血細胞比容測定講稿.ppt

,血細胞比容測定,一、概念,血細胞比容（Hematocrit，HCT或packedcellvolume，PCV）是指一定容積血液中紅細胞在全血所占體積的百分比。,二、檢測原理,（一）、溫氏法:將EDTA-K2抗凝血在一定條件下離心沉淀，由此而測出其紅細胞在全血中所占體積的百分比。,（二）、微量法:是采用一次性使用的經肝素化的干燥毛細玻璃管（每支含肝素2）直接采集末梢血，以相對離心力1000g(1100012000r/min)離心5min，取出后用尺量取血液總長度和血細胞層的長度，或用微量血細胞比容測定讀數(shù)器報告結果。,（三）、血液分析儀法：目前絕大多數(shù)血液分析儀使用電阻抗法進行細胞計數(shù)和血細胞比容測定。其原理是利用血漿是電的良導體，而相對血細胞是電的不良導體，當細胞通過小孔時，形成相應大小的脈沖，脈沖的多少即為血細胞的數(shù)目，脈沖的高度代表血細胞的體積。,使用血液分析儀法的血細胞比容是由測定紅細胞平均體積和紅細胞計數(shù)兩項指標后導出，即血細胞比容（HCT=紅細胞平均體積X紅細胞計數(shù)）,（四）、相對離心力1、相對離心力（RCF）g=1.118x10-5x有效離心半徑（cm）x轉速2/min,2、溫氏法測定時以相對離心力2264g（即有效離心半徑22.5cm，3000r/min）離心30min，讀取紅細胞層的高度。,3、微量法測定時以相對離心力1000g（1100012000r/min）離心5min，取出后用尺量取血液總長度和血細胞層的長度。,三、檢測方法及方法學評價,（一）、檢測方法1、溫氏法:壓積容量管長11cm，內經2.5cm，管上刻有0100mm刻度的平底管，其讀數(shù)一側由下而上供測紅細胞容積用，另一側由上而下供紅細胞沉降率測定用）,2、微量法:按常法消毒、穿刺手指，將血液經自然毛細現(xiàn)象進入特制的毛細玻管中（肝素），用套塞或橡皮泥堵塞一端，放入專用離心機中，以1100012000r/min高速離心5min。測量紅細胞層和全層的長度，計算比值，即為紅細胞比積。,（二）、方法學評價1、溫氏法：中速離心3000r/min，離心30min；離心沉淀過程中不能完全排除紅細胞間殘留的血漿，使結果偏高；所用時間長、標本多，已屬淘汰之列。,2、微量離心法：高速離心11000-12000r/min，離心5min；離心力較大，紅細胞間殘留的血漿量平均較溫氏法低2%（約含1%-3%殘留血漿）；標本用量小，操作簡便，現(xiàn)被WHO定為首選常規(guī)方法。,3、血液分析儀法：目前血液分析儀提供的參數(shù)中包括Hct測定，由于結果是儀器測定數(shù)萬個細胞體積產生的脈沖疊加后換算而來的，避免了血漿殘留引起的誤差。但應當注意患者紅細胞增多、白細胞和血小板數(shù)量明顯增多、患者血漿中有異常蛋白質或血漿滲透壓異常時，儀器法常會出現(xiàn)誤差。,四、質量控制,（一）、手工法：應注意以下因素1、抗凝劑量不準確或抗凝劑與血液混勻不充分致血液凝固。2、離心速度不夠或時間過短均會產生誤差。3、所用器材必須清潔干燥，避免溶血,4、紅細胞形態(tài)改變時應注明（如大紅細胞、小紅細胞、橢圓形紅細胞、鐮形紅細胞等），變形性減低的紅細胞可使血漿殘留量增加6%。不能使用改變紅細胞容積的抗凝劑。,5、紅細胞增多癥時，血細胞比容明顯增加，血漿殘留量亦會增加。6、避免血液稀釋（靜脈三通管抽血）7、離心條件必須恒定。,（二）、血液分析儀法：1、避免溶血2、避免血液稀釋（靜脈三通管抽血）3、應注意Hct與紅細胞計數(shù)和紅細胞平均體積測定值的相關性。