常用固定液的配制

1、常用固定液的配制 1. 福爾馬林 -醋酸 -酒精固定液 （FAA） 50%或 70%酒精 90ml + 冰醋酸 5ml + 福爾馬林 （37%40% 甲醛 ）5ml 可用作固定植物的一般組織 ,但不適用于單細(xì)胞及絲狀藻類 ,也不適宜作細(xì)胞學(xué)研究。幼嫩材 料用 50%酒精代替 70%酒精，可防止材料收縮。若材料堅硬，可略減冰醋酸，略增福爾馬 林。若材料易收縮，可稍增加冰醋酸。久置時另加入 5ml 甘油以防蒸發(fā)和材料變硬。此液 又可作保存液。固定時間最多10h。如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果較 好： 50%酒精 89ml + 冰醋酸 6ml + 福爾馬林 5ml 2. 福爾馬林 -

2、丙酸 -酒精固定液（ FPA） 福爾馬林 5ml + 丙酸 5ml + 70% 酒精 90ml 固定一般的植物組織，通常固定824h，可長久保存。 3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡諾固定液，Carnoy fixative ） 配方I:純酒精3份+乙酸1份 配方H:純酒精 6份+乙酸1份+氯仿3份 配方川：甲醇6份+乙酸1份+氯仿3份 適用于植物組織和細(xì)胞學(xué)材料， 為研究細(xì)胞分裂和染色體的優(yōu)良固定液。 固定時間不宜過久。 4. 酒精 -福爾馬林固定液 福爾馬林 26（610）ml + 70%酒精 100ml 固定植物一般組織，尤其適用于萌發(fā)的花粉管的固定。通常固定24h,亦可長久保存。 5. 酒

3、精 -福爾馬林 -甘油固定液 95%酒精 150ml + 5% 福爾馬林 100ml + 甘油 50ml 此液也可長期儲存材料。 6. 鉻酸 -醋酸固定液 根據(jù)固定對象的不同，可分為強(qiáng)、中、弱 3種配方: （1） 弱液配方: 10%鉻酸 2.5ml + 10%醋酸 5ml + 蒸餾水 92.5ml （2） 中液配方: 10%鉻酸 7ml + 10%醋酸 10ml + 蒸餾水 83ml （3）強(qiáng)液配方: 10%鉻酸 10ml + 10%醋酸 30ml + 蒸餾水 60ml 弱液配方用在固定較柔軟的材料，如藻類、苔蘚和蕨類的原葉體等。固定時間較短，一般為 數(shù)小時，最長可固定 1224h，但藻類和蕨

4、類的原葉體可縮短到幾分鐘至1h。 中液配方用于固定根尖、莖尖、未成熟子房和胚珠等。為了易于滲透，可在此液中加入2% 的麥芽糖或尿素。固定時間1224h。 強(qiáng)液配方用于固定木質(zhì)根、莖、成熟子房等。為了易于滲透，可在此液中加入2%的麥芽糖 或尿素。固定時間1224h或更長。 7鉻酸-醋酸-福爾馬林混合液 這3種藥品混合在一起所配成的各種固定液，通常稱納瓦申固定液(Nawashin fixative)，簡 稱Craf。配方見下表： 常備液 納瓦申 原液(ml) 納瓦申固定液(ml) 桑弗利斯液 (ml) I n 出 w V 甲 液 1%鉻酸 40 40 40 10%鉻酸 15 8 10 13 鉻酸

5、15 20 20 60 70 冰醋酸 10 8 蒸餾水 75 45 40 40 32 20 79 乙 液 福爾馬林 40 10 10 10 20 30 64 蒸餾水 60 90 90 80 80 70 36 甲、乙兩液均為貯備液，使用之前才將二者混合。適用于組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)的研究材料。柔嫩 而含水多的材料，可選用I或n固定，堅韌而成熟的材料，可用高濃度的”或V,般材料 多用川。制作染色體和有絲分裂的紡錘體標(biāo)本時，常用桑弗利斯固定液。i、n、川、w、 V固定液的固定時間為 1248h，桑弗利斯液固定時間為 46h。 8. 鉻酸-鋨酸-醋酸固定液(Flemming fixative ) 強(qiáng)液：10%

6、鉻酸水溶液3.1ml + 2%鋨酸的鉻酸(2%)水溶液12ml + 10%醋酸水溶液30ml +蒸 餾水11.9ml 中液：10%鉻酸水溶液 0.33ml + 2%鋨酸的鉻酸(2%)水溶液0.62ml + 10%醋酸水溶液3ml + 蒸餾水6.27ml 弱液：10%鉻酸水溶液1.5ml + 2%鋨酸的鉻酸(2%)水溶液5ml + 10%醋酸水溶液1ml +蒸 餾水96.5ml此固定液需現(xiàn)用現(xiàn)配。固定2348h?？捎糜诟鞣N植物組織的固定。 9. Liche nt 固定液 1%鉻酸水溶液15ml +冰醋酸5ml +福爾馬林80ml此固定液適用于固定絲狀藻類和真菌 1. 番紅水溶液 番紅 0.1g

7、溶入蒸餾水 ,定溶至 100ml 。用前過濾。 2. 番紅乙醇溶液 番紅 1g 溶入 50%（或 95%）酒精 ,定溶至 100ml 。用前過濾。 3. 固綠染液 固綠 0.1g 溶入 95%酒精，定溶至 100ml 。 4. 碘 -碘化鉀染液 碘化鉀溶入 100ml 蒸餾水，再加入 1g 碘，溶解后即可使用。 5. 蘇丹川（或W）染液 將0.1g蘇丹川或W溶解在 50ml丙酮中，再加入 70%酒精50ml。 6. 改良苯酚品紅染液 原液A :將3g堿性品紅溶入100ml 70%酒精，此液可長期保存。 原液B :將10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。 原液C :將55mlB液加入到6

