流式細胞術(shù)樣本制備分析解析

1、流式細胞術(shù)樣本制備 流式細胞術(shù)樣本制備 BD質(zhì)控品 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 流式細胞術(shù)樣本來源 ?含有生物學(xué)顆粒的懸液：單細胞懸液、微 生物顆粒懸液、人工微球懸液 ?標本類型： ?細胞懸液： ?外周血（溶血）、PBMC、骨髓 ?灌洗液、體腔積液 ?培養(yǎng)細胞、細胞系 ?實體組織： ?病理組織：新鮮樣本/石蠟包埋樣本 ?針吸組織：新鮮樣本 ?鞘液、洗液、PMA等：潔凈，無顆粒雜質(zhì) 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式

2、 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 流式細胞術(shù)樣本來源 ?血液成分的分析：如白細胞、紅細 胞、血小板等 ?分離血液中特定細胞成分，進行分析： 操作復(fù)雜，分離、離心步驟導(dǎo)致細胞特 定群體丟失，并可能引入某些誤差 ?直接使用全血：最接近生理狀況，操 作簡便，樣本用血量小 ?實體組織：MediMachine 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 單細胞懸液的處理 ?熒光標記抗體的染色：使用特異的單克隆 抗體 ?單色分析：直

3、接標記、間接標記 ?雙色分析：SimulSET IMK、HLA-B27 ?多色分析：TriTEST、MultiTEST、ProCOUNT ?溶血：FACS Lysing Solution ?細胞打孔：FACS Perm2 ?固定：1%多聚甲醛 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 細胞染色 ?染色要求： ?特異識別某一群細胞，有效區(qū)分不同細胞亞 群 ?非特異反應(yīng)水平低 ?抗體校價高，用量適用于常規(guī)標本 ?使用特異的單克隆抗體 ?最好使用熒光直接標記的抗體 ?采用適當?shù)?/p>

4、陰性對照物 ?抗體最適滴度 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 淋巴細胞表面抗原分析 ?樣本來源 ?新鮮抗凝全血 ?PBMC ?單克隆熒光抗體染色 ?溶血 ?洗細胞 ?固定 ?上機檢測 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 淋巴細胞細胞內(nèi)抗原分析 ?樣本來源 ?新鮮抗凝全血 ?PBMC ?細胞表面抗體染 色 ?溶血、固定 ?細胞打孔 ?細胞

5、內(nèi)抗體染色 ?上機檢測 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 紅細胞、血小板表面抗原分析 ?樣本來源 ?新鮮抗凝全血 ?PRP ?單克隆熒光抗體 染色 ?固定 ?上機檢測 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 細胞周期分析 ?準確分析細胞核中DNA含量 ?單細胞懸液： ?細胞數(shù)0.5-1?106 ?碎片和粘連細胞少 ?DNA染色的線性度：CE

6、N ?單細胞分析：CTN進行DDM 檢查 ?CV：2?m微球 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 細胞周期分析 ?DNA Cycle Plus ?Buffer Solution：細胞保存液 ?Solution A：破膜劑 ?Solution B：RNase ?Solution C：PI ?單細胞懸液1?106cells/ml，固定 ?消化RNA ?DNA染色 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：

7、孫萬邦 聯(lián)系：8562206 對照樣本 ?對照樣本應(yīng)與實驗樣本平行操作 ?陰性對照：評估非特異反應(yīng)水平， 界定陰性范圍 ?陽性對照：在診斷抗原表達確失性 疾病時，需確定抗原表達正常時的 抗原表達強度和百分含量 ?補償調(diào)整管 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 質(zhì)控品 ?體外診斷試驗的必要保證 ?穩(wěn)定樣品，提供靶值和質(zhì)控范圍， 供實驗室監(jiān)測流式細胞儀分析實驗 全過程，確保結(jié)果可靠 ?質(zhì)控品應(yīng)與實驗樣本同時處理，采 用相同步驟，相同試劑，相同

8、的畫 門分析方法 ?雙水平控制：Low/High 三水平控制：Low/Median/High 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 BD Stem Cell Control ?流式細胞術(shù)造血干細胞免疫表型分 析與計數(shù)的全血質(zhì)控物 ?抗體染色 ?溶血 ?流式細胞儀設(shè)置及運行狀況 ?分析數(shù)據(jù)，計數(shù)干細胞 ?Cat. No 340991 ?1?2.0ml，CD34Low ?1?2.0ml，CD34High 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講

9、稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 BD Multi-Check Control ?流式細胞術(shù)淋巴細胞免疫表型分 析與計數(shù)的全血質(zhì)控物 ?抗體染色 ?溶血 ?固定 ?流式細胞儀設(shè)置及運行狀況 ?分析數(shù)據(jù)，計算淋巴細胞各亞群含 量 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 BD Multi-Check Control ?淋巴細胞免疫表型： ?CD3+ ?CD3+CD4+ ?CD3+CD8+ ?CD19+ ?CD3

10、-CD16+56 + ?CD3+HLA-DR + ?靶值及質(zhì)控范圍： ?% Total Lymph ?Absolute Number/?L 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 BD Multi-Check Control BD Multi-Check Control Cat. No 340911 1?2.5ml Cat. No 340912 2?2.5ml Cat. No 340913 5?2.5ml BD Multi-Check CD4 Low Control C

11、at. No 340914 1?2.5ml Cat. No 340915 2?2.5ml Cat. No 340916 5?2.5ml 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 BD Retic-COUNT Control ?Cat. No 340999 ?1?1.5ml，Low ?1?1.5ml，Med ?1?1.5ml，High ?Cat. No 341000 ?1?1.5ml，Low ?1?1.5ml，Med ?1?1.5ml，High ?流式細胞術(shù)網(wǎng)織紅細胞分析與計數(shù)的全血質(zhì)控物 ?熒光染色 ?流式細胞儀設(shè)置及運行狀況 ?分析數(shù)據(jù)，計數(shù)網(wǎng)織紅細胞 上一頁 下一頁 返回 樣本制備 研究 生免疫學(xué)POWERPOINT講稿 流 式 專 題 制作：姚新生 審校：孫萬邦 聯(lián)系：8562206 BD LeucoCO