組織病理切片以及HE染色;

1、 組織病理切片以及he染色（一）實(shí)驗(yàn)原理：蘇木素-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，he染色）能較好地顯示組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)，可用于觀察、描述正常和病變組織的形態(tài)學(xué)，而且he切片可較長(zhǎng)時(shí)間保存，被稱(chēng)為常規(guī)染色方法。（二）實(shí)驗(yàn)步驟：1、 制作切片1、取材、固定：取小鼠腎臟組織適當(dāng)大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。2、組織的脫水、透明、浸蠟與包埋組織固定后還需經(jīng)過(guò)脫水、透明、浸蠟等過(guò)程才能制成蠟塊，進(jìn)行石蠟切片。脫水是指用某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過(guò)程。組織脫水后，必須經(jīng)過(guò)一種既能與酒精相混合又能溶解石蠟的溶劑，通過(guò)這種溶劑的媒介作用，使石蠟浸入組織塊。在此過(guò)程中，

2、因組織塊中的水分被溶劑所取代，組織塊變得透亮，因此稱(chēng)之為透明。組織染色后也要進(jìn)行透明。最常用的透明劑為二甲苯，處理時(shí)間為30min左右。組織經(jīng)透明后在溶化的石蠟內(nèi)浸漬的過(guò)程稱(chēng)浸蠟。用其他浸透劑（如火棉膠、碳蠟和明膠等）滲入組織內(nèi)部的過(guò)程稱(chēng)為浸透或透入。為使石蠟充分滲入組織塊中，常需經(jīng)過(guò)3小時(shí)的浸漬，期間需更換3次石蠟。一般用于浸蠟的石蠟熔點(diǎn)為52-56。組織塊經(jīng)過(guò)浸蠟或浸透，用包埋劑（石蠟、火棉膠、碳蠟和樹(shù)脂等）包起的過(guò)程稱(chēng)包埋，包埋后便制成含組織的塊。這種包埋塊可使組織達(dá)到一定的硬度和韌度，有利于切成薄片。石蠟包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。用于包埋的石蠟熔點(diǎn)一般為60左右。但在有些情

3、況下，如某些酶染色時(shí)，則需采用低溫石蠟包埋，以保存組織內(nèi)酶的活性。3、切片、制片石蠟切片常用的切片機(jī)有輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)和平推式切片機(jī)，以前者為多用。切片厚度一般為3-5m。切片時(shí)先將組織片平攤于一塊玻璃上，迅速滴加30的酒精水溶液使組織片完全展開(kāi)，再移入40恒溫?zé)崴髦?。也可直接將組織切片移入40的恒溫?zé)崴髦?，待組織片完全展開(kāi)后將其貼附于載玻片上，經(jīng)56-60烤片30-60min后即可進(jìn)行染色。2、 he染色1. 二甲苯脫蠟210 min；2. 無(wú)水乙醇洗去二甲苯25min；3. 95、80乙醇各l0 min，自來(lái)水洗l min（不要讓急水直接沖至載玻片上的組織），蒸餾水洗1min；4. 蘇木素染色4 min，自來(lái)水洗2 min；5. 1鹽酸酒精分化20 s（鏡下控制），自來(lái)水洗2 min；6. 1稀氨水返藍(lán)30s（鏡下控制），自來(lái)水洗2分鐘，蒸餾水洗1min；7. 伊紅染色90s；8. 80乙醇脫水10s，95酒精10s，無(wú)水乙醇5min；9. 無(wú)水乙醇10min；10.二甲苯210 min；11.中性樹(shù)膠或加拿大樹(shù)膠封片。（三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色。（四）實(shí)驗(yàn)