還原糖和總糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法_第1頁
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1、還原糖和總糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法、目的 掌握還原糖和總糖測定的基本原理，學習比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使 用。二、原理還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是 還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同， 可將植物樣品中的單糖、 雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的再分別求出樣品中還原糖雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定,和總糖的含量(還原糖以葡萄糖含量計)。還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物,3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨

2、基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關系,利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值， 查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時， 每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。6COOHCOOH(fV屮1. i* 引側0OHOH三、實驗材料、主要儀器和試劑1. 實驗材料小麥面粉；精密pH試紙。2. 主要儀器(1)具塞玻璃刻度試管：20mLX 11大離心管：5OmL2燒杯：lOOmlXl三角瓶：lOOmlXl容量瓶：100mL3(6)刻度吸管：ImK 1; 2mL 雙糖 三糖 戊糖 己糖 酮糖醛糖 實驗室常用的展開劑： 正丁醇:HAc：H2O=4:1:5 常用的顯色劑:0.1N AgNONH4OH（SN）=1:1（靈敏度高，但斑點易擴散）ANQ/丙酮:NaOH/乙醇=1:1（克服上面缺點）（顯色劑書上給出許多，同學們可以自己看）樣品的處理可采用常規(guī)法如：糖的提取和蛋白質的除去可看前面講的。根據(jù)R值可求出各種糖的R與標準樣品的R值進行比較，可確定出糖的種

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