生技整理考試重點(diǎn).doc

說明：1、資料中未按名詞解釋、簡(jiǎn)答等的次序排版，如有需要，大家自行解決。2、有些細(xì)節(jié)，大家自己去看課件補(bǔ)充吧3、愿大家順利。一、基因工程本章總體思路1、生物技術(shù)：包括基因工程、細(xì)胞工程 、發(fā)酵工程 、酶工程 、蛋白質(zhì)工程 2、基因工程：在體外對(duì)DNA進(jìn)行切割、拼接, 使遺傳物質(zhì)重新組合, 經(jīng)載體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中擴(kuò)增表達(dá), 獲得人類所需產(chǎn)品, 或組建新生物類型的技術(shù)。3、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)：DNA是遺傳物質(zhì)；DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)；中心法則和遺傳密碼4、基因工程誕生的技術(shù)突破：DNA分子的體外切割與連接技術(shù) DNA分子的核酸序列分析技術(shù)5、基因工程元年：1973年6、基因工程的特征：1. 跨物種性：外源基因到另一種不同的生物細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行繁殖 2、無性擴(kuò)增：外源DNA在寄主細(xì)胞內(nèi)可大量擴(kuò)增和高水平表達(dá)。 1.1 工具酶7、工具酶：（以下為常用工具酶）工 具 酶功 能限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別特異序列，切割DNADNA連接酶催化DNA中相鄰的5磷酸基和3羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使DNA切口封合或使兩個(gè)DNA分子或片段連接DNA聚合酶 合成雙鏈cDNA分子或片段連接 缺口平移制作高比活探針 DNA序列分析 填補(bǔ)3末端反轉(zhuǎn)錄酶 合成cDNA 替代DNA聚合酶I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或DNA序列分析（含義：以RNA為模板合成DNA的DNA聚合酶）多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾（1、探針標(biāo)記2、在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進(jìn)行連接）堿性磷酸酶切除末端磷酸基（制備載體時(shí)，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身連接）8、限制性核酸內(nèi)切酶(restriction endonuclease, RE)：是一類能識(shí)別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列, 并在合適的反應(yīng)條件下使每條鏈一定位點(diǎn)上的磷酸二酯鍵斷開，產(chǎn)生具有3-OH基團(tuán)和5-磷酸基團(tuán)的DNA片段的內(nèi)切脫氧核糖核酸酶。 分類: 包括限制性核酸內(nèi)切酶、（基因工程技術(shù)中常用型） 作用：與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng)，限制外源DNA， 保護(hù)自身DNA。9、平末端 (blunt end): DNA的兩條鏈在同一位置被切開，產(chǎn)生末端長(zhǎng)度相等的DNA片段，即平末端。 粘末端(sticky end)：DNA分子的兩條鏈在不同的位置（中間隔2-4核苷酸）被切開，形成一條交錯(cuò)的傷口，所得的DNA片段在末端都具有短的懸垂部分，即粘末端。10、同裂酶：來源不同的限制性內(nèi)切酶，但能識(shí)別和切割同一位點(diǎn)，這些酶稱同裂酶。同尾酶：有些限制性內(nèi)切酶雖然識(shí)別序列不完全相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的粘性末端，稱為同尾酶。這兩個(gè)相同的粘性末端稱為配伍未端(compatible end)。11、DNA連接酶的連接方式：1、粘性末端連接 2、平端連接 3. 末端修飾后進(jìn)行連接 4. 人工接頭連接 1.2 載體(vector)12、載體：是指能在連接酶作用下和外源DNA片段連接，實(shí)現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的DNA分子13、理想載體的基本條件： 1、可轉(zhuǎn)移性2、具有安全性3、合適的復(fù)制位點(diǎn)4、多克隆位點(diǎn)：廣泛、特異5、選擇標(biāo)志，便于篩選和鑒定6、分子較小，可容納較大的外源DNA14、質(zhì)粒：存在于細(xì)菌染色體外的小型共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子。 