還原糖的測定方法國標

1、還原糖的測定方法（1） 食物中還原糖的測定方法：高錳酸鉀滴定法和直接滴定法。 一、高錳酸鉀滴定法 1. 原理 樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，其中還原糖在堿性環(huán)境下將銅鹽還原為氧化亞銅，加硫酸鐵后，氧化亞銅被氧化為銅鹽，以高錳酸 鉀溶液滴定氧化作用后生成的亞鐵鹽，根據(jù)高錳酸鉀消耗量計算氧化亞同含量，再查表得還原糖量。 2. 適用范圍 GB5009.7-85，本法適用于所有食品中還原糖的測定以及通過酸水解或酶水解轉(zhuǎn)化成還原糖的非還原性糖類物質(zhì)的測定。 3.儀器 (1) 滴定管 (2) 25ml古氏坩堝或G4垂融坩堝 (3) 真空泵 (4) 水浴鍋 4.試劑 除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。 4

2、.1 6 mol/L鹽酸：量取 50ml鹽酸加水稀釋至 100 ml。 4.2甲基紅指示劑：稱取 10mg甲基紅，用100ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氫氧化鈉溶液：稱取 20g氫氧化鈉加水溶解并稀釋至100ml。 4.4堿性酒石酸銅甲液：稱取 34.639g硫酸銅（CuS04 5H2O），加適量水溶解，加 0.5ml硫酸，再加水稀釋至 500ml，用精 制石棉過濾。 4.5堿性酒石酸銅乙液：稱取 173g酒石酸鉀鈉與50g氫氧化鈉，加適量水溶解，并稀釋至500ml，用精制石棉過濾，貯存于橡 膠塞玻璃瓶中。 4.6精制石棉：取石棉先用 3mol/L鹽酸浸泡23天，用水洗凈，再加 2.5

3、mol/L氫氧化鈉溶液浸泡 23天，傾去溶液，再用 熱堿性酒石酸銅已液浸泡數(shù)小時，用水洗凈。再以3 mol/L鹽酸浸泡數(shù)小時，以水洗至不呈酸性。然后加水振搖，使成微細的漿狀 軟縣委，用水浸泡并貯存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩堝用。 4.7 0.1000mol/L高錳酸鉀標準溶液。 4.8 1mol/L氫氧化鈉溶液：稱取 4g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至100ml。 4.9硫酸鐵溶液：稱取50g硫酸鐵，加入200ml水溶解后，慢慢加入 100ml硫酸，冷卻后加水稀釋至 1L。 4.10 3mol/L鹽酸：量取 30ml鹽酸，加水稀釋至 120ml。 5. 操作方法 5.1樣品處理： 5.1.1乳

4、類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約0.52 g固體樣品（吸取210 ml液體樣品），置于250 ml容量瓶中，加5 0 ml水，搖勻。加入10 ml堿性酒石酸銅甲液及 4 ml1mol/L氫氧化鈉溶液，加水至刻度，混勻。靜置30min，用干燥濾紙過濾， 棄去初濾液，濾液備用。（注：此步驟目的是沉淀蛋白） 5.1.2酒精性飲料：吸取100 ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性， 在水浴上蒸發(fā)至原體積 1/4后（注： 如果蒸發(fā)時間過長，應注意保持溶液 pH為中性），移入250 ml容量瓶中。加50 ml水，混勻。以下按5.1.1自加10ml堿性酒石 酸銅甲液起依法操作。

5、5.1.3含多量淀粉的食品：稱取 210 g樣品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45 C水浴中加熱1 h，并時時振搖。 （注意：此步驟是使還原糖溶于水中，切忌溫度過高，因為淀粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結(jié)果。）冷卻后加水至刻度， 混勻，靜置。吸取 200 ml上清液于另一 250 ml容量瓶中，以下按 5.1.1自加10ml堿性酒石酸銅甲液起依法操作。 5.1.4含有脂肪的食品：稱取 210 g樣品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚層。加入 50ml水混勻，以下按5.1.1自加1 0ml堿性酒石酸銅甲液起依法操作。 5.1.5汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100 ml樣

