北五味子與南五味子的色譜鑒別.doc

北五味子與南五味子的色譜鑒別Schisandra chinensis and South Schisandra Chromatographic identification北五味子與南五味子的色譜鑒別摘要目的:通過色譜分析的方法，探討北五味子與南五味子的差別。方法:利用薄層色譜 (TLC)、高效液相色譜(HPLC)及氣象色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）定性等手段，對兩藥進(jìn)行鑒別。結(jié)果:經(jīng)TLC、HPLC及GC-MS色譜分析表明，北五味子含有五味子乙素，南五味子則不含這種物質(zhì)；并且北五味子與南五味子種子中揮發(fā)油的種類、成分相差很大。結(jié)論:南五味子所含成分及藥性，與北五味子存在顯著差異，認(rèn)為不可替代北五味子藥用。兩種藥材應(yīng)分開入藥。關(guān)鍵詞:北五味子，南五味子，高效液相色普，薄層色譜，氣象色譜-質(zhì)譜Schisandra chinensis and South Schisandra Chromatographic identificationAbstractObjective: Searching for the difference Schisandra chinensis and South Schisandra by Chromatographic analysis. Methods: To identify the two drugs by TLC ,HPLC and GC-MS chromatographic approach. Results: To show that Schisandra chinensis contains Schisandrin, South schisandra without the substance by TLC ,HPLC and GC-MS chromatographic analysis. Conclusion: South Schisandra contains ingredients and there was a significant difference in Schisandra, South Schisandra medicinal that can not replaceSchisandra chinensis. Two kinds of medicinal herbs should be separatedKey words: Schisandra, Kadsurasinensis,HPLC,TLC,GC-MS前言五味子為常用中藥，始載于神農(nóng)本草經(jīng)，列為上品1。其性溫，味酸、甘，歸肺、心、腎經(jīng)，具有收斂，固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心功能。用于久咳虛喘，遺精遺尿，久泄，盜汗等滑脫、開泄或津傷之虛證2。中國藥典2005年版一部收載的五味子品種為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis( Tnrcz.) Bill.的干燥成熟果實(shí)( 曬干或蒸后曬干)，商品習(xí)稱“北五味子”。由于歷史與地方用藥習(xí)慣等因素，全國有10余種混淆品作五味子藥用。而目前市場出現(xiàn)較多的則是同科植物華中五味子( Ssphenanthera Rehdet Wils)的干燥成熟果實(shí)。商品習(xí)稱“南五味子”,其中揮發(fā)油具有鎮(zhèn)咳作用3.4。五味子甲素和乙素是北五味子的主要有效成分5。目前, 一些中成藥中五味子甲素和乙素的含量測定方法有較多報(bào)道6-9,但南五味子中不含五味子甲素。五味子種子中揮發(fā)性成分約占種子的1.6 %10,北五味子與南五味子種子中揮發(fā)油的種類、成分相差很大。北五味子作為五味子正品，主產(chǎn)于東北及華北各省，暢銷全國并出口。南五味子主產(chǎn)于河南、陜西、甘肅、湖北、四川、云南等中南部各省，暢銷全國。鑒于該兩者在藥材品性上差異較大，南五味子雖也被收入某些地方藥材標(biāo)準(zhǔn)使用，但在臨床療效上卻遠(yuǎn)不及北五味子。認(rèn)為不可替代北五味子藥用。為此，本文試從藥材的薄層色譜(TLC)、高效液相色譜(HPLC)及氣象色譜-質(zhì)譜（GC-MS）特征等方面對兩者做了比較試驗(yàn)，用于區(qū)分兩種藥材效果明顯，為以后更好的利用和研究南、北五味子做參考。1 材料與方法11 實(shí)驗(yàn)材料儀器: Agilent HP1100高效液相色譜儀BX41型Olympus生物顯微鏡、GC-MS聯(lián)用儀。試藥: 供試品五味子(北五味子)、華中五味子(南五味子)、對照藥材五味子(為北五味子)、 對照品五味子甲素、五味子乙素。化學(xué)試劑：均為分析純。水為純凈水、薄層板為硅膠GF254板。12 方法TLC 鑒別，HPLC 鑒別，GC-MS分析2 結(jié)果2.1 TLC鑒別取上述兩種供試品粉末各0,5 g，分別加三氯甲烷20mL，加熱回流30min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使之溶解，作為供試品溶液S1、S2; 另取五味子對照藥材粉末1 g，同法制成對照藥材溶液R1; 再取五味子甲素、五味子乙素11-13對照品各適量，分別加三氯甲烷制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液R2、R3。按照中國藥典2005年版一部TLC法(附錄VI B) 實(shí)驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10L，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254 薄層板上，以石油醚( 30 60)甲酸乙酯甲酸( 1551) 的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈( 254 nm) 下檢視。結(jié)果北五味子色譜中，在與對照藥材14及對照品色譜相應(yīng)位置上顯現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn); 而南五味子色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)位置上顯然缺少五味子乙素這個(gè)主斑點(diǎn)及其他副斑點(diǎn)。