植物病毒田間接種、傳染方式教材.doc

實(shí)驗(yàn)六 植物病毒病及其傳染方式一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼J(rèn)識(shí)植物病毒形態(tài)和病毒病主要癥狀類型，通過(guò)植物組織汁液的摩擦接種和蚜蟲(chóng)傳播試驗(yàn)了解病毒病的主要傳染方式。二、講解要點(diǎn)1病毒顆粒很小，必須用電子顯微鏡才能觀察到。植物病毒顆粒可以分為圓球狀（或等邊多面體）、炮彈狀、長(zhǎng)桿狀和線條狀4種。這些在課堂和本次實(shí)驗(yàn)課上只能通過(guò)觀看電鏡照片或幻燈片來(lái)了解。2植物病毒病的主要癥狀類型有花葉、變色、條紋、枯斑或環(huán)斑壞死、畸形。應(yīng)該注意：一方面這些癥狀類型的分辨在病毒病鑒定上具有比起它病害更重要的意義，另一方面在實(shí)際觀察中，也會(huì)發(fā)現(xiàn)同一種病毒病在發(fā)病過(guò)程中或在不同環(huán)境條件下會(huì)有不同的表現(xiàn)（不同病狀甚至隱癥）。3病毒病多為系統(tǒng)性侵染，沒(méi)有病征，易與非侵染性病害相混淆，往往需要通過(guò)一定方式的傳染試驗(yàn)證實(shí)其傳染性。植物病毒病的傳染方式有：機(jī)械（摩擦）接觸傳染、嫁接傳染、介體（包括昆蟲(chóng)、線蟲(chóng)、真菌、螨類和菟絲子）傳染、花粉及種子傳染等。由于病毒是專性寄生物，它的侵染來(lái)源都與活體（活的動(dòng)、植物體或介體）有關(guān)，傳染要使病毒接觸活體。例如汁液摩擦接種，要用新鮮的病毒汁液，摩擦的目的是造成寄主植物體表面的微傷，使病毒有可能進(jìn)入活的細(xì)胞，過(guò)重的損傷造成組織壞死并不利于病毒的傳染。蚜蟲(chóng)、飛虱等刺吸式口器昆蟲(chóng)取食植物汁液的方式更容易滿足植物病毒傳播的兩方面要求。4大白菜病毒病的癥狀為幼苗受侵后首先心葉出現(xiàn)明脈即沿葉脈失綠，繼呈花葉及皺縮。成株被害，出現(xiàn)不同程度的葉片皺縮、變硬而脆，后期出現(xiàn)褐色斑點(diǎn)或褐色壞死條紋；植株矮化。我國(guó)十字花科蔬菜病毒病主要由蕪菁花葉病毒（簡(jiǎn)稱TuMV）、黃瓜花葉病毒（簡(jiǎn)稱CMV）和煙草花葉病毒（簡(jiǎn)稱TMV）所致，前兩種病毒能由蚜蟲(chóng)和汁液傳染，第三種只能以汁液傳染。馬鈴薯病毒病主要是皺縮花葉病和卷葉病兩種。前者的癥狀為葉片皺縮、變??；葉尖向下彎曲，全株矮化，葉片色澤深淺不均，以后出現(xiàn)黑褐色壞死斑，質(zhì)地變脆，嚴(yán)重時(shí)全株發(fā)生壞死性葉斑，自下而上枯死。馬鈴薯皺縮花葉病是由馬鈴薯X病毒（簡(jiǎn)稱PVX）和馬鈴薯Y病毒（簡(jiǎn)稱PVY）兩種病毒復(fù)合侵染引起的。PVX只能由汁液傳染，昆蟲(chóng)不傳染。PVY的傳染方式有汁液與蚜蟲(chóng)傳染。馬鈴薯卷葉病的癥狀為葉緣向上卷曲，病重時(shí)呈圓筒狀。葉片色澤較淺，有時(shí)葉背面呈紅色或紫色。葉片變厚變脆，病葉不出現(xiàn)萎蔫下垂的現(xiàn)象，矮化亦不甚明顯。其病原物是馬鈴薯卷葉病毒（簡(jiǎn)稱PLRV），只能由蚜蟲(chóng)傳染，而汁液接觸無(wú)傳毒效果。三、實(shí)驗(yàn)材料及用具1病毒顆粒的電鏡照片或幻燈片、病毒病各類癥狀的照片或幻燈片。2毒源：溫室種植或田間采到的大白菜病毒病植株，或由帶毒的馬鈴薯塊莖培育的幼苗和田間病株。