6、品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用 水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。 5.2樣品測定： 吸取50ml處理后的樣品溶液，于 400ml燒杯中，加入25ml堿性酒石酸銅甲液及 25ml乙液，于燒杯上蓋一表面皿，加熱，控 制在4min內(nèi)沸騰，再準確煮沸2min，乘熱用鋪好石棉的古氏坩堝或G4垂融坩堝抽濾，并用60 C熱水洗滌燒杯及沉淀，至洗液不 成堿性為止。（注：還原糖與堿性酒石酸銅試劑的反應一定要在沸騰狀態(tài)下進行，沸騰時間需嚴格控制。煮沸的溶液應保持藍色， 如果藍色消失，說明還原糖含量過高，應將樣品溶液稀釋后重做。）將古氏坩堝或垂融坩

7、堝放回原400ml燒杯中，加25 ml硫酸鐵 溶液及25ml水，用玻棒攪拌使氧化亞銅完全溶解，以0.1mol/L高錳酸鉀標準液滴定至微紅色為終點。 同時吸取50ml水，加與測樣品時相同量的堿性酒石酸銅甲、乙液，硫酸鐵溶液及水，按同一方法做試劑空白實驗。 6. 計算： X仁（V-V0 ）X N X 71.54（1） 式中：X1-樣品中還原糖質(zhì)量相當于氧化亞銅的質(zhì)量，mg； V-測定用樣品液消耗高錳酸鉀標準液的體積，ml; V0-試劑空白消耗高錳酸鉀標準液的體積，ml; N-高錳酸鉀標準溶液的濃度； 71.54-1ml 1mol/L高錳酸鉀溶液相當于氧化亞銅的質(zhì)量，mg。 根據(jù)（1）式中計算所得氧

8、化亞銅質(zhì)量，查附表”氧化亞銅質(zhì)量相當于葡萄糖、果糖、乳糖、轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量表”，再計算樣品中 還原糖含量。 X2= (mix V2)/( m2X V1 )x( 100/ 1000)(2) 式中：X2-樣品中還原糖的含量，g/100g (g/100ml)； mi-查表得還原糖質(zhì)量，mg； m2-樣品質(zhì)量(或體積)，g( ml)； V1-測定用樣品處理液的體積，ml ； V2-樣品處理后的總體積，ml。 7. 舉例： 稱取某食物樣品3.00g，經(jīng)過處理后用水定容至 250ml。取50ml進行測定，消耗0.1003 mol/L高錳酸鉀標準液5.20ml，同時測 試劑空白為0.36ml，則樣品中還原糖質(zhì)量

9、相當于氧化亞銅的質(zhì)量為： X1 (mg)= ( 5.20-0.36)x 0.1003 x 71.54 = 34.73 查表得還原糖質(zhì)量為相當于葡萄糖16.22 mg， 樣品中還原糖含量(以葡萄糖計)為： X2 (g/100g) = (16.22 x 250)/( 3.00 x 50)x( 100 / 1000) = 2.70 8. 注釋： 本法用堿性酒石酸銅溶液作為氧化劑。由于硫酸銅與氫氧化鈉反應可生成氫氧化銅沉淀，氫氧化銅沉淀可被酒石酸鉀鈉緩慢還 原，析岀少量氧化亞銅沉淀，使氧化亞銅計量發(fā)生誤差，所以甲、乙試劑要分別配制及貯藏，用時等量混合。 還原糖的測定方法(2) 、直接滴定法 1. 原理

10、 樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，在加熱條件下，直接滴定已標定過的費林氏液，費林氏液被還原析岀氧化亞銅后，過量的還原糖立即將次甲 基藍還原，使藍色褪色。根據(jù)樣品消耗體積，計算還原糖量。 2. 適用范圍 GB5009.7-85，本方法適用于所有食品中還原糖的檢測。檢出限0.1mg。 3. 主要儀器 滴定管 4. 試劑 除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。 (1) 費林甲液：稱取15 g硫酸銅(CuS04 5H2O )，及0.05 g次甲基藍，溶于水中并稀釋至1 L （2）費林乙液：稱取50 g酒石酸鉀鈉與75 g氫氧化鈉，溶于水中，再加入 4 g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至500 ml, 貯