所缺少的斑點(diǎn)大多位于該色譜的中上部，即顯示南五味子缺乏油性物質(zhì)，這恰與其干癟的藥材性狀相符合。圖1 北五味子與南五味子TLC 圖譜S1北五味子S2南五味子R1五味子對照藥材R2五味子甲素R3五味子乙素2.2 HPLC鑒別2.2.1 色譜條件 色譜柱Hypersil ODS 柱( 46 mm250 mm5 m) ，流動(dòng)相甲醇水(7228 );流速10 mL/min; 檢測波長254 nm，理論板數(shù)按五味子乙素峰計(jì)算不小于6000( 五味子乙素保留時(shí)間222 min) 。2.2.2供試品溶液與對照品溶液制備 取北五味子與南五味子粉末各10 g，分別加75%甲醇50 mL，浸泡2 h，超聲處理30 min，離心，分取上清液，用微孔濾膜( 045 m) 濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液備用。另取五味子乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL 含01 mg 的溶液，作為對照品溶液。2.2.3 測定與結(jié)果 北五味子HPLC 色譜中，出現(xiàn)與對照品峰保留時(shí)間相同的一個(gè)目標(biāo)峰( 五味子乙素) ，而南五味子HPLC 色譜中則無此目標(biāo)峰出現(xiàn)。圖2 北五味子與南五味子HPLC重疊圖譜2.3 南五味子與北五味子的GC-MS分析2.3.1北五味子圖3 北五味子種子揮發(fā)油GC-MS總離子流圖表3 北五味子種子中揮發(fā)油化學(xué)成分及相對含量序號化學(xué)名稱相對含量/%1-蒎烯（-Pinene）1.962莰烯( Camphene)2.043-蒎烯（-Pinene）0.974-月桂烯(-Myrcene)0.595-松油烯(-Terpinene)0.796對聚傘花素(p-Cymene)2.057-松油烯(-Terpinene)1.778-萜品烯(-Terpinene)5.469-萜品油烯(-Terpinolene)0.35101-異丙基-2-甲氧基-4-甲基苯（1-isopropyl-2 methoxy-4-methyl benzene）1.1411乙酸異冰片酯( Isopropyl acetate)3.3712烯(Copaene)31.0013欖香烯(Elemene)0.8714芹子烯(Selinene)0.8515吉馬烯D(Germacrene D)0.9416-金合歡烯(-Farnesene)2.0217依蘭烯(Ylangene)3.0918-金合歡烯（-Farnesene)14.8919異石竹烯(Isocaryphyllene)0.8520-蓽澄茄油烯(-Cubebene)9.8321吉馬烯B(Germacrene B)1.2022羅漢柏烯(Thu jopsene)2.81232,3,4,7,8,8a-六氫 -3a,7-甲撐基奧(2,3,4,7,8,-8a-6H-3a, 7-Methanoazulene)0.8724橙花叔醇(Nerolidol)0.2625維他命A醛(Vitamin A aldehyde)1.4426四甲基六氫化環(huán)丙烷基萘(1a, 2, 6, 7, 7a-6H- Cyclopropa ( a) naphthalene)1.9427四甲基八氫化環(huán)丙烷基萘-2-酮(1,1a,4,5,6,7,7a,7b-8H-Cyclopropa(a)naphthalene-2-one)1.80其它未知總合(Unidentifled, total)4.8730min內(nèi)分離出44個(gè)峰,鑒定了其中27個(gè)組分,占揮發(fā)油總量的95.13%。北五味子種子揮發(fā)油15.16的主要成分為烯, -金合歡烯、-蓽澄茄油烯等。2.3.2南五味子表4 南五味子種子中揮發(fā)油化學(xué)成分及相對含量南五味子出30個(gè)峰, 經(jīng)質(zhì)譜分析, 對每個(gè)色譜峰的化合物給出特定的MS峰,經(jīng)計(jì)算機(jī)庫貯存信息檢索, 初步鑒定出22種化合物,占揮發(fā)油總量的68.05%。其中, 質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的有-檀香烯(10.65%) 、欖香烯(6.48%) 、-雪松烯(11.49%)、-杜松萜烯(10.87%)2-(4a,8-二甲基-1,2,3,4,4a,5,6,7-八氫萘-2) -1-丙烯醇(5.42% )和2種未檢出的化合物峰22( 16. 79%) 、峰27( 10. 07%) 。從檢出的化合物結(jié)構(gòu)可以看出, 南五味子種子揮發(fā)油成分主要為倍半萜類( 包括萜烴及含氧衍生物-醇、醚、酮等) 化合物。3 小結(jié)與討論GC-MS分析表明北五味子與南五味子種子中揮發(fā)油的種類與含量有很大差異，兩者并不一樣，也不能被相互代替。TLC及HPLC色譜分析表明富含五味子甲素、五味子乙素等油性物質(zhì)，這與五味子功能中除收斂固澀外，還具有益氣生津，補(bǔ)腎寧心的滋養(yǎng)濡潤作用相吻合。而南五味子粒小干癟，皮肉干枯而欠油性，色譜分析證明其不含五味子乙素等一些親脂性成分，顯微鑒別也印證果皮中少有油細(xì)胞。然而干癟少油的南五味子，皮薄則顯籽多。種子氣香、味辛辣而微苦，從藥性理論講，辛香性走竄散發(fā)，恰與五味子的收斂補(bǔ)潤功能相背離。因此，認(rèn)為南五味子不可替代北五味子藥用。兩種藥材應(yīng)分開入藥。區(qū)分兩種五味子的鑒別要點(diǎn)在于: 北五味子果大肉厚色紅潤，而南五味子粒小干癟籽無光(澤)。但需要指出的是，對于未成熟搶青采收的北五味子，干燥后也顯干枯少油狀，此時(shí)只需剝開看其種子有否光澤即可判斷。必要時(shí)配合采取顯微或色譜方法以及增加含量測定項(xiàng)目以鑒定其真?zhèn)蝺?yōu)劣。鑒于地區(qū)習(xí)用和資源利用關(guān)系，南五味子雖不能等同北五味子入藥，但仍具有一定藥用價(jià)值。可根據(jù)其氣味特性另辟藥用。對其藥理藥效尚待深入探究。參考文獻(xiàn)1 李時(shí)珍(明)本草綱目.北京:人民衛(wèi)生出版社,1975:1238-1241。2 國家藥典委員會(huì)編1中華人民共和國藥典(一部)北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:44,169。3 Xiao P G. 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