【doc】幽門螺桿菌的生物學(xué)與免疫學(xué)

1、幽門螺桿菌的生物學(xué)與免疫學(xué)(1生t,要用醫(yī)學(xué)進(jìn)修雜志1994年第22卷第1期幽門螺桿菌的生物學(xué)與免疫學(xué)|(f)微生物學(xué)教研室.垡墨瑩幽門螺桿菌(helicobacterpylor,hp)由已作為本菌感染的快速診斷務(wù)法之一.而且本marshall與warren于1983年首次從胃粘膜標(biāo)本中分離成功.此后越來(lái)越多的證據(jù)表明它與慢性胃炎,胃十二指腸潰瘍有密切關(guān)系.因而引起醫(yī)界的關(guān)注,相繼在細(xì)菌學(xué)和免疫學(xué)等方面作了大量研究,本文就這方面的情況作一簡(jiǎn)要介紹.1生物學(xué)性狀菌體在胃粘膜活檢標(biāo)本中呈弧形,s形或海鷗展翅狀.長(zhǎng)短不一,長(zhǎng)者可達(dá)6m.在胃粘液層中常呈魚群樣排列.新鮮培養(yǎng)物中菌體變長(zhǎng),彎曲度小,呈多

2、形態(tài).傳代培養(yǎng)后,苗體可變?yōu)榍蛐位驐U狀,染色也不均勻.革蘭氏染色陰性,單端有26根鞭毛,運(yùn)動(dòng)活潑.臨床上通過(guò)直接涂片,組織切片,組織印片和組織勻漿涂片染色鏡檢.染色方法很多,其敏感性約9o,但易與其它革蘭陰性桿菌相混雜,最近有人采用半gram染色法,菌體著深紅色,容易辨認(rèn),與培養(yǎng)相比,敏感性為92,特異性為100,該法價(jià)廉,快速,簡(jiǎn)單,最適合于常規(guī)應(yīng)用.利用相差顯微鏡觀察,只要將組織研碎,勿需染色便可發(fā)現(xiàn)形態(tài)典型,輪廓清楚的hp.由于hp單克隆抗體的制備,可以用熒光染色和pap染色查hp.目前寡核苷酸探針也用于對(duì)hp的檢查.hp為微需氧菌,室溫下3小時(shí)即死亡,故標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送檢,接種,否則影響檢

3、出率.goodwin報(bào)告以5o:,70co,8h,80nz的氣體環(huán)境下陽(yáng)性率較高,菌落生長(zhǎng)較密.hp營(yíng)養(yǎng)要求高,需動(dòng)物血和血清.最適生長(zhǎng)溫度37,ph68.25中則不生長(zhǎng),42中有少數(shù)生長(zhǎng),這與其它菌不同.本菌生長(zhǎng)緩慢,3天才見針狀透明無(wú)色菌落.生化反應(yīng)不活潑,尿素酶豐富,此系區(qū)別于其它彎曲菌的主要依據(jù)之一.測(cè)定尿素酶活性菌有堿性磷酸酶,dna酶,7谷氨酰胺肽酶,其它彎曲菌則沒有.joansl對(duì)5o株hp進(jìn)行了391項(xiàng)生化試驗(yàn),并推出了apizym生化鑒定盒.apzym可鑒定hp的生物型,并可將hp與其他彎曲苗加以區(qū)別.hp有3個(gè)生物型:i型可產(chǎn)生堿性磷酸酶,酸性磷酸酶和亮氨酸苷酰胺基酶i型除