要求：含有復(fù)制起點(diǎn)；含有多克隆位點(diǎn)（MCS）；含有篩選標(biāo)記； 高拷貝數(shù)；分子量小；易于導(dǎo)入宿主細(xì)胞15、T-克隆載體：5端帶一個(gè)不配對(duì)的堿基T，這樣的線性質(zhì)?？蓪CR產(chǎn)物以TA配對(duì)連接的方式直接進(jìn)行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的載體被稱為T-克隆載體 U-克隆載體：5端帶一個(gè)不配對(duì)的堿基U的線性質(zhì)粒稱為U-克隆載體16、噬菌體克隆載體優(yōu)點(diǎn)： 其分子遺傳學(xué)背景十分清楚； 載體容量較大，能容納大約23kb的外源DNA片段； 具有較高的感染效率，其感染宿主細(xì)胞的效率幾乎可達(dá)100% 。 噬菌體分類;(1) 插入型載體（insert vector）：其限制酶位點(diǎn)可用于外源DNA的插入 (2) 取代型載體（replacement vector）：具有成對(duì)限制酶位點(diǎn)，外源DNA可取代兩個(gè)限制位點(diǎn)上的DNA區(qū)段。重組DNA與包裝蛋白混合，可在體外包裝成有感染力的重組噬菌體顆粒噬菌體應(yīng)用：包裝范圍:36.4Kb-51.5kb 轉(zhuǎn)導(dǎo)效率:lg重組DNA分子獲得10 個(gè)以上的噬菌斑.用途:建立cDNA基因文庫,克隆外源目的基因。 17、酵母人工染色體(YAC) 把酵母染色體與基因復(fù)制和表達(dá)有關(guān)的主要組件都組裝在質(zhì)粒上，令質(zhì)粒行使酵母的轉(zhuǎn)錄功能和復(fù)制功能。 特點(diǎn): 能容納長(zhǎng)達(dá) 1000kb-3000kb的外源DNA片段用途: 構(gòu)建基因組文庫，基因治療和基因功能鑒定。 18、表達(dá)載體（expressing vector） 表達(dá)載體是用來在受體細(xì)胞中表達(dá)外源基因的載體。表達(dá)載體常由克隆載體改造而來。 1.3 目的基因20、目的基因的獲取方法：（1）酶切法（限制性內(nèi)切核酸酶酶切） ；（2）化學(xué)合成法（由已知氨基酸序列推測(cè)可能的DNA序列） ；（3）cDNA文庫、基因組DNA文庫；（4）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）21、PCR引物設(shè)計(jì)原則：（1) 序列應(yīng)位于高度保守區(qū)，與非擴(kuò)增區(qū)無同源序列。（2）引物長(zhǎng)度以15-30 bp為宜。 (3) 引物中G+C含量通常為40%-60%,可按下式粗略估計(jì)引物的解鏈溫度 Tm4(G+C)+2(A+T)；（4）堿基盡可能隨機(jī)分布。（5）引物內(nèi)部避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。（6）兩引物間避免有互補(bǔ)序列。（7）引物3端為關(guān)鍵堿基；5端無嚴(yán)格限制22、PCR反應(yīng)中的主要成份 1. 引物 2. 4種三磷酸脫氧核苷酸(dNTP) 3. Mg2+ 4. 模板 5. Taq DNA聚合酶 6. 反應(yīng)緩沖液 23、基因組DNA文庫：存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA的集合24、cDNA文庫 將某種細(xì)胞的全部mRNA通過逆轉(zhuǎn)合成cDNA，然后轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，得到含全部表達(dá)基因的種群。25、基因的定位誘變 利用合成DNA和重組DNA技術(shù)，使已克隆基因或DNA片段中的任何一個(gè)特定堿基發(fā)生取代、插入或缺失變化的過程，是基因工程和蛋白質(zhì)工程的重要手段。用到的主要技術(shù)： 寡核苷酸指導(dǎo)的定位誘變 盒式誘變(cassette mutagenesis) PCR定位誘變 1.4 重組體的導(dǎo)入和鑒定26、作為理想宿主的基本要求 能高效吸收外源DNA分子不具有限制修飾系統(tǒng)應(yīng)為重組缺陷型菌株根據(jù)載體類型選擇相應(yīng)宿主根據(jù)載體標(biāo)記選擇合適宿主具有安全性 27、常用的宿主細(xì)胞 1、大 腸 桿 菌： E.coli表達(dá)體系優(yōu)勢(shì)： （1）一種成熟的基因克隆表達(dá)的受體細(xì)胞 （2）繁殖迅速，培養(yǎng)代謝易于控制 （3） 易于進(jìn)行遺傳操作和高效表達(dá) 2、 酵 母：優(yōu)勢(shì)：基因結(jié)構(gòu)相對(duì)比較簡(jiǎn)單，便于基因工程操作；培養(yǎng)簡(jiǎn)單，適于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)，成本低廉；外源基因表達(dá)產(chǎn)物能分泌到培養(yǎng)基中，便于產(chǎn)物的提取和加工；不產(chǎn)生毒素，是安全的受體細(xì)胞。 