11、存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。 （3） 乙酸鋅溶液：稱取 21.9 g乙酸鋅，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀釋至100 ml。 （4） 亞鐵氰化鉀溶液。稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解并稀釋至100ml。 （5）鹽酸。 （6） 葡萄糖標準溶液：精密稱取 1.000 g經(jīng)過80 C干燥至恒量的葡萄糖（純度在99%以上），加水溶解后加入 5 ml鹽酸，并以 水稀釋至1 L。此溶液相當于1 mg/ml葡萄糖。（注：加鹽酸的目的是防腐，標準溶液也可用飽和苯甲酸溶液配制） 5操作方法 5.1樣品處理： 5.1.1乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約0.52 g固體樣品（吸取210 ml液體樣品），置于100 m

12、l容量瓶中，加50 ml 水，搖勻。邊搖邊慢慢加入 5 ml乙酸鋅溶液及5 ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用干燥濾紙過濾，棄去 初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過濾除去。如果鈣離子過多時，易與葡萄 糖、果糖生成絡合物，使滴定速度緩慢；從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過濾。） 5.1.2酒精性飲料：吸取50 ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，用 1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4后，移入1 00 ml容量瓶中。加25 ml水，混勻。以下按 4.1.1自咖5 ml乙酸鋅溶液起依法操作

13、。 5.1.3含多量淀粉的食品：稱取 25 g樣品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45C水浴中加熱1 h,并時時振搖（注意： 此步驟是使還原糖溶于水中，切忌溫度過高，因為淀粉在高溫條件下可糊化、水解，影響檢測結(jié)果。）。冷后加水至刻度，混勻， 靜置。吸取50 ml上清液于另一 100 ml容量瓶中，以下按 4.1.1自5 ml乙酸鋅溶液起依法操作。 5.1.4汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取50 ml樣品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100 ml容量瓶中，并用水洗滌 蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。 （注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應接近于葡萄糖標

14、準液的濃度。） 5. 2標定費林氏液溶液： 吸取5.0 ml費林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉 淀，應將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約 9 ml葡萄糖標準溶 液，控制在2 min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒 1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液蘭色剛好褪去并岀現(xiàn)淡黃色為終點, 記錄消耗的葡萄糖標準溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計算每10 ml （甲、乙液各5 ml）堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄 糖的質(zhì)量（mg）。（注意：還原的次甲基藍易被空氣中的氧氧化，恢復成原來的藍

15、色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)， 并且避免滴定時間過長。） 5.3樣品溶液預測：吸取 5.0 ml費林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min 內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時，以每秒1滴的速度滴 定，直至溶液蘭色褪去，岀現(xiàn)亮黃色為終點。如果樣品液顏色較深，滴定終點則為蘭色褪去岀現(xiàn)明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣 液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺后復又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 5.4樣品溶液測定：吸取 5.0 ml堿性酒石酸銅甲液及 5.0 ml乙

16、液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 mi n內(nèi)加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預測體積少1 ml的樣品溶液，然后趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定直至終點。記錄消耗 樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得岀平均消耗體積。 6. 計算 X3 = （ C X v1 X V）/（ mx v2 X 1000）x 100 式中：X-樣品中還原糖的含量（以葡萄糖計），%; C-葡萄糖標準溶液的濃度，mg/ml; v1-滴定10 ml費林氏溶液（甲、乙液各 5 ml）消耗葡萄糖標準溶液的體積，ml; v2-測定時平均消耗樣品溶液的體積，ml; V-樣品定容體積，ml; m-樣品質(zhì)量，g; 7. 注意事項 （1） 本方法測定的是一類具有還原性質(zhì)的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示， 所以不能誤解為還原糖=葡萄糖