醫(yī)院微生物標準化操作規(guī)程人民醫(yī)院檢驗科 細菌SOP人民醫(yī)院檢驗科管理文件人民醫(yī)院質(zhì)量管理體系文件

1、臨床微生物標本采集程序1.目的：規(guī)范規(guī)范臨床標本的采集，減少實驗室前的差錯影響因素，避免醫(yī)療缺陷發(fā)生。2.范圍：為協(xié)助臨床診斷和治療而進行的臨床微生物標本的采集。包括血液，骨髓，下呼吸道標本，尿，糞便，化膿和創(chuàng)傷標本，穿刺液，生殖道標本，燒傷標本，。3.職責：指導(dǎo)臨床科室正確采集標本，提高實驗室的準確性。4.采集程序4.1 血 骨髓4.1.1 送檢指征4.1.1.1 癥狀指征：發(fā)熱、皮疹、肝脾腫大、關(guān)節(jié)疼痛、神志昏迷或休克。4.1.1.2 疾病指征：化膿性病灶或損害、黏膜損傷性疾病、肝臟疾病、糖尿病、血液疾病及惡性腫瘤、愛滋病、呼吸道感染或呼吸衰竭、長期輸液或?qū)Ч芙槿爰膊?、血液透析患者?.1

2、.2 標本采集時間： 一般情況下應(yīng)在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集。原則上應(yīng)選擇在抗菌藥物應(yīng)用之前，對已用藥而因病情不允許停藥的患者，也應(yīng)在下次用藥前采集。4.1.3 采集部位何采集的頻率4.1.3.1 急性敗血癥 在24小時內(nèi)抽血3次或更多次，并可在不同部位，如左、右手臂或頸部。4.1.3.2 急性心內(nèi)膜炎、治療前1-2小時內(nèi)，在三個不同部位采集血樣本。4.1.3.3 亞急性心內(nèi)膜炎 第一天在身體不同部位取三次標本。如果24小時血培養(yǎng)結(jié)果陰性，應(yīng)繼續(xù)加抽3份血樣或更多次，多部位采樣送檢。4.1.3.4 無名熱 應(yīng)不定期多次、多部位采樣送檢。24小時內(nèi)不超過3次，如培養(yǎng)陰性應(yīng)繼續(xù)采樣送檢。4.1

3、.4 標本采集的量 成人采血量8-10ml嬰幼兒采血量2-5ml骨髓采集量1-2ml4.1.5 送檢采血后立即送檢，切勿放冰箱存放4.1.6 結(jié)果報告 有跡象細菌生長者，立即圖片，染色鏡檢，結(jié)果用電話報告臨床。將可疑生長的培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)種于血平板及巧克力平版生長后鑒定報告。若7天仍無細菌生長，報告無菌生長。臨床診斷為亞急性心內(nèi)膜炎者可繼續(xù)培養(yǎng)2周再出陰性報告。4.1.7 臨床意義 正常人血液及骨髓內(nèi)是無菌的?，F(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，廣譜、超廣譜抗生素的廣泛使用，使耐藥株增加，院內(nèi)感染率上升，血液培養(yǎng)中分離出各種微生物種類顯著增多，以前認為致病、條件致病或非致病菌的界限現(xiàn)在已不再如此絕對區(qū)分。因為任何一種

4、機會致病菌均可能成為敗血癥的病原菌。其鑒別可依據(jù)：1，培養(yǎng)結(jié)果2次以上為同一細菌者；2，患者于檢出細菌23周后，血液中相應(yīng)抗體滴度上升，均可視為敗血癥的病原菌。4.2 下呼吸道標本 送檢指征4.2.1 癥狀指征：咳嗽、咯血、呼吸困難、發(fā)熱。4.2.2 疾病指征：白喉、百日咳、猩紅熱、肺炎、肺結(jié)核、肺膿腫。4.2.3 標本采集時間：以清晨留取標本為好。留取前最好用清水漱口三次.痰由患者用力咳出.纖維支氣管鏡檢查者可同時抽取分泌物.昏迷患者可作氣管穿刺吸取.所有標本最好在應(yīng)用抗菌藥物之前采集標本。4.2.4 采集方法自然咳痰法、支氣管鏡采集法、胃內(nèi)采痰法、氣管穿刺法、小兒取痰法4.2.5 上呼吸道

5、標本 采集上呼吸道標本通常采用無菌棉拭子。采集前患者應(yīng)用清水反復(fù)漱口，由檢查者將舌頭向外拉，使腭垂盡可能向外牽引，將棉拭子通過舌根到咽后壁或腭垂的后側(cè)，涂抹數(shù)次，但拭子藥避免接觸口腔和舌粘膜。4.2.6 檢驗方法 直接涂片法4.2.6.1 痰標本挑取陽性（膿性或血）部分制備2張涂片，一張做革蘭染色，另一張根據(jù)需要做其他染色。革蘭染色后用低倍鏡觀察白細胞和上皮細胞數(shù)量的多少來初步判定。如白細胞10，上皮細胞10，上皮細胞10cfu/ml4.4 糞便 送檢指征4.4.1 癥狀指征：腹瀉、高熱驚厥。4.4.2 疾病指征：侵襲性病原引起的腹瀉 1）細菌性痢疾 2）腸炎 3）腸結(jié)核。腸毒素性病原引起的腹