3、哺乳類動(dòng)物細(xì)胞 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的缺點(diǎn)是，對(duì)組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要求高，培養(yǎng)和篩選細(xì)胞株的周期長(zhǎng)。 4、植物細(xì)胞28、外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞方法 外源DNA導(dǎo)入原核細(xì)胞外源DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)染感染酵母細(xì)胞哺乳動(dòng)物細(xì)胞植物細(xì)胞CaCl2包裝蝸牛酶形成原生質(zhì)體微量注射法電穿孔法磷酸鈣共沉淀法原生質(zhì)體融合法精子介導(dǎo)法微量注射法電穿孔法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化基因槍法花粉管法植物轉(zhuǎn)基因常用方法： 1、.載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)移系統(tǒng) 將外源基因重組進(jìn)入適合的載體系統(tǒng)，通過載體將攜帶的外源基因?qū)胫参锛?xì)胞，整合在核染色體組中并隨核染色體復(fù)制和表達(dá)。農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒（tumor-inducing plasmid）或 Ri質(zhì)粒(root-indcingplasmid)介導(dǎo)法是迄今為止植物基因工程中應(yīng)用最多、機(jī)理最清楚、最理想的載體轉(zhuǎn)移方法。2、基因槍轟擊法 將外源DNA包裹在微小的鎢粉或金粉顆粒的表面，借助高壓動(dòng)力射入受體細(xì)胞或組織，最后整合到植物基因組并得以表達(dá) 3 花粉管通道法 在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞，并進(jìn)一步地被整合到受體細(xì)胞的基因組中，隨著受精卵的發(fā)育而成為帶轉(zhuǎn)基因的新個(gè)體。 1.5、目的克隆的篩選與鑒定29、目的克隆的篩選 （1）抗生素抗性選擇法（2）插入失活法 （3）-半乳糖苷酶顯色反應(yīng)法（藍(lán)白篩選）30、目的基因序列鑒定 （1）菌落原位雜交：是將細(xì)菌從培養(yǎng)平板轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜上，然后將濾膜上的菌落裂菌以釋出DNA。將DNA烘干固定于膜上與32P標(biāo)記的探針雜交，放射自顯影檢測(cè)菌落雜交信號(hào)，并與平板上的菌落對(duì)位。（2）限制性酶圖譜分析（酶切后，進(jìn)行PCR，看是否有目的條帶） （3） DNA序列檢測(cè)（桑格 雙脫氧終止法）31、分子雜交技術(shù)Western blot（抗原抗體雜交） 原理及步驟：經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素膜NC膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分 Southern 雜交 DNA片段經(jīng)電泳分離后，從凝膠中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上，然后與探針雜交。被檢對(duì)象為 DNA ，探針為 DNA 或RNA步驟：Northern 雜交 RNA 片段經(jīng)電泳分離后，從凝膠中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上，然后與探針雜交。被檢對(duì)象為 RNA，探針為 DNA 或 RNA步驟：二、氨基酸和蛋白質(zhì)1、氨基酸等電點(diǎn)：在某一定PH溶液中，氨基酸所帶的正電荷和負(fù)電荷相等時(shí)的PH.2、蛋白質(zhì)來源：重組 人工合成天然蛋白：產(chǎn)量少、成本高；不易分離純化；易受病原侵染重組蛋白：高表達(dá)量、成本低；高純度；安全。 