3在隔離的病毒溫室或防蟲(chóng)紗籠內(nèi)培育的無(wú)毒健壯苗：14片真葉的大白菜幼苗（品種如小白口）或34片真葉的普通煙草及心葉煙幼苗，4片真葉的千日紅幼苗或4片真葉的洋酸漿幼苗。4傳毒介體昆蟲(chóng)：室內(nèi)防蟲(chóng)籠內(nèi)飼養(yǎng)的無(wú)毒桃蚜（無(wú)翅蚜）。5磷酸緩沖液，配方為：KH2PO4 5.445g NaHPO412H2O 21.49g 蒸餾水 1000mL。配制方法為兩種藥品分別溶于水后，加足水量混和。6磷酸皂制備，配方為：洗衣肥皂 20份，Na3PO4 5份，水 100份。制備方法為，先將洗衣皂切成薄片，溶解在沸水中，然后加入磷酸鈉，全部溶解攪勻呈糊狀，放在定型容器內(nèi)使其自然干固備用。7病毒試驗(yàn)溫室及防蟲(chóng)籠 病毒試驗(yàn)溫室一般都有隔離條件較好的小房間，通氣窗要安裝40篩目紗網(wǎng)，工作人員進(jìn)出都要注意不能帶進(jìn)昆蟲(chóng)。養(yǎng)蟲(chóng)籠和防蟲(chóng)籠往往是同一設(shè)備，為方形或圓筒形框架上復(fù)以40篩目紗網(wǎng)，或在側(cè)面或在頂部設(shè)開(kāi)口，裝上袖套以便操作。8其他：400600篩目金剛砂，放在帶網(wǎng)口的瓶中或紗布袋內(nèi)、研缽、剪子或刀片、紗布、洗瓶、毛筆、培養(yǎng)皿、蒸餾水、40%樂(lè)果乳劑。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、觀察照片或幻燈片、病害標(biāo)本，認(rèn)識(shí)病毒形態(tài)及病毒病癥狀的主要類型。2、病毒汁液磨擦接種（1）取大白菜病毒病癥狀典型的病葉（或馬鈴薯病毒病葉片）去掉大的葉脈，剪碎置于研缽中，加適量的磷酸緩沖液，研磨成泥漿狀，用雙層紗布濾出汁液，作為接種用病毒汁液。（2）用磷酸皂洗手并用清水沖凈，取健康的大白菜幼苗及千日紅幼苗（或洋酸漿幼苗及心葉或普通煙幼苗，作馬鈴薯病毒病傳染試驗(yàn)用），作好標(biāo)記，在每株上選已展開(kāi)的生長(zhǎng)正常的兩片葉，先在葉正面撒少許金剛砂，左手托葉背，右手食指沾病毒汁液在葉面輕輕往返磨擦4次，立即用洗瓶?jī)?nèi)的清水沖洗。（3）用磷酸肥皂洗手并用清水沖洗，按與（2）相同的程序進(jìn)行，只是手指不沾病毒汁液而只是沾磷酸緩沖液磨擦葉面，作為未擦病毒的對(duì)照。（4）將處理過(guò)的幼苗移入無(wú)蟲(chóng)的溫室內(nèi)培育，經(jīng)過(guò)4-7天和2-3星期后觀察發(fā)病情況并分析結(jié)果。3、蚜蟲(chóng)傳毒實(shí)驗(yàn)（1）用毛筆取無(wú)毒桃蚜50-100頭，放在干燥的培養(yǎng)皿內(nèi)，饑餓2小時(shí)后，再移到大白菜病毒病株（或馬鈴薯病毒病侏）上，飼毒24小時(shí)。（2）將飼過(guò)毒的桃蚜移到防蟲(chóng)籠中的5株健康的大白菜苗和5株千日紅苗（或同樣數(shù)目的洋酸漿苗和心葉煙或普通煙苗）上，每株5-10頭，飼食24小時(shí)后噴2000倍40%樂(lè)果乳油殺死蚜蟲(chóng)。（3）取50-100頭無(wú)病桃蚜，在干燥的培養(yǎng)皿中饑餓24小時(shí)后，移到5株健康的大白菜苗和5株千日紅苗（或同樣數(shù)目的洋酸漿苗和心葉煙或普通煙苗）上，每株也是5-10頭，飼食24小時(shí)后噴2000倍40%樂(lè)果乳油殺死蚜蟲(chóng)，以此作為對(duì)照處理。（4）經(jīng)過(guò)上述處理的幼苗，置溫室內(nèi)培育2-3周后觀察發(fā)病情況。五、作業(yè)1、參