6、瀉、抗菌藥物相關(guān)性腹瀉。4.4.3 標本采集：腹瀉病人應(yīng)在急性期采集，以提高檢出率，亦最好在用藥之前。沙門氏菌感染腸熱癥在2周以后，胃腸炎病人在急性期，早期采集新鮮糞便,應(yīng)采集糞便異常部分。最好在抗菌藥物應(yīng)用以前留取。4.4.4 采集方法 自然排便采集法 、直腸拭子方法4.4.5 檢驗方法4.4.5.1 直接涂片檢查 霍亂弧菌涂片檢查染色法，涂片用甲醇或乙醇固定革蘭氏染色鏡檢觀察革蘭氏陰性，呈魚群樣排列桿狀或弧形菌。懸滴（壓滴）檢查，檢查細菌動力，霍亂弧菌古典生物型和生物型均呈川梭狀運動在懸滴涂片中加入群霍亂弧菌診斷血清后，在顯微鏡下觀察。若原運動活潑的現(xiàn)象停止，為制動試驗陽性。可初步報告為疑

7、似群霍亂弧菌。并申報上級衛(wèi)生機構(gòu)做出處理。4.4.5.2 培養(yǎng)檢查將大便接種于中國蘭或麥康凱及ss培養(yǎng)基經(jīng)35co，18-24小時，挑取可疑不發(fā)酵乳糖菌落接種三糖鐵和尿素動力定基質(zhì)根據(jù)其生化反應(yīng)結(jié)果選擇適宜的血清學(xué)分型霍亂弧菌。1克大便直接接種于鹼性蛋白胨水中于35co 6-8小時轉(zhuǎn)種4號瓊脂平板挑取生長菌落進行進一步監(jiān)定。4.4.6 臨床意義 腸道病原菌能引起人類感染性腹瀉，亦能由細菌的代謝產(chǎn)物而造成食物中毒，亦能由于長期應(yīng)用抗菌藥物而導(dǎo)致菌群紊亂所致嚴重腹瀉，因此，應(yīng)及早做出診斷以免延誤治療。 4.5 化膿和創(chuàng)傷標本 送檢指征4.5.1 癥狀指征：局部癥狀 如紅、腫、熱、痛和功能障礙時化膿

8、性感染的五個典型癥狀。全身癥狀 輕重不一，感染輕微的可無全身癥狀，感染重的常有發(fā)熱、頭痛、全身不適、乏力、食欲減退等。4.5.2 疾病指征：軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫、創(chuàng)傷感染。4.5.3 標本采集：開放性感染和已潰破的化膿灶：標本采集前先用滅菌生理鹽水沖洗表面 污染，用滅菌拭子采取膿液及病灶深部的分泌物。封閉性膿腫 通常采用引流術(shù)采集。如為慢性感染可抽取感染壞死組織于健康組織之間的少許組織作為培養(yǎng)標本.4.5.4 檢驗方法：4.5.4.1 直接涂片檢查：取潔凈玻片將標本均勻涂成薄膜，自然干燥，經(jīng)火焰固定革蘭染色鏡檢，根據(jù)細菌的染色特點、形態(tài)、排列作出初步報告“找到革蘭陰性或陽性

9、球或桿菌呈*排列”。如發(fā)現(xiàn)具有芽孢或莢膜的細菌，報告時應(yīng)注明芽孢的大小位置：如鏡檢發(fā)現(xiàn)細菌可初步報告“未找到細菌”；對疑有分枝桿菌感染時，標本應(yīng)作抗酸染色；疑是白喉感染時，標本除作革蘭染色，還應(yīng)作異染顆粒染色。4.5.4.2 細菌培養(yǎng)：取膿汁棉拭子或膿汁接種于血平板上劃線分離，置370c培養(yǎng)18-24小時，觀察結(jié)果，如有菌落生長，根據(jù)涂片染色特點和菌落特征初步判斷細菌的類屬，然后再按其生物學(xué)特性進行鑒定。4.5.5 臨床意義： 所有創(chuàng)傷均可有細菌污染，但不一定發(fā)生感染，細菌學(xué)檢查對局部細菌的控制是有價值的。同時對導(dǎo)致傷口感染、膿腫形成的病原學(xué)診斷有重要意義。確定常居菌是否為創(chuàng)傷感染的病原菌時，

10、要注意該菌是否在數(shù)量上占優(yōu)勢。目前看細菌向活組織深部侵入程度及細菌每克組織含細菌量是否達到一定閾值。一般認為每克組織內(nèi)細菌數(shù)量在105-106 個以上時，即可造成傷口感染。4.6 穿刺液 送檢指征4.6.1 腦脊液4.6.1.1 癥狀指征：在成人一般表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、惡心、嘔吐、頸強直和反射增強，嬰兒和新生兒臨床表現(xiàn)經(jīng)常不明確和無特異性，對嬰兒不明原因的發(fā)熱，應(yīng)懷疑為腦膜炎，應(yīng)采集腦脊液即使送檢。4.6.1.2 疾病指征：細菌性腦膜炎拭一組病情較嚴重的急性感染性疾病。本病可由多種致病菌引起。4.6.2 胸腹水 送檢指征4.6 .2.1 癥狀指征：臨床癥狀多伴由胸痛和發(fā)熱，腹部出現(xiàn)局限性腹脹及揉

11、面感，胸腔積液有混濁、乳糜性、血性或膿性，腹水成人多于肝硬化腹水者。4.6.2.2 疾病指征：結(jié)核性胸膜炎、細菌性肺炎引起的胸膜炎、真菌、原發(fā)性腹膜炎、續(xù)發(fā)性急性腹膜炎。4.6.2.3 采集：懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用藥物之前采集標本。胸腹水 懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停用后1-2天采集。4.7 生殖道標本 送檢指征4.7.1 癥狀指征：全身癥狀：發(fā)熱、乏力、食欲不振。皮膚黏膜損害。男性泌尿生殖道系統(tǒng)表現(xiàn)：尿痛、尿頻、尿急、尿道分泌物增多、性功能障礙等。 性生殖系統(tǒng)表現(xiàn)：陰道分泌物增多及性狀異常、月經(jīng)失調(diào)、陰道出血等。4.7.2 疾病指征：