獲得重組蛋白的一般方法：（1）離體細(xì)胞中表達(dá)；（2）轉(zhuǎn)基因植物或動(dòng)物中表達(dá) 獲得重組蛋白的步驟：（1）分離目的基因 （2）目的基因連接到表達(dá)載體 （3）表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 （4）通過發(fā)酵培養(yǎng)細(xì)胞 （5）分離、純化目的蛋白 （6）得到目的蛋白3、細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)：1、繁殖速度快 2、蛋白質(zhì)產(chǎn)量高 3、易培養(yǎng)，花費(fèi)少 4、儀器成本低 缺點(diǎn)：1、無法表達(dá)分子量大的蛋白質(zhì)（50KD） 2、無法去除糖基或信號(hào)肽 3、真核生物的蛋白質(zhì)對(duì)細(xì)菌可能有毒害作用 4、無法很好處理富含2S鍵蛋白質(zhì)的S-S4、酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)： 優(yōu)點(diǎn)如上所述（第27題）+ （1）能表達(dá)分子量大的蛋白質(zhì)（50KD） （2）能去除糖基或信號(hào)肽 （3）有伴侶蛋白能協(xié)助一些蛋白質(zhì)的折疊 （4）能很好處理富含2S鍵蛋白質(zhì)的S-S5、病毒表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)： 缺點(diǎn)：（1）生長(zhǎng)緩慢 （2）寄主細(xì)胞的培養(yǎng)只能持續(xù)4-5天 （3）表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建比較費(fèi)時(shí)，不如酵母簡(jiǎn)單 優(yōu)點(diǎn)：（1）能表達(dá)分子量大的蛋白質(zhì)（50KD） （2）修正糖基和去除信號(hào)肽 （3）有伴侶蛋白能協(xié)助一些蛋白質(zhì)的折疊 （4）產(chǎn)量非常高，成本低。 三、蛋白質(zhì)的分離內(nèi)容概要：一、Disruption of cells（細(xì)胞裂解）:Osmotic（滲透作用）Enzymatic（酶法）Mechanical（機(jī)械壓力法）二、Clarification（澄清）: Centrifugation（離心）Filtration（過濾）三、Concentration（濃縮）: Precipitation(沉淀 凝聚)Ultra filtration（超濾）1、蛋白質(zhì)提純的方法及原理 （一）鹽析 原理：蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度取決于蛋白質(zhì)分子表面離子周圍的水分子數(shù)目，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。蛋白質(zhì)溶液中加入中性鹽后（主要用硫酸銨），由于中性鹽與水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，致使蛋白質(zhì)分子周圍的水化層減弱乃至消失。同時(shí)，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后由于離子強(qiáng)度發(fā)生改變，蛋白質(zhì)表面的電荷大量被中和，更加導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度降低，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。（二）柱層析法 分類 按層析的機(jī)理劃分： 吸附層析：利用吸附劑表面對(duì)不同組分吸附性能的差異，達(dá)到分離鑒定的目的。 分配層析：利用不同組分在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)不同，使之分離。 離子交換層析：利用不同組分對(duì)離子交換劑親和力的不同。 凝膠層析：利用某些凝膠對(duì)于不同分子大小的組分阻滯作用的不同。 原理 離子交換層析 離子交換基團(tuán)在水溶液中解離后，能吸引水中被分離物的離子，各種物質(zhì)在離子交換劑上的離子濃度與周圍溶液的離子濃度保持平衡狀態(tài)，各種離子有不同的交換常數(shù)，K值愈高，被吸附愈牢。洗脫時(shí)，增加溶液的離子強(qiáng)度，如改變pH，增加鹽濃度，離子被取代而解吸下來。洗脫過程中，按K值不同，分成不同的區(qū)帶。 凝膠層析 凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下時(shí)路程較長(zhǎng)，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開了親和層析 親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應(yīng)的抗體（或抗原）發(fā)生特異性結(jié)合，而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應(yīng)抗體（或抗原）選擇性地結(jié)合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開，達(dá)到分離提純的目的。疏水作用層析 蛋白質(zhì)表面一般有疏水與親水基團(tuán)，疏水作用層析是利用蛋白質(zhì)表面某一部分具有疏水性，與帶有疏水性的載體在高鹽濃度時(shí)結(jié)合。