,五、參考值,1、溫氏法男40%54%女37%47%2、微量法男38%48%女36%47%3、血細胞分析儀,六、臨床意義,（一）、增高1、見于各種原因所致的血液濃縮，如大量嘔吐、大手術后、腹瀉、失血、大面積燒傷,2、真性紅細胞增多癥和繼發(fā)性紅細胞增多癥3、用于臨床補液及輸液量的依據(jù),（二）、減低1、見于各種貧血。紅細胞減少，紅細胞比積隨之減少，但不同原因的貧血，紅細胞體積大小不同，兩者減低不一定平行，故臨床常用計算紅細胞平均容積、紅細胞平均血紅蛋白含量和紅細胞平均血紅蛋白濃度，有助于貧血的鑒別與分類。,2、可用作計算MCV、MCHC的基礎數(shù)據(jù)，是影響全血粘度的決定因素之一（例血液粘度增高致休克）。3、大量飲水,紅細胞平均指數(shù),一、紅細胞平均指數(shù)包括：1、紅細胞平均容積（meancorpuscularvolume，MCV），指每個紅細胞平均體積的大小，以飛升（fl）為單位；,2、紅細胞平均血紅蛋白含量（meancorpuscularhemoglobinMCH），指每個紅細胞內平均所含血紅蛋白量，以皮克（pg）為單位；,3、紅細胞平均血紅蛋白濃度（meancorpuscularhemoglobinconcentration，MCHC），指平均每升紅細胞中所含血紅蛋白濃度（g/L）。,二、檢測原理,對同一抗凝血標本同時計數(shù)紅細胞、測定血紅蛋白和血細胞比容，由此可進一步計算出紅細胞3個平均指數(shù)。,1、MCV（fl）=每升血液中紅細胞體積/每升血液中紅細胞數(shù)=Hct/RBC例：紅細胞為3.50*1012/L，紅細胞比容0.36則：MCV=0.36/3.50*1012/L=103fl,2、MCH（pg）=每升血液中血紅蛋白含量/每升血液中紅細胞個數(shù)=HB/RBC例：紅細胞為3.50*1012/L，血紅蛋白為120g/L，則：MCH=120g/L/3.50*1012/L=34.20pg,3、MCHC（g/L）=每升血液中血紅蛋白含量/每升血液中紅細胞體積=HB/Hct例：血紅蛋白為120g/L，血細胞比容為0.36，則：MCHC=120g/L/0.36=333g/L,三、方法學評價,1、MCV儀器法CV1%，手工法CV值在10%左右。許多血液分析儀設定的MCV值最大域值是360fl，因此可能包含紅細胞團塊，當紅細胞凝集如冷凝集綜合征可引起MCV假性增高；嚴重的高血糖癥（葡萄糖高于33.3mmol/L）可引起紅細胞腫脹，使MCV假性增高。,2、MCH高脂血癥或白細胞增多癥因血漿濁度增加而使MCH假性增高，手工法測定可先離心以消除濁度，測定結果可以得到糾正。儀器法CV為0.6%1.2%，手工法CV值在10%左右。,3、MCHC這個值和血紅蛋白的溶解度有關，血紅蛋白濃度高于該值可能會產生結晶。此外，手工法MCHC的測定受到Hct（血漿殘留或出現(xiàn)異常紅細胞）和Hb（高脂蛋白血癥、白細胞增多癥）的影響。儀器法CV為1%1.5%，,四、質量控制,1、手工法由于紅細胞3個平均指數(shù)都是間接算出的，因此，做紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、血細胞比容的測定必須用同一份抗凝血標本，且所測定的數(shù)據(jù)必須準確，否則誤差很大。,2、血液分析儀法必須注意紅細胞3個平均指數(shù)之間與紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、血細胞比容測定3個檢測指標之間的相互關聯(lián)性。必須注意不能溶血。