12、前庭大腺膿腫、外陰陰道念珠菌病、細菌性陰道病、急性子宮頸炎、急性盆腔炎、急性尿道炎、急性膀胱炎、羊膜腔感染、產(chǎn)褥氣感染。4.7.3 標本采集：清洗尿道口，用滅菌紗布或棉球擦拭，采取膿形分泌物。4.8 燒傷標本 送檢指征4.8.1 癥狀指征：燒傷伴有細菌感染或出現(xiàn)敗血癥等。4.8.2 疾病指征：燒傷創(chuàng)面膿毒癥。燒傷病發(fā)癥：如肺部感染、靜脈炎、燒傷敗血癥、腸原性感染等。4.8.3 采集：燒傷面愈合前，都可能發(fā)生侵襲性感染，通常在早期、深度燒傷溶痂和3度焦痂分離期、后期采集標本。用無菌棉拭子，直接從燒傷創(chuàng)面的膿汁多部位采集，發(fā)生敗血癥應(yīng)同時做血培養(yǎng)。5. 注意事項 當某些標本的留取出現(xiàn)困難和問題時,

13、請臨床科室和實驗室密切配合,及時處理。為確保病原微生物的檢出率,應(yīng)盡量減少中間環(huán)節(jié).采集好的標本應(yīng)立即送檢,爭取在10-20分鐘內(nèi)送到實驗室,否則有些微生物會死亡而影響檢出。6.參考文獻 張秀珍主編當代細菌檢驗與臨床人民衛(wèi)生出版社微生物標本接收處理接種前標本接收處理：1: 核對 接到標本后,檢查化驗單填寫和標本是否一致,和標本是否合格.若標本不合格,退回臨床并及時通知臨床,然后記錄退回標本的病人姓名,科室以及原因.(具體見2)2：標本拒收 出現(xiàn)以下情況，工作人員可根據(jù)具體判斷拒收標本。2.1 申請單無檢查項目或檢查項目不清楚的標本，非本實驗室檢測項目的標本。2.2 姓名明顯變更，或出現(xiàn)多個姓名

14、，無法確認標本正確歸屬的。2.3 申請單和標本分離，標本容器上又無明確患者信息標識的。2.4 空管、標本量過少（標本量見臨床微生物標本采集程序）的標本。2.5收集容器不正確；使用非無菌管留取培養(yǎng)標本，用普通大便盒留取培養(yǎng)標本等。正確收集容器見臨床微生物標本采集程序。2.6 檢標本類別不符，如申請單注明血，但送檢標本為胸水。2.7 標本外部有嚴重的遺灑、滲漏，懷疑標本可能交叉污染的，化驗單嚴重污染，無法填寫報告的。2.8 經(jīng)詢問確認標本保存、運輸方式不正確的，具體保存方式見臨床微生物標本采集程序。2.9審核報告時發(fā)現(xiàn)標本超過有效檢測時間或污染的，也應(yīng)視為不合格標本，按拒收標本處理，不能發(fā)出報告。

15、3: 拒收處理 3.1對不合格標本應(yīng)在化驗單上注明拒收原因及處理建議,及時發(fā)回。3.2如為門診或急診患者標本，應(yīng)由服務(wù)臺人員或值班人員盡快告知送標本者。3.3如為病房急診或常規(guī)標本，當時發(fā)現(xiàn)的應(yīng)及時退給護理員；經(jīng)核查后發(fā)現(xiàn)的應(yīng)在2h內(nèi)給病房打電話，并填寫不合格標本電話通知記錄表，且于當日將標注清楚的化驗單發(fā)回病房；對于無法及時報告的不合格門診標本，應(yīng)當天將標注清楚的化驗單反給病案室或化驗單查詢處。3.4 將不合格化驗單中患者信息和拒收原因填寫不合格標本電話通知記錄表，以備查詢。3.5 對于審核報告時發(fā)現(xiàn)與臨床嚴重不符或臨床根本不可能出現(xiàn)的結(jié)果，而懷疑標本超過有效檢測時間或污染的情況，應(yīng)及時與臨

16、床電話聯(lián)系，并填寫不合格標本電話通知記錄表。3.6 對于同一病人多次因相同原因拒收標本的，應(yīng)及時與主管醫(yī)生聯(lián)系，了解原因提出建議。 4：標本接種 合格標本寫上接收日期和時間,并登記,記帳.然后接種.4.1接種的方法以及分類.點燃酒精燈,右手持接種工具,在火焰上燒灼滅菌.左手持標本管或原代培養(yǎng)物的平皿,試管等.用接種工具挑取適量標本或細菌,痰液挑取膿塊,避開口水;痢疾糞便挑取膿血部分.原代培養(yǎng)物挑取單個菌落,液體中取菌,只需在培養(yǎng)液蘸取一滿環(huán)即可.按培養(yǎng)目的分區(qū)劃線或區(qū)域涂布的方法接種.接種到液體中時,將挑出的菌落在試管有液體的管壁中研磨,細菌即可轉(zhuǎn)入液體中.做穿刺接種時,可垂直刺入高層瓊脂中,