8、ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。 染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混勻，再加入 1g山梨醇，放置14天后使 用，可保存 3 年。 7. 間苯三酚染液 將 5g 間苯三酚溶入 100ml 95% 酒精（若溶液呈黃色，即為失效） 。 8. 中性紅染液 將 0.1g 中性紅溶入 100ml 蒸餾水，用時稀釋 10倍。 9. 釕紅染液 將 510mg 釕紅溶入 2550ml 蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配。 10. 龍膽紫染液 將 0.2g 龍膽紫溶入 100ml 蒸餾水?，F(xiàn)常用結(jié)晶紫代替。必要時可將醫(yī)用紫藥水稀釋 5倍后 代用。 11. 鐵醋酸洋紅染液 先將 100ml 45% 醋酸水溶

9、液置入 200ml 的錐形瓶中煮沸， 移去火苗， 然后慢慢地分多次加入 1g洋紅粉末（切記不可一次倒入）。待全部倒入后，再煮沸12min，并懸入一生銹的小鐵 釘于染液中，過 1min 后取出，使染色劑略含鐵質(zhì)，以增加染色性能。靜置 12h 后過濾于棕 色瓶中備用（置于避光處） 。 12. 蘇木精染液 蘇木精的配方很多，常用的有如下 3 種： 配方I:蘇木精水溶液 0.5g 蘇木精溶入 100ml 煮沸的蒸餾水中，靜置 24h 后可使用。 配方 n：代氏蘇木精（ Delarfield s haematoxylin 甲液:蘇木精 1g + 無水酒精 6ml 乙液：硫酸鋁銨（銨礬） 10g + 蒸餾

10、水 100ml 丙液：甘油 25ml + 甲醇 25ml 分別配制甲、乙兩液，將甲液一滴滴地加入乙液中，充分?jǐn)嚢韬螅?放入廣口瓶中用紗布蒙住 瓶口，置于溫暖和光線充足處 710 天，再加入丙液，混勻后靜置 12 月，至顏色變?yōu)樯钭?色后，過濾備用，可長期保存。 配方川：愛氏蘇木精（ Ehrlich s haematoxy）n 蘇木精 1g + 無水或 95%酒精 50ml + 蒸餾水 50ml + 甘油 50ml + 冰醋酸 5ml + 硫酸鋁鉀（鉀 磯）35g。配制時，先將蘇木精溶于酒精中，然后依次加入蒸餾水、甘油和冰醋酸，最后加 入研細(xì)的鉀礬， 邊加邊攪拌，直到瓶底出現(xiàn)鉀礬結(jié)晶為止?；旌虾?/p>

11、溶液顏色呈淡紅色， 放入 廣口瓶中， 用紗布封口， 自然氧化 12 月，至顏色變?yōu)樯罴t色時即可過濾備用， 可長期保存。 13. 席夫試劑（ Schiff s reg）ent 將0.5g堿性品紅溶入煮沸的蒸餾水，攪拌使其充分溶解。冷卻至50C時，過濾于棕色細(xì)口 瓶中，加入10ml1mol/L鹽酸。冷卻至 25 C左右，加入 1g偏亞硫酸鉀或鈉（Na2S2O5或 K2S2O5） ，振蕩使其溶解，密封瓶口，置于黑暗低溫處過夜。次日檢查，若染色液透明無色 或呈淡茶色，即可使用。若染色較深，可加入少量優(yōu)質(zhì)活性炭（0.52g）,振蕩1min，置于 4C冰箱中過夜，過濾使用。此液配好后，應(yīng)塞緊瓶塞，外包黑紙

12、，貯藏于冰箱中。 14. 硫堇染液 將 0.25g 硫堇粉末，溶于 100ml 蒸餾水中，即可使用。使用此液時。需用微堿性自來水封片 或用 1%NaHCO3 水溶液封片，能產(chǎn)生多色反應(yīng)。 15. 亞甲基藍(lán)染液 0.1g 亞甲基藍(lán)溶入 100ml 蒸餾水即可。 16. 詹納斯綠 B （Janus green B）染液 5.18g詹納斯綠溶入100ml蒸餾水，配成飽和水溶液。用時需稀釋，稀釋倍數(shù)應(yīng)視材料而異。 17. 蘇木精 -曙紅 （HE） 染液 曙紅（Eos in）,酸性染料，為最優(yōu)良的動物細(xì)胞染料，與蘇木精配合使用（復(fù)染）對動物組 織進(jìn)行對比染色。 蘇木精的染液的配方同上。曙紅有以下配制方法： 配方I:曙紅 0.5g + 95%酒精100ml 配方n：曙紅0.5g +蒸餾水100ml 配方川：曙紅0.5g + 95%酒精25ml +蒸餾水75ml 18蛋白膠亦稱梅氏蛋白的制作 將雞蛋一個打破讓蛋清流入燒杯內(nèi)， 用筷子充分條大雪花狀泡沫， 然后將它用雙層紗布過濾 到量筒中， 經(jīng)數(shù)小時或一夜，過濾出透明的蛋白液，此時再加入等量的甘油，稍稍振搖使兩 者混合，最后加入麝香草酚（thymol） （1:100）做防腐作用，可保存幾個月到一年（4C冰 箱中）。 載玻片和蓋玻