,五、參考值,1、手工法：MCV80-92fl；MCH27-31pg；MCHC320-360g/L；2、儀器法：MCV80-100fl；MCH27-34pg；MCHC320-360g/L；,六、貧血的紅細胞形態(tài)學分類,貧血分類MCVMCHMCHC貧血正細胞性貧血正常正常正常再障、急性失血性貧血、某些溶貧大細胞性貧血增高增高正常各種造血物質缺乏或利用不良的貧血巨幼細胞性貧血單純小細胞貧血減低減低正常慢性感染、慢性肝腎疾病性貧血小細胞低色素貧血減低減低減低缺鐵性貧血及鐵利用不良貧血、慢性失血性貧血、地中海貧血,紅細胞直徑和厚度測定,一、器材及使用（一）、器材1、接目測微器：這是一圓形玻片，正中刻有50或100等分格，每小格相當于多少微米，必須根據(jù)當時所用顯微鏡鏡筒長度以及目鏡、物鏡的放大倍數(shù)而改變。,2、鏡臺測微器：這是用以校正接目測微器，外觀與載玻片相似，正中有一圓形蓋片封有標準尺，總長為1mm，分為100等分，因此每格為10um。,（二）校正1、接目測微器的校正：（1）將接目測微器放在接目鏡內，鏡臺測微器放在鏡臺上，用低倍鏡找到標準尺，并移至視野中央，換用測量所用物鏡，校正目鏡測微器，測量紅細胞直徑則換油鏡。,（2）移動載物臺，使鏡臺測微器標準尺與目鏡測微器的刻度平行，使左側線與零重合，然后觀察刻度與標準尺右側的重合線，分別記錄其格數(shù)，計算目鏡測微器在此放大倍數(shù)下每格的微米數(shù)。,（3）如目鏡測微器40格與鏡臺測微器6格重合，則目鏡測微器每格的微米數(shù)=6*10um/40=1.5um式中：6為鏡臺測微器實測格數(shù)；10um為鏡臺測微器每小格的長度；40為目鏡測微器實測格數(shù)。,（4）目鏡測微器經校正后，不得更換物鏡、目鏡，也不能改變鏡筒長度。變換顯微鏡后，必須重新校正。,二、紅細胞平均直徑測定,（一）、方法與步驟1、按常規(guī)制備一張薄血膜涂片，立即干燥固定，瑞氏染色。2、把鏡臺測微器換為被檢血片，選擇細胞分布均勻而較稀疏的區(qū)域，依次測量每個紅細胞的直徑，共測500個紅細胞。,3、測量時，按紅細胞直徑所占目鏡測微器格數(shù)做記錄，對異性紅細胞應測量長、短徑，取其平均值。記錄方式以0.5格為一記錄單位。,4、計算紅細胞平均直徑紅細胞平均直徑=被測細胞總格數(shù)/被測細胞數(shù)*目鏡測微器每格相當微米數(shù)如：被測細胞總格數(shù)為980；被測細胞數(shù)為200；目鏡測微器每格的微米數(shù)為1.5um，則紅細胞平均直徑=980/200*1.5um=7.4um,5、繪制紅細胞直徑曲線。以紅細胞直徑微米數(shù)為橫坐標，紅細胞百分率為縱坐標將各種不同直徑的紅細胞百分率連接起來，即成紅細胞直徑曲線。它可以清楚地反應紅細胞的大小和其分布情況。,（二）、正常參考值紅細胞直徑6.7-7.7um,（三）、臨床意義1、正常人紅細胞直徑大小差別不大，直徑曲線基底窄，呈突出的尖峰狀，其頂點位于7-8um之間，紅細胞直徑曲線基底愈寬、頂點愈低，表示紅細胞大小不均，差異愈大。,2、主要用于貧血的鑒別診斷。（1）小紅細胞貧血時，平均紅細胞直徑小于正常參考范圍，平均直徑6.26.7um，曲線基底略寬，頂峰左移，如有紅細胞大小不均時，使曲線的基底部增寬。,（2）大細胞性貧血時，紅細胞平均直徑大于正常參考范圍，紅細胞平均直徑7.59.6um，紅細胞直徑曲線的頂峰偏右，底部明顯變寬，曲線平坦。,（3）如果在正常細胞性貧血時，其紅細胞平均直徑及其曲線圖形與正常相同。如急性失血性貧血。,(四)、方法學評價,1、紅細胞直徑測定簡單易行，不須特殊設備，對貧血的鑒別診斷有一定價值。但由于血涂片厚薄不同及推片技術差異，常使紅細胞產生人為的變化；推制的學涂片必須厚薄適宜，無紅細胞重疊，血片制成后，應迅速干燥固定，以免紅細胞皺縮變形。病理形態(tài)的紅細胞也影響準確的直徑測定，取其平均值記錄。,2、目鏡測微器一旦校正后，就不能任意更換鏡頭，也不能任意改變鏡筒的長度，以免改變放大倍數(shù)，否則應重新校正。