葉綠體色素含量的測定.doc

葉綠體色素含量的測定 -分光光度法中文摘要：本實(shí)驗(yàn)利用菠菜葉作為原料用80%的丙酮提取葉綠體色素，應(yīng)用分光光度計(jì)在某一特定波長下所測定的吸光度，帶入公式計(jì)算出色素溶液中各色素濃度。英文摘要：In this experiment , we used spinach leaves as raw material and used 80% of acetone to extract pigments from them ,and apply spectrophotometer at a particular wavelength to determine absorbance, then take the absorbance into the formula to calculate concentration of each pigment.實(shí)驗(yàn)原理：利用80%丙酮提取葉綠體色素，葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素最大吸收峰的波長分別是663nm、646nm和470nm。根據(jù)分光光度計(jì)測定的吸光度值，可以計(jì)算出丙酮提取液中葉綠體色素含量。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆辗止夤舛确▽θ~綠素a、葉綠素b、葉綠素總濃度和類胡蘿卜素總濃度測定和計(jì)算的方法。實(shí)驗(yàn)器材和試劑：1、材料：菠菜葉片2、 用具：分光光度計(jì)、天平、研缽、漏斗、剪刀、容量瓶、燒杯、濾紙、滴管等3、試劑：80%丙酮、石英砂和碳酸鈣實(shí)驗(yàn)步驟：1.葉綠體色素的提取取新鮮菠菜葉片0.5克,擦干,去中脈,剪碎放入研缽;加入少許石英砂和CaCO3,再加入80%丙酮3ml,研磨成勻漿,再加80%丙酮10ml,靜置10分鐘;用漏斗濾去殘?jiān)?用丙酮反復(fù)沖洗研缽、殘?jiān)翢o色;用容量瓶定容至50ml 。2.吸光度的測定取光徑1cm比色杯，注入上述葉綠素提取液,以80%丙酮注入另一同樣的比色杯內(nèi)作為空白對照,在波長663、646和470nm下測定吸光度。3.結(jié)果計(jì)算依據(jù)下列丙酮提取液中色素濃度計(jì)算公式,分別計(jì)算出葉綠素a、b的濃度及其葉綠素總濃度和類胡蘿卜素的濃度。計(jì)算公式80%丙酮提取液中色素濃度的計(jì)算Ca（葉綠素a）=12.2A663-2.81A646Cb（葉綠素b）=20.13A646-5.03A663CT（葉綠素）=Ca+Cb=17.32A646+7.18A663Cx.c（類胡蘿卜素）=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229葉綠體色素含量=實(shí)驗(yàn)結(jié)果：波長吸光度平均值663nm0.8190.8160.8170.817646nm0.4140.4240.4210.420470nm0.8280.8460.8470.840Ca（葉綠素a）=12.20.817-2.810.420=8.7872mg/LCb（葉綠素b）=20.130.420-5.030.817=4.3451mg/LCT（葉綠素）=Ca+Cb=13.1323mg/LCx.c（類胡蘿卜素）=(10000.840-3.278.7872-1044.3451)/229=1.5693mg/LCa（葉綠素a）含量=8.7872mg/L0.05L1/0.5g=0.8787=87.87mg/gCb（葉綠素b）含量=4.3451mg/L0.05L1/0.5g=0.4345=43.45mg/gCx.c（類胡蘿卜素）含量=1.5693mg/L0.05L1/0.5g=0.1569=15.69mg/g實(shí)驗(yàn)討論：1. 葉綠素a、b在藍(lán)色區(qū)也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長進(jìn)行葉綠素的定量分析？為什么？定量分析的吸收峰必須要穩(wěn)定，還要有強(qiáng)的吸收。另外，還需要考慮干擾的問題。光合色素除了葉綠素外還有類胡蘿卜素，類胡蘿卜素主要吸收藍(lán)光，為了排除干擾，要選用紅光。2為什么提取葉綠素時(shí)干材料一定要用80%的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提??？在植物缺水時(shí)，植物體中的葉綠素含量會降低。干材料與新鮮材料相比水分含量較少，用無水丙酮提取不如80%丙酮下提取效果好。葉綠素的提取除了丙酮也可以用其他的提取試劑，石油醚乙醇、乙醚乙醇、乙醚。從菠菜葉中提取葉綠體色素時(shí)，用丙酮研磨法提取葉綠素的效率比石油醚乙醇萃取法高，乙醚研磨法提取葉綠素的效果明顯不如丙酮，用石油醚研磨法的效果最次，這表明最佳的提取劑為丙酮，其次為石油醚一乙醇。但用混合溶劑提取的葉綠素的純度要比用單一溶劑提取的高，生產(chǎn)中可根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行合理選用。不同有機(jī)溶劑用直接浸提法和Arnon法從菠菜葉片中提取葉綠素的效率不同。有人做過此類提取實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明,用丙酮、乙醇浸提法提取葉綠素的效率比丙酮、乙醇Arnon法高,甲醇、乙醚浸提法提取葉綠素的效果明顯不如丙酮-乙