4、上述外,還產(chǎn)生萘酚一aspl磷酸水解酶,脂酶和脂化脂肪酶.apizym鑒定hp在48小時(shí)出結(jié)果,該法迅速,簡(jiǎn)便.而常規(guī)生化檢測(cè)則需2472小時(shí).hp在0.06ttc,1苷氨酸,0.01亞硒酸血平板上生長(zhǎng),在3.5naci葡萄糖血平板上不生長(zhǎng).hp對(duì)多種抗生素敏感,而空腸彎曲菌(cj),胎兒彎曲菌(cf)對(duì)各抗生素的耐藥性比hp大10100倍.hp對(duì)氯霉素,潔霉素部分敏感對(duì)紅霉素,卡那霉素,枸櫞酸鉍,先鋒霉素i敏感,對(duì)呋喃坦啶,滅滴靈高度敏感.2免疫學(xué)診斷目前診斷感染方法主要有:活檢組織細(xì)菌培養(yǎng),粘膜涂片,組織切片染色鏡檢,尿素酶試驗(yàn)及呼吸試驗(yàn)等.呼吸試驗(yàn)需特殊儀器外,其他檢查均需經(jīng)胃鏡檢查取得

5、粘膜組織,故臨床推廣或多次重復(fù)檢查有一定難度.尋求簡(jiǎn)便有效,準(zhǔn)確可靠的診斷方法對(duì)深入研究hp感染極為重要,故目前國(guó)內(nèi)外對(duì)hp的免疫學(xué)診斷研究頗多.2.1抗原的選擇hp的菌體,鞭毛和分泌物等均能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體.利用不同抗原,可檢測(cè)到相應(yīng)的特異抗體.其中有些抗原特異性和敏感性不高.而有些則與其他菌體有交叉反應(yīng),特異性也不高.目前主要采用的抗原有:hp整菌抗原,其成分復(fù)雜,與cj,cf之間有交叉反應(yīng);超一2一,聲粉碎物,即培養(yǎng)4天的hp濃懸液經(jīng)超聲破膜處理3次制成的抗原.用吸收試驗(yàn)證實(shí)與大腸桿菌,cf,cj之間無(wú)交叉反應(yīng),sdspage電泳分析此抗原主要免疫反應(yīng)條帶為63kd,57kd和31

6、kd尿素酶抗原,hp富含尿素酶,細(xì)菌尿素酶刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗尿素酶抗體,通過(guò)檢測(cè)血清中尿素酶抗體而能診斷hp感染.用化學(xué)方法或用快速蛋白質(zhì)液相層析技術(shù)提純hp的尿素酶(分子量為31kd,56kd,61kd)作抗原,其特異性和敏感性高,與其他細(xì)菌無(wú)交叉反應(yīng)精制抗原或基困重組hp抗原,用化學(xué)方法提取高分子量的細(xì)胞相關(guān)蛋白(分子量400700kd);或用單克隆抗體親和層析柱純化到的hp分子上特異抗原決定簇用克隆免疫印跡法找出的特異反應(yīng)蛋白帶制成特異性強(qiáng)的精制抗原,如用hp單抗cp;純化的hp抗原25kd,其血清學(xué)診斷特異性和敏感性極高.利用重組基因技術(shù)將上述精制抗原克隆化,輸入大腸桿菌培養(yǎng)中克隆所

7、需基因,再用這些基因重組大腸桿菌表達(dá)出hp抗原,這樣可望獲得大量hp特異性抗原,從而使hp的免疫學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)化,目前已取得hp的66kd和31kd多肽抗原.2.2免疫學(xué)診斷方法2.2.1菌體抗體的檢測(cè)測(cè)定血清抗體的方法很多如補(bǔ)體結(jié)臺(tái)試驗(yàn).細(xì)菌凝集試驗(yàn).這兩種方法敏感性和特異性較差,目前很少使用.被動(dòng)血凝試驗(yàn)快速,不需事先除去非特異反應(yīng)素可作為hp感染的普查和既往感染者的指標(biāo).但該法陰性標(biāo)準(zhǔn)不易掌握可靠性欠佳.間接免疫熒光法簡(jiǎn)單,快速敏感和特異性高,可以彌補(bǔ)培養(yǎng)法由于hp弱,培養(yǎng)過(guò)程污染或培養(yǎng)基等因素所致陰性不足.但由于需熒光顯微鏡,因此,廣泛應(yīng)用受到限制.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)敏感性高,