17、并沿原位退出,注意不要穿刺到管底.接種后,把接種工具于火焰上燒灼后,放回原處.4.1.1 血培養(yǎng)：以無菌手法真空采血，采血量為510ml ，放35孵育5天后連續(xù)劃線盲種一次。4.1.2 腦脊液：連續(xù)劃線接種于血平板及巧克力平板放于co2 10%環(huán)境18-48小時后取出生長細菌染色。根據(jù)革蘭氏染色的形態(tài)進行細菌鑒定。4.1.3痰及上呼吸道標本的檢測：接種于巧克力平板、血平板、麥康凱培養(yǎng)基,并四區(qū)畫線分別放入35孵箱18-24小時后觀察菌落特征。4.1.4尿標本的檢測：連續(xù)劃線接種于血平板及麥康凱培養(yǎng)基，放孵育小時。4.1.5分泌物、化膿性感染標本 分區(qū)劃線接種于血平板及麥康凱培養(yǎng)基，放 孵箱小時

18、。4.1.6胸腹水、穿刺液 連續(xù)劃線接種于血平板及麥康凱培養(yǎng)基，放孵箱小時。4.1.7大便標本：腹瀉 、高熱標本如懷疑霍亂弧菌用堿性蛋白胨水培養(yǎng)6-8小時,連續(xù)劃線接種于4號瓊脂孵育18-24小時。常規(guī)用分區(qū)劃線接種于麥康凱培養(yǎng)基35度生長18-24小時5: 接種后標本處理 5.1 標本接種后的微生物標本放入貼有生物危險2級的污物桶內(nèi),血培養(yǎng)標本接種后放置7天轉(zhuǎn)種血平板,已轉(zhuǎn)種的培養(yǎng)瓶放入貼有生物危險2級的污物桶內(nèi). 貼有生物危險2級的污物桶用高壓滅菌.5.2 抗酸桿菌標本放入用清潔的玻璃瓶留取后放入貼有生物危險2級的鐵盒高壓滅菌后涂片鏡檢.5.3 吸取菌液的滴管用后放入裝有含氯2克/升的消毒

19、液中沖洗后高壓滅菌后使用 6：工作總結(jié)及臨床溝通：6.1定期(一般一個季度)向臨床科室報告從臨床各種標本分離的細菌種類以及對抗菌藥物的敏感性結(jié)果.供臨床醫(yī)生初步選擇抗菌藥物參考.6.2 分段報告微生物培養(yǎng)結(jié)果,以便臨床醫(yī)生及時用藥.6.2.1實驗室工作人員接到標本后,按要求進行涂片和接種。.不符合質(zhì)量要求的標本,應(yīng)及時與臨床科室聯(lián)系并重新留取標本.6.2.2 需要涂片的標本立即涂片染色，并盡快電話報告臨床科室，正式報告于第二個工作日出具。 6.2.3在三個工作日內(nèi)，對接種的標本進行鑒定并做抗菌藥物敏感性試驗,并出具書面報告。特殊疑難菌種及時向臨床電話報告，書面報告依鑒定程序順延。6.2.4 需

20、要保存的標準菌株和各種質(zhì)控細菌按培養(yǎng)要求進行培養(yǎng)或保存。6.2.5做好報告回訪工作,了解實驗室診斷結(jié)果和臨床診斷的符合情況,從而找出存在的問題,以備改進工作。7：緊急情況的處理 如遇到烈性傳染性病原菌或嚴重院內(nèi)感染和其他需要上報的菌種，需要立即與臨床聯(lián)系和上報保健科，并填寫醫(yī)院緊急情況處理登記冊?；救旧椒?.染色準備：染色的第一步是制作涂片。菌液涂片時，用接種環(huán)沾取菌液點在載玻片上，標本可直接在玻片上涂布。菌落涂片時，先取生理鹽水 1滴，置玻片上，用接種針挑取菌落，在鹽水中涂布。涂片時必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動作會改變菌細胞原有的排列形式，或造成細菌鞭毛脫落，影響結(jié)果的準確性。制備的涂片

21、應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準，否則可能使細胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進行染色。2.幾種基本染色方法2.1 革蘭染色本染色是最基本的染色法，可用于標本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細菌分為革蘭陽性(紫色)和革蘭陰性(紅色)兩類。2.1.1 結(jié)晶紫溶液 a液：結(jié)晶紫2g 95乙醇20ml b液：草酸銨 0.8g 蒸餾水 80ml 需在用前24h將a液、b液混合，過濾后裝入試劑瓶內(nèi)備用。2.1.2 碘液碘 1g碘化鉀 2g蒸餾水 300ml碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解。最后補足水量。也可用少量蒸餾水，先

22、將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。2.1.3 脫色液：95乙醇。2.1.4 復(fù)染液 a. 貯存液：沙黃2.5g 95乙醇100ml b. 應(yīng)用液：a液 10ml蒸餾水 90ml2.1.5 染色方法：a涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染30s，清水沖去染液。 b加碘液染30s，水洗。 c加脫色液，不時搖動約510s，至無紫色脫落為止，水洗。 d加復(fù)染液，染30s，水洗。 e干后鏡檢。3、抗酸染色抗酸染色直接用于痰標本時，可以適當增加標本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時，須掌握復(fù)染色時間。如果背景過深，影響鏡檢。奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養(yǎng)菌落涂片染色時，呈現(xiàn)兩種現(xiàn)

23、象，視野中有些菌細胞陽性，另外一些則陰性；有時同一個菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀察時應(yīng)予注意。抗酸染色有兩種常用方法： 堿性復(fù)紅法又稱萋納(ziehlneelsen)法(我們使用的方法)。 熒光染料金胺o法(也稱金胺o-羅丹明b法)。堿性復(fù)紅染色法3.1 試 劑3.1.1 萋納石炭酸復(fù)紅溶液 堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液10ml 5石炭酸溶液 90ml3.1.2 脫色劑 * 濃鹽酸 3ml 95乙醇97ml3.1.3 復(fù)染液(呂弗勒美藍液)美藍乙醇飽和溶液30ml10氫氧化鉀0.1ml蒸餾水 100ml3.2、染色方法3.2.1 涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復(fù)紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰。染

