藥分實(shí)驗(yàn)：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證,一)目的,證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求，方法驗(yàn)證過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂說明中。,二)用途,（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。,（二）藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。,三)需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目,1. 鑒別試驗(yàn)； 2. 雜質(zhì)定量或限度檢查； 3. 原料或制劑中有效成分含量測定； 4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定； 5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。,驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。,四)驗(yàn)證內(nèi)

2、容,一、 準(zhǔn)確度（accuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。,測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。,回收試驗(yàn) 空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M,加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M,數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測三次。,1. 含量測定方法的準(zhǔn)確度,原料藥可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。,制劑可用含己知量被測物的各組分混

3、合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。,中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在95105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時(shí)，可要求在90110%范圍內(nèi)。RSD一般在3%以內(nèi)。,2雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。,二、精密度（precision） 精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、

4、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。,偏差（d）：測量值與平均值之差,標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）,相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱 變異系數(shù)（CV）,1. 重復(fù)性 在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進(jìn)行評價(jià)。,2. 中間精密度 同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。,3. 重現(xiàn)性 不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如

5、建立藥典分析方法時(shí)通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。,三、專屬性（specificity） 指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。,四、 檢測限（limit of detection， LOD） 檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。是限度試驗(yàn)參數(shù)，無需定量測定。常用%、ppm、ppb表示。,1非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。,2信噪比法 用于能顯示基線噪音的

6、分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）31或21時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。,3數(shù)據(jù)要求 應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。,五、定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。,常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為101時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定。,六、 線性 在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，

7、測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。,七、范圍 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。,八、 耐用性 指測定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。,2. 雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求。雜質(zhì)的定量測定除檢測限外，其它都要求。,3. 含量測定及溶出量測定除檢測限、定量限外，其它都要求。,九、應(yīng)用 1. 鑒別試驗(yàn)除專屬性、耐用性外，其它都不要求。,HPLC法測定撲熱息痛片劑中的對乙酰氨基酚含量方法學(xué)驗(yàn)證,工作曲線配制: 取對乙酰氨基酚對照品（0.1mg/mL）10mL、 8mL 、 6mL、 4mL、 2mL、 1mL用去離子水定溶置100mL。 方法驗(yàn)證用樣品溶液： 取9mL（3份）、 5mL（3份） 、 1.5mL（3份）對乙酰氨基酚對照品溶液用去離子水定溶置100mL。,專屬性樣品采用空白樣品 檢測限樣品：將工作曲線最低點(diǎn)用注射用水稀釋5、10倍