8、特異性強(qiáng),穩(wěn)定性好,可檢測(cè)不同類型抗體,是臨床應(yīng)用最多的方法.目前國(guó)內(nèi)外均已有抗hp抗體試劑盒供應(yīng).elisa的特異性和敏感性與所采用的抗原有關(guān),morris等用l4株死菌檢測(cè)200例做實(shí)用醫(yī)學(xué)進(jìn)慘雜志1994年第22卷第1期過(guò)胃鏡患者的血清抗體,并與其它方法比較,發(fā)現(xiàn)該法敏感性為91,特異性75,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值82,陰性頂測(cè)值87.goodwin等以酸提取物為抗原,特異性97,敏感性81.perez等則發(fā)現(xiàn)超聲粉碎物作抗原,抗hpigg,iga抗體特異性94.4%,敏感性93.1t而1gm則無(wú)特異性.潘志君等用elisa檢測(cè)患者血清中抗hpigg,吸收試驗(yàn)證實(shí)與cf,q常見菌均無(wú)反應(yīng).100例檢

9、查結(jié)果顯示本法敏感性95,特異性9o,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值97,陰性頂測(cè)值81.張啟波,項(xiàng)非英等研究也得到同樣的結(jié)果.本法為多數(shù)學(xué)者所倡用,可用于胃,十二指腸疾病中感染的診斷,慢性胃病的篩選,特別適合于hp感染的流行病學(xué)調(diào)查,對(duì)評(píng)價(jià)和追蹤抗hp藥物的療效尚有待于證實(shí).最近有人用免疫印跡法檢測(cè)了200例胃疚患者,190倒獻(xiàn)血員,96例疑似肝炎患兒血清.同時(shí)對(duì)胃疾患者取粘膜組織行hp培養(yǎng)和革蘭氏染色作陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn).結(jié)果表明,hp檢查陰性者與用免疫印跡法查出的血清中igg,ga抗體有極好的相關(guān)性,而igm抗體無(wú)血清學(xué)診斷意義.作者認(rèn)為應(yīng)用此法檢查血清igg和iga抗體可以肯定感染,適用于不能作胃鏡者診斷hp感染和

10、易感人群的篩選.2.2.2n一乙酰神經(jīng)氨結(jié)合凝集素(nlbh)抗體的檢測(cè)evans等從無(wú)癥狀者身上分離的hp8826株中提純nlbh,經(jīng)證實(shí)無(wú)尿素酶活性,以此為抗原,行eusa檢測(cè)了187倒血清.結(jié)果診斷hp感染的特異性為98.3,敏感性75,消化性潰瘍者81.3可檢出nlbh抗體.作者還發(fā)現(xiàn),活動(dòng)性潰瘍患者的陽(yáng)性率明顯高于無(wú)癥狀的hp感染者,說(shuō)明nlbh抗體的檢測(cè)有可能作為潰瘍活動(dòng)性的指標(biāo).2.2.3單克隆抗體應(yīng)用最近sugiyam等獲得3株特異性高的hp單抗,其中單抗cp;特異性識(shí)別hp抗原25kd.以單抗cp純化的25kd蛋白為抗原,應(yīng)用elisa檢測(cè)hp感染的病人血清,結(jié)果特異性l.0

11、.敏感性96.b%,陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值分別為100和94.且發(fā)現(xiàn)慢性胃炎,胃潰瘍和十二指腸潰瘍t實(shí)用醫(yī)學(xué)進(jìn)修雜志1994年第22卷第1期患者cp抗體滴度明顯增高,cp滴度與胃炎組織學(xué)分級(jí)顯著相關(guān).2.2.4尿素酶抗體的檢測(cè)dent等利用hp富含尿素酶的特性,以尿素酶為抗原采用elisa檢測(cè)病人血清中特異性尿素酶抗體.敏感性達(dá)100.karnes發(fā)現(xiàn)尿素酶抗體檢測(cè)的特異性100,敏感性93,淺表性和萎縮性胃炎患者尿素酶抗體陽(yáng)性百分率分別為9o與8o.丁松澤等研究也得類似結(jié)果.尿素酶抗體檢測(cè)對(duì)慢性胃炎的診斷有一定的價(jià)值.2.3免疫學(xué)診斷的臨床價(jià)值2.3,1胃和十二指腸疾病申hp感染的診斷jones等