24、5 min(若染色奴卡菌需要加長時間)，水洗。3.2.2 加脫色劑，不時搖動玻片至無紅色脫落為止，水洗。3.2.3 加復(fù)染液，染0.5l min，水洗。3.2.4 干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍色。3.2.5 奴卡菌、放線菌標本染色時，脫色劑改用2硫酸水溶液。4、墨汁莢膜染色用于觀察菌體有無莢膜結(jié)構(gòu)，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。傳統(tǒng)的方法是用印度墨汁，但目前國內(nèi)無售。常規(guī)工作可以用墨汁或墨水代替，但應(yīng)注意顆粒不能太粗，否則影響觀察結(jié)果。有人用5黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果較好。4.1、試 劑印度墨汁或5黑色素水溶液。4.2、染色方法將標本與1滴染色液在載玻片上混合，加上蓋

25、玻片，輕輕壓一下，使標本混合液變薄。在低倍鏡下尋找有莢膜的菌細胞。找到后，轉(zhuǎn)換高倍鏡確認。hf151uv二氧化碳孵箱操作程序及維護1.目的：某些細菌（如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、牛布魯菌等）在510的co2環(huán)境中生長較好，比在一般情況下生長速度較快，為了更及時準確地檢測出致病菌，為臨床提供治療診斷的依據(jù)。2.原理：本儀器是通過人為地調(diào)節(jié)儀器內(nèi)部的co2達到一定濃度，造就一個適合上述細菌生長的厭氧環(huán)境，使細菌生長速度加快，縮短tat。3.工作條件：環(huán)境溫度：1830 相對濕度：80%周圍無強烈震動及腐蝕性氣體存；無陽光直接照射及其他冷熱源的影響。4.操作步驟：4.1 儀器出廠設(shè)置： 溫度37.0

26、， co2.04.2 打開玻璃門，向水池中注入蒸餾水（約4l），關(guān)門。4.3 將超溫控制器旋鈕調(diào)至39。4.4 將儀器的通氣接口連接于co2氣源。4.5 將儀器后壁開關(guān)調(diào)于off位置。4.6 將儀器接通電源，開機。開機后儀器將自動執(zhí)行常規(guī)檢測功能，此時co2及溫度均顯示【888】。約40秒后，常規(guī)檢測完畢，co2及溫度均顯示腔內(nèi)實際值。4.7 如果需要進行紫外清潔功能，需進行如下操作：4.7.1 在確保儀器內(nèi)無培養(yǎng)物后，打開儀器后壁紫外清潔保護開關(guān)，將co2設(shè)定為.0。4.7.2 按【】鍵不放，同時按住【】鍵或【】鍵，使“”顯示窗顯示【222】，放開【】,再連續(xù)按一下【】，【co2】窗口顯示【

27、0】，此時，便進入了特殊功能“222”（紫外燈開關(guān)），按【】【】，設(shè)定co2顯示窗為【1】，并按【】鍵確認，紫外燈開關(guān)被打開，紫外燈點亮，【co2】窗口顯示【-】，并閃爍。4.7.3 內(nèi)腔中紫外燈點亮時，注意勿直視燈管！4.7.4 約30分鐘后，清潔過程結(jié)束，內(nèi)腔紫外燈熄滅，顯示板顯示實際值。打開玻璃門，使腔內(nèi)臭氧散出，關(guān)閉儀器后壁紫外燈保護開關(guān)。（如果不需要進行清潔功能，只需按照第7步進行操作。）4.7.5 同時按下【】鍵和【】鍵約10秒鐘，直至“co2”窗口顯示【0.0】auto-start燈亮，放開兩鍵。儀器將啟動auto-start功能。4.7.6 等待約16至24小時，此時儀器溫度將

28、顯示37.00.1，co2將顯示00.1co2，一手按住【】鍵，一手使用【】鍵或【】鍵將溫度顯示窗內(nèi)值置為3，放開兩鍵，再按一下【】鍵，然后按一下【】，此時co2顯示窗內(nèi)值將顯示【.0】。4.8 將co2氣源出口壓力調(diào)至1bar（0.1mpa）。4.9 一手按住【co2】鍵，另一支手使用【】鍵或【】鍵輸入co2設(shè)置（例如7.0或5.0），儀器將自動通氣直至達到co2設(shè)定值。此時的儀器方可進行培養(yǎng)工作。4.10 器工作結(jié)束后，必須按照“步驟10”將co2設(shè)置值置為【.0】，然后再關(guān)機，打開玻璃門使腔內(nèi)氣體散去，并擦干內(nèi)膽腔體。5、儀器的維護：5.1 基本維護：5.1.1 每日維護：每天必須用清潔

29、的柔軟抹布擦拭儀器的外表面，使儀器的外表面保持清潔。5.1.2 周維護：5.1.2.1 檢查蓄水池的水位：每周必須檢查蓄水池的水位，如果蓄水池的水位太低容易引起整個培養(yǎng)器中的濕度明顯下降這樣容易導(dǎo)致細菌生長受到影響，使培養(yǎng)結(jié)果出現(xiàn)誤差。因此必須按期檢查水位。5.1.2.2 檢查氣源輸入壓力是否正確：因為一般的細菌生長多在6.0的co2濃度的情況下生長較好，否則細菌生長會受到抑制，出現(xiàn)假陰性。氣源壓力必須調(diào)節(jié)到1bar。5.1.3 每六周需要的維護：5.1.3.1 消毒并清潔內(nèi)腔：首先要關(guān)掉儀器，然后打開玻璃門，使用電動虹吸泵把水池中的水全部抽取出來，然后使用浸泡了消毒水的抹布對對內(nèi)腔進行消毒清