3、測量時應選擇紅細胞分布均勻的體尾交界處，依次測量200500個紅細胞的直徑，不能任意取舍。,4、血細胞分析儀可根據(jù)測量的單個紅細胞體積，計算出體積的變異系數(shù)即RDW，能客觀地、正確地反映紅細胞大小不等程度，結合紅細胞體積直方圖分析，對貧血的鑒別診斷更有價值。,三、紅細胞平均厚度的計算,紅細胞平均厚度=紅細胞平均體積/(紅細胞平均直徑/2)2例如：紅細胞平均體積88fl，紅細胞平均直徑7.2um則：紅細胞平均厚度=88/3.1416*（7.2/2）2=2.16um,臨床意義：1、正常紅細胞平均厚度為2um左右。2、患遺傳性球性紅細胞性貧血和巨幼紅細胞性貧血時，較正常略厚；3、單純小細胞性貧血和阻塞性黃疸時，較正常略薄。,紅細胞體積分布寬度,一、概念,紅細胞體積分布寬度（redbloodcellvolumedistributionwidth,RDW）是一個較新的紅細胞參數(shù)，由血液分析儀根據(jù)紅細胞體積的直方圖導出，反映所測標本中紅細胞體積大小的異質程度，常用變異系數(shù)（CV）表示。,二、檢測原理,檢測原理與血液分析儀紅細胞計數(shù)相同，多采用電阻抗原理，當紅細胞通過計數(shù)小孔時，取代了相同體積的電解質溶液，使原來恒流的電路上孔電阻瞬時增加，于是產生脈沖信號，有多少個紅細胞通過小孔，就有多少個脈沖信號產生，且脈沖信號的強弱和細胞大小成正比。對被檢測的所有紅細胞體積進行統(tǒng)計學分析，則導出RDW值。,三、方法學評價,1、對紅細胞體積大小的評價，過去主要靠推片對紅細胞形態(tài)的觀察，這種觀察受到許多因素的影響，如血涂片制作技術、血片的厚薄以及觀察者的主觀因素的影響較大，而且不能定量。,2、儀器法測定數(shù)萬個紅細胞后，由直方圖導出RDW值，是一個定量的值，同時克服了人工觀察的各種主觀和客觀誤差，能更準確更客觀地反映紅細胞體積的異質性的程度。,3、相比較而言，MCV值只反映紅細胞體積平均大小，不能代表紅細胞之間體積的差異，如只用MCV作為貧血的形態(tài)學分類參考依據(jù)，則可能會掩蓋病理性紅細胞體積大小的異質性實際情況，從而影響貧血分類的準確性。,四、質量控制,紅細胞分布寬度結果判斷應結合臨床及紅細胞直方圖的變化，同時分析RDW異常是否是由于紅細胞碎片紅細胞凝集或雙相性紅細胞引起。,五、參考值成人：11.6%-14.6%,六、臨床意義,1、進行貧血形態(tài)學新的分類2、缺鐵性貧血(irondeficiencyanemiaIDA)早期篩選診斷和療效觀察,3、鑒別缺鐵性貧血和-珠蛋白生成障礙性貧血，兩類貧血患者RDW變化：（1）缺鐵性貧血100%(53/53)RDW增高（2）88%(38/44)輕型-珠蛋白生成障礙性貧血患者的RDW正常提示RDW可作為兩類貧血的鑒別診斷指標.,4、用于貧血病因學鑒別診斷，腎性貧血RDW正常，肝性貧血RDW增高。,注意:RDW單獨指標不足以鑒別診斷貧血，應結合其他檢驗才能明確診斷。,紅細胞直方圖在貧血中的應用,不同貧血紅細胞體積的變化，使紅細胞體積分布圖形發(fā)生變化，結合其它參數(shù)對鑒別診斷頗有價值。,一、小細胞性貧血1、RDW正常：紅細胞主峰左移，分布在55100fl，頂峰在75fl，基底較窄，為典型小細胞均一性圖形，提示為小細胞低色素。見于輕型珠蛋白生成障礙性貧血，血涂片紅細胞體積變小，大小一致。,2、RDW輕度增高：紅細胞主峰左移，分布在55100fl，頂峰在65fl處。提示為小細胞低色素和細胞的不均一性，見于缺鐵性貧血，血涂片紅細胞體積變小，大小不一致。,3、RDW明顯增高：紅細胞顯示兩個細胞峰，小細胞峰明顯左移，峰頂位于50fl處，較大細胞峰頂位于90fl，基底較寬，提示小細胞低色素和細胞