12、發(fā)現(xiàn)慢性胃炎,胃潰瘍,十二指腸潰瘍病人血清中抗hpigg的陽(yáng)性檢出率分別為8o,86和59,而igm則無(wú)特異性.國(guó)內(nèi)胃炎,胃潰瘍,十二指腸潰瘍病人hp檢出率分別為84%,86和9o.但血清學(xué)檢查不能提示患者已獲感染的時(shí)限.也無(wú)法證實(shí)檢查當(dāng)時(shí)hp感染是否尚具有活動(dòng)性.2.3.2慢性胃病的診斷和篩選loffeld等采用elisa對(duì)7o例非潰瘍性消化不良患者進(jìn)行檢查,發(fā)現(xiàn)48例抗hpigg陽(yáng)性者中,組織學(xué)檢查均有胃竇區(qū)慢性胃炎,22例活檢正常者,未檢出hp抗體.elisa法診斷相關(guān)性胃炎的陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值均達(dá)9o以上.該作者認(rèn)為血清學(xué)可取代內(nèi)窺鏡檢查來(lái)診斷相關(guān)性胃炎,并可在消化不良患者中行elisa

13、作為診斷篩選一3程序方案,即對(duì)消化不良者首先行eusa檢查,如試驗(yàn)陰性,再行內(nèi)鏡檢查;如陽(yáng)性者,就可用鉍劑治療.如治療后消化不良癥狀仍存在,就應(yīng)行內(nèi)鏡檢查.按上方案,至少28%的消化不良患者可避免作內(nèi)鏡檢查,這樣既可以減輕病人的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),又可提高內(nèi)鏡檢查的效益.2.3.3評(píng)價(jià)和追蹤hp抗藥物的療效goert等對(duì)內(nèi)鏡證實(shí)的16例相關(guān)性胃炎進(jìn)行隨訪,發(fā)現(xiàn)12例經(jīng)治療后病人癥狀緩解,抗hpigg,iga和igm抗體全部下降,且igm,iga滴度恢復(fù)到正常水平.igg仍維持到一定水平,持續(xù)3月之久.未治療的4例抗體全部維持高滴度該作者認(rèn)為hpigm,iga抗體可作為療效陋訪的指標(biāo)hp感染后臨床治

14、療一般轉(zhuǎn)陰率較高,平均在5080%,但極易于停藥后復(fù)發(fā).2.3.4hp感染的流行病學(xué)調(diào)查免疫學(xué)診斷方法快速靈敏,非刨傷性,又可同時(shí)處理大量標(biāo)本,特別適合于大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查.morris等發(fā)現(xiàn)隨機(jī)獻(xiàn)血員抗體滴度低,從事內(nèi)鏡工作的臨床醫(yī)生感染率與其它人群相比無(wú)明顯差別,但有些職業(yè)人群如屠宰工人,冷凍工人和蟲害控制人員的血清陽(yáng)性率很高.rathbon等調(diào)查hp感染與年齡的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)小于2o歲年齡組抗體陽(yáng)性率很低,隨年齡增加檢出率有逐漸升高的趨勢(shì).(1994-02-26收稿)病人反復(fù)燒心,反酸請(qǐng)注意胃食管反流病胃食管反流病(gerd)是一種上胃腸遭動(dòng)力性疾病,日常生活中多數(shù)人存在胃食管反流而沒有癥狀.若病人反復(fù)的燒心,反酸,胸痛和固胃內(nèi)容物反流弓【起的其它癥狀時(shí),可以試用抗酸劑作為診斷性治療.然后進(jìn)一步作鋇餐,