在洗脫時(shí)，將鹽濃度逐漸降低，因其蛋白質(zhì)疏水性不同而逐個(gè)地先后被洗脫而純化，可用于分離其它方法不易純化的蛋白質(zhì) 基本原理如圖所示： L+HSLHS+WP：固相支持物L(fēng)：疏水性配體S：蛋白質(zhì)或多肽等生物大分子H：疏水補(bǔ)丁W：溶液中水分子P沒有活性蛋白的提純方法（三）電泳 1、聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE） 蛋白質(zhì)在SDS-聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度決定于蛋白質(zhì)分子的大小，SDS是一種去垢劑，可以與蛋白質(zhì)分子相結(jié)合，使其變性并帶上大量的負(fù)電荷，同時(shí)變成棒狀，從而掩蓋了蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的差異。蛋白質(zhì)分子的遷移率與蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)成直線關(guān)系。根據(jù)樣品的遷移率不同，可以將不同中蛋白質(zhì)分開。SDS的作用：SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，其所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異。 2、活力單位：在最適條件（25）下，每分鐘內(nèi)催化1微摩爾（mol）底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量定為一個(gè)活力單位 酶活力也稱為酶活性，是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。 酶的比活力代表酶制劑的純度。指每毫克蛋白所含的酶活力單位數(shù)。對(duì)于同一種酶來說，比活力愈大，表示酶的純度愈高。 3：HPLC,即高壓液相色譜法，是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)上，流動(dòng)相改為高壓輸送;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器，可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。FPLC全稱為快速蛋白液相色譜，其原理與高效液相色譜理論類似，是由經(jīng)典的液體柱層析引入氣相色譜理論，并且對(duì)相體進(jìn)行了改革，配用高壓輸液泵，采用高靈敏檢測(cè)器、梯度洗脫裝置、自動(dòng)收集裝置和微機(jī)等發(fā)展起來的現(xiàn)代液相色譜. 四、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析1、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定的方法及其優(yōu)缺點(diǎn)： （一）X射線晶體衍射圖譜法 晶體X射線衍射是X射線在蛋白質(zhì)晶體中發(fā)生的衍射現(xiàn)象。當(dāng)X射線入射到晶體分子上時(shí)，晶體上的每個(gè)原子使射線發(fā)生散射，散射的波之間相互疊加發(fā)生衍射，衍射的結(jié)果隨蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的不同而有所不同，并以此來確定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)步驟：1、提純蛋白質(zhì) 2、經(jīng)過柱層析分離蛋白質(zhì) 3、電泳 4、懸滴法使蛋白質(zhì)結(jié)晶 5、X射線照射晶體，根據(jù)衍射圖譜分析蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)。優(yōu)點(diǎn)：分辨率高； 缺點(diǎn)：蛋白質(zhì)結(jié)晶難（X射線晶體衍射要求蛋白質(zhì)處于晶體狀態(tài)）；難以測(cè)定膜蛋白結(jié)構(gòu)；要求蛋白質(zhì)純度高。（二）核磁共振 處于某個(gè)靜磁場(chǎng)中的自旋核系統(tǒng)在收到一定頻率的射頻磁場(chǎng)作用時(shí)，共振吸收某一射頻頻率輻射，電子由基態(tài)躍遷激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，就會(huì)釋放出射頻，被檢測(cè)器檢測(cè)而成像，根據(jù)成像確定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)步驟：1、13C和/或15N標(biāo)記蛋白質(zhì) 2、在水溶液中濃縮蛋白質(zhì) 3、將樣品置于一定的外界磁場(chǎng)中，13C和15N原子核會(huì)發(fā)生自旋產(chǎn)生的磁場(chǎng)與外界磁場(chǎng)相