30、潔，最后再用消過毒的干抹布擦干水份。5.1.3.2 紫外消毒：在上述的消毒清潔內(nèi)腔后，進行紫外消毒。具體方法見操作步驟第七步。5.1.3.3 做一次auto-start，具體做法操作步驟第八九步。5.2、報警的維護：當儀器的某些參數(shù)超過了設(shè)定的參數(shù)值，那么蜂鳴器就會發(fā)出警報，提示錯誤此時你只需要按著【i】鍵，在顯示器上就會出現(xiàn)相應(yīng)的故障代碼。當故障出現(xiàn)時，故障的代碼，可能導(dǎo)致的原因及采取的措施見下表：故障代碼可能原因措施99玻璃門開著門未關(guān)關(guān)門100溫度過低（設(shè)置點）溫度極限控制器設(shè)置過低，查看指示燈檢查溫度極限控制器調(diào)節(jié)101溫度過高（設(shè)置點）環(huán)境溫度過高關(guān)閉門加熱開關(guān)，或使用緩慢加熱方式2

31、00co2過低（設(shè)置點）co2未接通co2鋼瓶用盡co2入口壓力過低接通氣源更換co2鋼瓶調(diào)節(jié)入口壓力：1bar201co2過高（設(shè)置點）co2入口壓力過高調(diào)節(jié)入口壓力：1bar故障發(fā)生時并不是所有的故障都能顯示，有些故障不能顯示，如果遇到可能的原因及處理辦法見下表：故障檢查方法儀器不加熱檢查設(shè)置值儀器不進氣察看發(fā)光二極管gas的情況檢查是否進氣被關(guān)閉檢查設(shè)置值故障產(chǎn)生時蜂鳴器未報警檢查蜂鳴器是否處于開的狀態(tài)。不能改變設(shè)置值設(shè)置點被鎖定。玻璃門上有大量的蒸餾水檢查功能5門加熱開關(guān)是否開啟。根據(jù)上述的方法不能排除故障，請與工程師聯(lián)系。然后關(guān)主機電源開關(guān)，并關(guān)閉氣源減壓閥。每次維護時或故障維修時必

32、須把相關(guān)情況填寫在儀器維護記錄表上，以便查詢。6、注意事項：6.1 儀器必須安裝在有足夠通風的房間內(nèi)運轉(zhuǎn)。6.2 安裝表面必須是固定、水平以及不可燃燒的。6.3 儀器的使用調(diào)節(jié)及維護必須是經(jīng)過相關(guān)培訓(xùn)的或責任管理人員進行。hfsafe生物安全柜操作規(guī)程及維護1.目的：為了滿足生物安全操作的要求，并且達到在操作時保護操作人員的目的，使細菌操作達到無菌操作的要求，便于操作的標準化。2.原理：通過使用空氣超高過濾器（ulpa）的過濾，使儀器內(nèi)部的空氣潔凈度達到100級，使細菌的一般操作限制在一個相對密閉的環(huán)境中，不但保護操作人員，還可滿足操作的標準化。3.工作條件：環(huán)境溫度：1830 相對濕度：、總

33、開關(guān)：位于控制面板的右側(cè)，是設(shè)備的總控制開關(guān)。2、fan鍵：用于開/關(guān)風機。3、lamp鍵：用于開/關(guān)照明光源。4、uv鍵：用于開/關(guān)紫外光源。5、mute鍵：用于關(guān)閉報警的蜂鳴器，建議在問題解決前不要關(guān)閉蜂鳴器。6、counter：用于顯示該設(shè)備操作運行時間（以小時計算）。7、n.pressure：用于顯示負壓腔中的相對氣流負壓狀態(tài)和低壓預(yù)警提示。8、門鎖按鈕：位于面板的左側(cè)，用于鎖住前玻璃門于關(guān)閉位置，放置非操作人員打開前玻璃門。實驗室高壓蒸氣滅菌器操作程序1目的：1.1 培養(yǎng)基等的液體滅菌，溶解。1.2 器具等的滅菌。1.3 廢棄物的處理滅菌。2原理：高壓蒸氣滅菌。滅菌溫度105-135

34、，溶解溫度60-100，保溫溫度45-60；壓力0-0.235兆帕3工作條件:環(huán)境溫度:5-35背面距離墻10厘米以上,右側(cè)距離墻5厘米以上。需放置在無陽光直接照射及濕度不高,灰塵少的地方。4.操作步驟：放置排氣儲存桶 注意:不得在滅菌器附近放置或放入可燃性物質(zhì),爆炸性物質(zhì),氧化性物質(zhì),易燃性物質(zhì),可燃性氣體。在排氣容器孔中務(wù)必插入排氣軟管添密件,關(guān)緊蓋罩,接通電源開關(guān)注意:安裝專用電源連接插口,安裝地線,可靠接地。發(fā)生異常情況時立即停止運轉(zhuǎn),切斷電源。 檢修時要切斷電源。打開蓋子注入加熱用水 注意: 需采用蒸餾水或自來水。放入滅菌物品注意: 不得將滅菌物品裝入蒸氣不能進入的容器和袋子,否則無

