(完整word版)高效液相色譜儀使用說(shuō)明

1、高效液相色譜儀使用說(shuō)明 1. 型號(hào)： LC-10AT 產(chǎn)地 日本島津 。 2. 用途： 高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液 , 不受樣品揮發(fā)性的限制 ,流動(dòng)相可選擇的范圍寬 , 固定相的種類繁多 ,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、 離解的和非離解的以及各種分子 量范圍的物質(zhì)。 與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合， HPL C 所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測(cè)定 性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能， 能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。 隨著固定相的發(fā)展 , 有 可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于 HPL C 具有高分辨率、高靈敏 度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用 , 流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn) ,因

2、而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食 品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用 是一個(gè)重要的發(fā)展方向。 3. 測(cè)定原理 高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。 儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)， 樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相 ,被流動(dòng)相載入色譜柱 （固定相 ） 內(nèi) , 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù) , 在兩相中作相對(duì)運(yùn) 動(dòng)時(shí) , 經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附 - 解吸的分配過(guò)程 , 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別 , 被 分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出 , 通過(guò)檢測(cè)器時(shí) , 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄 儀，數(shù)據(jù)以

3、圖譜形式打印出來(lái)。 4. 使用方法 4.1 系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由 1 個(gè) LC-10ATvp 溶劑輸送泵、 Rheodyne 7725i 手動(dòng)進(jìn)樣閥、 SPD-10Avp 紫外 -可見(jiàn)檢測(cè)器、色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、不間 斷電源等輔助設(shè)備。 4.2 準(zhǔn)備 4.2.1準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45 yn濾膜過(guò)濾，超聲波脫氣20min。 4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。 423配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45 yn濾膜過(guò)濾。 3.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常，特別注意輸液管道內(nèi)

4、是否有氣泡。 4.3 開機(jī)：接通電源，依次開啟不間斷電源、溶劑輸送泵、先將機(jī)器預(yù)熱半小時(shí)，這時(shí) 的流動(dòng)相用 85甲醇溶液（已脫氣） ，而且要時(shí)刻注意輸液管道內(nèi)是否有氣泡，如有氣泡 要進(jìn)行排氣。預(yù)熱半小時(shí)后，開啟檢測(cè)器，待檢測(cè)器自檢結(jié)束后，打開打印機(jī)、電腦顯示 器、主機(jī)，最后打開色譜工作站。 4.4 各種參數(shù)設(shè)定 4.4.1 波長(zhǎng)設(shè)定：在檢測(cè)器顯示初始屏幕時(shí)，按 func 鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長(zhǎng)值，按 Enter鍵確認(rèn)。按CE鍵退出到初始屏幕。 4.4.2 流速設(shè)定：在輸送泵顯示初始屏幕時(shí)，按 func 鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在 線時(shí)流速一般不超過(guò) 1ml/min ）,按Enter鍵確

5、認(rèn)。按CE鍵退出。 4.5 更換流動(dòng)相并排氣泡 4.5.1 將輸送管道的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶（已排氣）中； 4.5.2 逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)泵的排液閥 180度，打開排液閥； 4.5.3按泵的purge鍵，pump指示燈亮，泵大約以 2ml/min的流速?zèng)_洗，3min （可設(shè)定） 后自動(dòng)停止； 4.5.4 將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。 4.5.5 如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。 4.5.6 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為 5ml/min，按pump鍵，沖洗3min后再按pump鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定 值。 4.

6、6 平衡系統(tǒng) 4.6.1 按大連江申色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程打開 “在線色譜工作站 ”軟件，輸入實(shí)驗(yàn)信 息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，按下 “數(shù)據(jù)收集 ”頁(yè)的 查看基線 按鈕。 4.6.2 等度洗脫方式 4.6.2.1 按輸送泵的 pump 鍵，泵啟動(dòng)， pump 指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系 統(tǒng)，一般最少需 6 倍柱體積的流動(dòng)相。 4.6.2.2 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。 4.6.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過(guò)1MPa 。如超過(guò)則可初步判斷為柱 前管路仍有氣泡，按 3.5 操作。 4.6.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移 0.01mV/min

7、 ，噪聲為 。如為單向閥和閥座之間夾有異物 ， 拆下單向閥 ， 放入盛有丙酮的燒杯用 超聲波清洗 . 5.5 出峰不佳 ，峰分叉。 原因(1) 色譜柱被污染 ; (2) 柱頭填料塌陷。 處理對(duì)于第一種情況 ， 先用純水反向沖洗柱子 ， 然后換成甲醇沖洗 ， 接著用甲醇 + 異丙 醇(4 + 6) 沖洗柱子 (沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定) ， 再換成甲醇沖洗 ， 然后用純 水沖洗 ，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30 分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情 況。對(duì)于第二種情況 ，擰開柱頭 ，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料 ) ， 裝入新填料 ， 滴一滴甲醇 ， 填料

8、下陷 ， 再填 ， 用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊 ， 再填平 ， 滴甲醇 ， 再壓緊反復(fù)幾次 ， 直至裝滿填平 2 。柱頭用甲醇沖洗干凈 ， 擦凈柱外壁 的填料， 擰緊柱頭 ，用純甲醇沖洗 30 分鐘以上。 5.6 峰面積重復(fù)性不佳。 原因(1) 進(jìn)樣閥漏液 ; (2) 加樣針不到位。 處理對(duì)于第一種情況更換進(jìn)樣閥墊圈 ; 對(duì)于第二種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶 液后須快速、平穩(wěn)地從 LOAD 狀態(tài)轉(zhuǎn)換到 INJ EC T 狀態(tài) ，以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工 作中 ， 液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要 ， 如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中 ， 儲(chǔ)液 器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并更換溶液 ， 每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖 洗干凈 ，防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積; 樣品