瓶盛裝； KIO3溶液：短期、棕色瓶、冷藏； 維生素C標(biāo)準(zhǔn)品粉末：棕色干燥皿內(nèi)保存； 維生素C標(biāo)準(zhǔn)品溶液：短期、棕色瓶、冷藏； 2, 6-二氯酚靛酚溶液：50mg溶解于NaHCO3(0.2g/ml)熱溶液中，冷卻后4過夜，過濾后用蒸餾水定容250ml，然后短期、棕色瓶、冷藏； 1%的淀粉：先加少量涼水?dāng)嚢璩珊隣?，再加沸水溶解，短期冷藏?GB 619586 水果、蔬菜維生素C含量測定法 (2,6二氯酚靛酚滴定法) 本標(biāo)準(zhǔn)適用于果品、蔬菜及其加工制品中還原型抗壞血酸的測定（不含二價(jià)鐵、二價(jià)錫、一價(jià)銅、二氧化硫、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽），不適用于深色樣品。,總結(jié),優(yōu)點(diǎn)： 簡便快速，不需特殊儀器和試劑 缺點(diǎn) 非Vit C的專一反應(yīng)，其它還原性物質(zhì)對測定也有干擾。但由于Vit C的氧化速度遠(yuǎn)比干擾物質(zhì)的快，故快速滴定可減少干擾物質(zhì)的影響。 2，6-二氯靛酚滴定液不夠穩(wěn)定，貯存時(shí)易緩緩分解，需經(jīng)常標(biāo)定，貯存液不宜超過一周； 色素對測定干擾大； 測定的只是含量較高的還原性維生素C，不是總維生素C。,其他檢測方法,熒光法 原理：樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后，與鄰苯二胺（OPDA）反應(yīng)生成具有熒光的喹喔啉，其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。 2，4-二