35、法滅菌; 裝盛滅菌物品的容器不得密封。不要讓滅菌物品堵塞和擠壓滅菌器內(nèi)的孔和溫度傳感器。僅對試管,燒瓶等容器本身滅菌時,開口要向下或橫放。物品滅菌時，應(yīng)同時放入監(jiān)控指標。用對熱敏感的染料標記的變色帶子。滅菌時，將變色帶夾放在試驗包裹中, 以監(jiān)視滅菌效果，關(guān)閉蓋子選擇過程(變更設(shè)定內(nèi)容)(設(shè)定預(yù)定運行作業(yè))注意: 運行中要開啟排水閥。按下操作按鈕 r1或b1 c1 d1滅菌 . 保溫 滅菌.溶解 器具滅菌運行 注意:運行中如有蒸氣泄漏時，不要靠近安全閥排氣口。 運行完畢, 打開蓋子,取出滅菌物品注意:不要被燙傷,臉不要靠近滅菌器。切斷電源開關(guān)排放加熱用水 bd bactec 9120 血培養(yǎng)儀1

36、.原理及目的 培養(yǎng)瓶內(nèi)的各種營養(yǎng)物質(zhì)可提供微生物生長的物質(zhì)基礎(chǔ),而微生物生長過程中的代謝產(chǎn)物之一co2將激活瓶內(nèi)底部熒光感應(yīng)物質(zhì),而發(fā)出熒光,熒光信號變化與co2變化成正比. bd bactec 9120血培養(yǎng)儀每10min探頭對培養(yǎng)瓶掃描一次，連續(xù)監(jiān)測系統(tǒng)自動地查出微生物的生長，并發(fā)出多種信號通知操作人員。菌血癥是臨床醫(yī)學(xué)急癥，引起菌血癥的細菌通常是多重耐藥菌，盡早采集血培養(yǎng)和進行準確的抗生素敏感試驗對危重患者感染的診斷，治療和預(yù)后有重要的臨床意義。2.范圍血液標本和腦脊髓液，關(guān)節(jié)液，胸腹腔積液等無菌部位的標本。3.職責臨床醫(yī)生負責按正確的操作方法取病人血標本并注入血培養(yǎng)瓶；細菌室人員負責標

37、本的接受、審核、登記編號、上機，陽性標本的傳種、鑒定、藥敏以及菌株的保存，正式報告的發(fā)出。4.標本的種類及收集方法bd bactec 9120血培養(yǎng)儀可檢測血液，腦脊髓液，關(guān)節(jié)液，胸腹腔積液等無菌部位的標本。每個血培養(yǎng)瓶注入無菌抽取的規(guī)定量的靜脈血。為防止皮膚寄生菌污染培養(yǎng)瓶，采集靜脈血前要用消毒劑（碘酊或碘復(fù)）對皮膚進行仔細充分的消毒處理，以便將污染減少到最低程度。標本采集后立刻送到實驗室, 在不得已的情況下，可短期內(nèi)（12h）置于室溫，不要冷藏。采集血培養(yǎng)瓶數(shù)量和采血時間：1 可疑急性原發(fā)性菌血癥或真菌血癥, 腦膜炎，骨髓炎，關(guān)節(jié)炎或肺炎，依據(jù)臨床情況立即取血作23份血培養(yǎng)。不明原因的發(fā)熱

38、（例如：深部膿腫，傷寒熱，波浪熱）首次取血作23份血培養(yǎng)， 2436 h后, 估計溫度快要升高之前，立即再取血作23份血培養(yǎng) (通常在下午)?？梢筛腥拘孕膬?nèi)膜炎, 在頭12 h內(nèi)，取血作3份血培養(yǎng)，如果24h后3份結(jié)果均陰性，再取血作3份血培養(yǎng)。入院前2周內(nèi)接受抗生素治療的患者，3天內(nèi)連續(xù)取血作血培養(yǎng)，每天2份。5.儀器及試劑bd公司bactec 9120全自動監(jiān)測系統(tǒng)，該儀器使用的培養(yǎng)基種類見下表，有效期內(nèi)可室溫貯藏。中文名稱采血量培養(yǎng)基體積適用標本標準厭氧瓶3-10ml25ml來源于未使用過抗生素患者的標本樹脂需氧瓶3-10ml25ml來源于已使用過抗生素患者的標本樹脂厭氧瓶3-10ml4

39、0ml來源于已使用過抗生素患者的標本樹脂兒童瓶1-3ml40ml兒童或其他采血困難的標本含溶血素厭氧/真菌瓶3-10ml40ml需溶血的厭氧菌,真菌培養(yǎng)含溶血素分枝桿菌/真菌瓶3-10ml40ml來源于無菌體液的分枝桿菌,真菌標本6.操作步驟6.1 血培養(yǎng)瓶接收標準6.1.1 檢查培養(yǎng)瓶確保安全地放置。6.1.2 用肉眼觀查微生物生長的可視信號，注意血液層上面是否有絮狀沉淀、均勻的或表面下的混濁、溶血、液體培養(yǎng)基凝固、有一層表面薄膜、產(chǎn)生氣體、血層表面或 深層有白色顆粒等。6.1.3 檢查瓶子上的標簽，與申請單上的患者資料是否一致。6.1.4 瓶內(nèi)血液量必需夠量，也不能超量，并在報告單上注明血

40、液量。6.2 不合格血培養(yǎng)標本的處理6.2.1 拒收培養(yǎng)瓶：血培養(yǎng)瓶標識與化驗申請單不符，培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告拒收的具體理由。6.2.2 補做培養(yǎng)瓶：血標本采集后放置12h以上（手工法除外），用不適當類型的培養(yǎng)瓶收集標本，用過期的培養(yǎng)瓶收集標本，采血量不足等。 處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告標本不合格的具體理由，建議補做血培養(yǎng)。6.3 血培養(yǎng)操作6.3.1 采集標本后的血培養(yǎng)瓶立即上機監(jiān)測，孵育溫度設(shè)為35c。掃描條型碼，錄入患者的姓名，年齡，性別，病歷號，專科，采集時間，上機時間，標本類型。6.3.2 儀器報警及紅燈閃爍的血培養(yǎng)瓶可能為陽性瓶；綠燈閃亮

