不同生長季節(jié)玳玳果中總黃酮的定量分析研究.doc

不同生長季節(jié)玳玳果中總黃酮的定量分析研究作者：劉永靜，陳丹，邱紅鑫，葉夢屏【摘要】目的研究不同生長季節(jié)玳玳果中總黃酮的含量差異，以便更有效地利用玳玳果總黃酮。方法以柚皮苷為對照品，運用紫外可見分光光度法對不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮含量進行定量分析，檢測波長為284nm。結(jié)果建立了玳玳果總黃酮的含量測定方法，結(jié)果表明不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮含量存在一定的差異。結(jié)論所建立的含量測定方法精密度、穩(wěn)定性及重復性良好，準確度高，可做為玳玳果總黃酮的定量分析方法，且玳玳青果中總黃酮的含量最高?！娟P鍵詞】玳玳果；總黃酮；生長季節(jié)；定量分析Abstract：ObjectiveTostudythecontentoftotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruitsgatheredindifferentseasonsforeffectiveutilization.MethodsThecontentwastotalflavonoidsanalyzedbyultravioletspectroscopy.Thenaringinwasusedasthechemicalreferencesubstanceandthedetectionwavelengthwassetat284nm.ResultsThedeterminationmethodoftotalflavonoidswasestablished.Thecontentofthetotalflavonoidsgatheredindifferentgrowingperiodswasevidentlydifferent.ConclusionThemethodissensitive,accurate,reproducibleandcanbeusedtocontrolthequalityofthetotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits,andthequalityofgreenfruitsisthebest.Keywords：CitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits；Totalflavonoids；Growingseasons；Quantitativeanalysis玳玳又稱代代CitrusaurantiumL.vardaidai，是蕓香科柑桔亞屬植物，為酸橙的變種，在我國福建、四川、浙江等地都有栽培。玳玳的未成熟果實稱玳玳花枳殼或蘇枳殼，幼果有被當作枳實入藥，具有理氣寬中、行滯消脹的功效，主要用于胸腹?jié)M悶脹痛、食積不化、痰飲、胃下垂、脫肛、子宮脫垂等病癥1,2。實驗證明，玳玳果中含黃酮、生物堿、揮發(fā)油等活性成分，其中黃酮類成分以柚皮苷等為主要成分，具有良好的抗氧化活性35，而不同采收期的玳玳果中總黃酮含量不同。為了確保玳玳藥材的質(zhì)量穩(wěn)定性和對藥材的合理利用，本研究以玳玳果總黃酮中代表性成分柚皮苷為指標成分6，分析比較了不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮的含量。1儀器與試藥1.1儀器BP-211D型電子分析天平(德國Sartorius公司)；FA2004電子天平(上海精密科學儀器有限公司)；UV-4802雙光束紫外可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)。1.2試藥玳玳果(福建恒馨天然香料有限公司提供；福建中醫(yī)學院中藥鑒定教研室范世明高級實驗師鑒定)；柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110722-200610)；甲醇等試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液的制備精密稱定柚皮苷對照品5.08mg，置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含0.1016mg的溶液，即得。2.2供試品溶液的制備取新鮮晾干的玳玳幼果果皮、青果果皮、橙果果皮分別低溫烘干，粉碎，過20目篩，即得玳玳果皮粗粉。精密稱取玳玳果皮粗粉50g，置250ml錐形瓶中，用6倍量的75%的乙醇回流提取，共回流提取3次，每次2h，合并提取液，回收乙醇使成浸膏，減壓干燥呈橙色粉末，即得玳玳幼果、青果、橙果果皮醇提粉末。分別精密稱取玳玳幼果、青果、橙果醇提粉末各20.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。2.3測定波長的選擇分別取對照品溶液和供試品溶液，以甲醇為溶劑空白，在230400nm波長范圍掃描，結(jié)果顯示，對照品溶液和供試品溶液的吸收光譜圖基本一致，最大吸收波長均在284nm，故測定波長選擇284nm。結(jié)果見圖1。1.玳玳果醇提液2.柚皮苷對照品圖1吸收光譜圖2.4標準曲線的制備與線性關系的考察分別精密吸取柚皮苷對照品溶液0.4，0.7，1.0，1.3，1.6，1.9，2.1ml于10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，以甲醇為空白，在284nm波長處測定吸光度。以濃度(C，mg/ml)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為A=3.634101C-4.60910-3，r=0.9998，柚皮苷在0.0040640.021336mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關系。標準曲線見表1，圖2。2.5精密度實驗分別精密吸取同一供試品溶液6份，按“樣品含量測定”項下同法操作，計算。結(jié)果見表2。表1線性關系測定結(jié)果圖2標準曲線表2精密度實驗結(jié)果2.6穩(wěn)定性實驗精密吸取同一供試品溶液，放置0，30，60，90，120，150min后，按“樣品含量測定”項下同法操作，測定，計算。結(jié)果表明供試品在150min內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3表3穩(wěn)定性實驗結(jié)果2.7重復性實驗分別取同一批玳玳果(青果)醇提粉末6份制備供試品溶液，按“樣品含量測定”項下同法操作，測定，計算。結(jié)果見表4。2.8回收率實驗精密稱取玳玳青果醇提粉末10mg(含量為0.113mg/mg)，置50ml量瓶中，按高、中、低3個濃度水平，分別精密加入柚皮苷對照品溶液(1.03mg/ml)適量，用甲醇稀釋至刻度，按“樣品含量測定”項下同法操作，測定，計算。結(jié)果見表5。表4重復性實驗結(jié)果表5回收率實驗結(jié)果2.9樣品含量測定精密吸取供試品溶液1.0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以甲醇為空白，在284nm波長處分別測定其吸光度，計算總黃酮含量(以每毫升生藥中所含總黃酮量計)。結(jié)果見表6。表63批樣品含量測定結(jié)果3討論實驗結(jié)果表明，不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮的含量存在一定的差異：玳玳青果中的總黃酮含量>；玳玳橙果中的總黃酮含量>；玳玳幼果中的總黃酮含量。用分光光度法測定玳玳果醇提物中總黃酮的含量準確度高，重復性好，可以作為其中玳玳果總黃酮控制的方法，且為更有效地在最佳季節(jié)采摘玳玳果提取分離玳玳果總黃酮有效部位提供了實驗依據(jù)?！緟⒖嘉墨I】1冉先德.中華藥海M.哈爾濱：哈爾濱出版社，1993：964.2國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草(第4卷)M.上海：上?？茖W技術出版社，1999：884.3陳丹，劉永靜，黃劍鈞，等.閩產(chǎn)代代果中化學成分的分離分析J.福建中醫(yī)學院學報，2007，17(1)：18.4