41、的為陰性瓶。立即用注射器無菌法抽取陽性瓶中培養(yǎng)物作涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查。同時接種麥康凱瓊脂平皿, 血瓊脂平皿, 必要時增加厭氧血平皿或巧克力瓊脂平皿。依據(jù)顯微鏡檢查結(jié)果，一方面向臨床報告細菌形態(tài)及染色特性。另一方面可作初步的、非標準抗生素敏感試驗。6.3.3 戴乳膠手套，在生物安全柜或防止傳染的操凈臺內(nèi)操作。6.4結(jié)果報告6.4.1 陽性結(jié)果兩級報告制當日報告：陽性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應(yīng)該立即口頭報告給臨床醫(yī)生，包括：革蘭染色特征和形態(tài)，和其它的鑒定信息（如革蘭陽性球菌疑似為葡萄球菌等）。報告之前，應(yīng)該回顧一下患者近期送檢標本中微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來源。同時記錄

42、報告的日期，時間，內(nèi)容以及接受報告人的姓名。最終報告 細菌培養(yǎng)鑒定后, 最終向臨床正式報告細菌種或?qū)俸蜆藴士股孛舾性囼灲Y(jié)果。6.4.2 陰性結(jié)果報告：普通血培養(yǎng)3天無細菌生長可報告為：“72小時培養(yǎng)未見細菌生長”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至7天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長，可發(fā)補充報告。懷疑有真菌或其它慢生長菌，應(yīng)延長至1430天。6.5 質(zhì)量控制6.5.1 全自動的血培養(yǎng)系統(tǒng)的孵箱、機器進樣孔或分析組件應(yīng)按照廠商的規(guī)定標準進行檢測，所有維護、保養(yǎng)程序應(yīng)定期進行。6.5.2 培養(yǎng)瓶qc :bd建議對每批培養(yǎng)瓶均做陽性與陰性質(zhì)控，質(zhì)控方法請參照培養(yǎng)瓶隨附說明。6.5.3 對進樣孔用標準棒作質(zhì)控檢測，不能通過時

43、立即進行校正程序。6.5.4 儀器兼有培養(yǎng)箱的作用，每日記錄其溫度。7bactec9120血培養(yǎng)儀操作流程7.信息輸入7.1. 培養(yǎng)準備完畢后：注意臨床送檢的 培養(yǎng)瓶標本是否已將瓶上的 雙條碼之一，貼于檢驗單上 。7.1. 按f3culture,在出現(xiàn)的culture界面上輸入信息。7.1. 計算機自動制定培養(yǎng)瓶放置胡的位子。7.1. 按f10 存盤。7. 上機（vial entry）培養(yǎng)瓶信息輸入電腦后：7.2. 打開主機門7.2. 用條碼掃描儀掃條碼面板“vial entry”7.2. 掃描瓶上條碼，孵育架上瓶位指示燈亮7.2. 將培養(yǎng)瓶放入指定瓶位7.2. 聽到的的的三聲指示操作結(jié)束，關(guān)

44、門。注意：請勿在檢測時（軟件界面孵育架顯示l或t）開門，否則將丟失一次檢測數(shù)據(jù)。7.、 取出陰性瓶（remove negative）主機對普通細菌培養(yǎng)的默認培養(yǎng)周期為5天，5天內(nèi)如檢測不到細菌生長，將作為陰性瓶處理，軟件界面“summary”與瓶位編號指示陰性瓶出現(xiàn)。7.3.1 打開主機門7.3.2 用條碼掃描儀掃描條碼面板“remove negative”,陰性瓶所在位置瓶位指示燈亮7.3.3 逐個取出陰性瓶。如儀器設(shè)定為“逐個取出陰性瓶”的用戶，在陰性瓶取出后需逐個掃描瓶上條碼：如儀器設(shè)定為“成批取出陰性瓶”的用戶，無需再掃描瓶上條碼7.3.4 聽到的的的的三聲指示操作結(jié)束，關(guān)門7. 取出

45、陽性瓶（remove positive）主機檢測到陽性瓶后，軟件界面“summary”，瓶位編號以及主機外部“psoitive vial”均會給出陽性指示，并伴有報警聲。7.4.1 按f2消除報警聲7.4.2 打開主機門7.4.3 掃描條碼面板“remove positive”，陽性瓶所在位置瓶位指示燈亮7.4.4 逐個取出陽性瓶，并同時掃描瓶上條碼7.4.5 聽到的的的三聲指示操作結(jié)束，關(guān)門。7. 重新放回功能（re-enter）對于陽性瓶，如在儀器設(shè)置中設(shè)置了重新放回功能“re-entry”,則儀器保留該瓶位以及相關(guān)數(shù)據(jù)三小時，等待重新輸入，重新輸入時操作同培養(yǎng)瓶上機操作。注意：如果三小時內(nèi)不將該培養(yǎng)瓶重新放回，則所有數(shù)據(jù)不再保留。7. 匿名瓶問題（anonymous）見p167. 錯誤瓶位與錯誤瓶（error）見p17注意：當系統(tǒng)同時存在匿名瓶和錯誤瓶時，務(wù)必先解決匿名瓶。8.參考值正常人血培養(yǎng)應(yīng)為陰性，即血瓶中無菌生長。9.臨床意義血培養(yǎng)陽性對患者的診斷和預(yù)后有重要的意義。血培養(yǎng)陽性的原因有多種：當細菌或真菌在血液中迅速繁殖，超出網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除能力，而且引流或抗感染治療失敗，就會