基因工程試題

1、基因工程試題基因工程試題 A一、名詞解釋 （每題 2 分,共 20 分）1、轉(zhuǎn)染:2、質(zhì)粒不親與性 :3、cDNA 文庫(kù):4、RACE:5、基因工程 :6、RT-PCR7、插入失活 :8、S-D 序列 :9、穿梭質(zhì)粒載體 :10、多克隆位點(diǎn) :二、選擇題 （每題 1分,共 15分）1（ ） 基因工程操作的三大基本元件就是 :（I 供體 II 受體 III 載體 IV 抗體 V 配體 ）A I + II + IIIB I + III + IVC II + III + IVD II + IV + VE III + IV + V2（ ） 基因工程的單元操作順序就是A增,轉(zhuǎn),檢,切,接B切，接,轉(zhuǎn),增

2、,檢C接,轉(zhuǎn),增,檢,切D檢,切,接,增,轉(zhuǎn)E切，接,增,轉(zhuǎn),檢3 ( ) 生物工程的上游技術(shù)就是 A 基因工程及分離工程 B 基因工程及發(fā)酵工程 C 基因工程及酶工程 D 基因工程及細(xì)胞工程E基因工程及蛋白質(zhì)工程4 ( ) 下列對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確的就是 :A依賴于RNA勺DNA聚合酶或稱為RNA旨導(dǎo)的DNA聚合酶B依賴于cDNA的DNA聚合酶或稱為cDNA旨導(dǎo)的DNA聚合酶C依賴于DNA勺DNA聚合酶或稱為DNA旨導(dǎo)的DNA聚合酶D依賴于RNA勺R(shí)NA聚合酶或稱為rNA指導(dǎo)的RNA聚合酶5( ) 下列對(duì)限制性內(nèi)切酶描述正確的就是A限制性內(nèi)切酶可識(shí)別任一的 DNA序列B 使用限制性內(nèi)切酶時(shí) ,

3、 有時(shí)可出現(xiàn)星活性C 限制性內(nèi)切酶可識(shí)別堿基數(shù)不超過(guò) 5 個(gè)D 限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生都就是黏性末端6 ( )T 4 -DNA 連接酶就是通過(guò)形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起 , 其底物的關(guān)鍵基團(tuán)就是A2-OH與5-PB2-OH與3-PC3-OH與2-PD3-OH與5-PE5-OH與3-P7 ( ) 下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述 , 錯(cuò)誤的就是A連接反應(yīng)的最佳溫度為12 16CB 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD 連接酶通常應(yīng)過(guò)量 2-5 倍E DTT在反應(yīng)中可加也可不加8()下列哪種克隆載體對(duì)外源 DNA勺容載量最大？

4、A質(zhì)粒B 黏粒C 酵母人工染色體 (YAC)D入噬菌體 9 ( ) 載體的功能就是 (I 運(yùn)送外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞 II 為外源基因提 供復(fù)制能力 III 為外源基因提供整合能力 )A IB I + IIC I + IIID II + IIIE I + II + III10 ( ) 考斯質(zhì)粒 (cosmid) 就是一種A天然質(zhì)粒載體B由入-DNA的cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C 能裂解受體細(xì)胞的烈性載體D 具有溶原性質(zhì)的載體E 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體11( ) 下列有關(guān)基因的描述 , 錯(cuò)誤的就是A 蛋白質(zhì)就是基因表達(dá)唯一的產(chǎn)物B基因就是DNA鏈上具有編碼功能的片段C 基因也可以就

5、是 RNAD 基因突變不一定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)12()關(guān)于cDNA的最正確的提法就是：A 同mRN互補(bǔ)的單鏈 DNAB 同mRN互補(bǔ)的雙鏈 DNAC以mRN為模板合成的雙鏈DNA D 以上都正確13( ) 某一重組 DNA( 6、2 kb ) 的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)。用 SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子 ,其長(zhǎng)度總與與已知數(shù)據(jù)吻合 , 該重 組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點(diǎn)共有個(gè)個(gè)個(gè)543A B C14() 同一種質(zhì)粒DNA以三種不同的形式存在，電泳時(shí)，它們的遷移速率就是A OC DNASC DNPLDNA B SC DNAL DNAOC DNAC L

6、DNAOC DNASC DNA D SC DNAOC DNAL DNA 15( ) cDNA 法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)就是 A 成功率高B 不含內(nèi)含子C 操作簡(jiǎn)便D 表達(dá)產(chǎn)物可以分泌E 能糾正密碼子的偏愛(ài)性三、簡(jiǎn)答題 (每題 5分,共 25分)1 、什么就是包涵體？2、PCF反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過(guò)程就是什么?3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？4、作為基因工程載體必須具備的基本條件就是什么？5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)就是什么？四、論述題 （每題 10分,共 40分）1 簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的一般過(guò)程2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)就是什么？3 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？4試

7、述3 RACE技術(shù)原理與方法基因工程試題標(biāo)準(zhǔn)答案及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) A一、選擇題 （每題 1分,共 15分）1、A2、A3、A4、A 5 、B 6、D 7、E 8、C9、E 10 、B11 、A 12、 C 13 、D 14 、B 15、 B二、名詞解釋 （每題 2 分,共 20 分 ）1、轉(zhuǎn)染 :專指感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞捕獲與表達(dá)噬菌體DNA 分子的生命過(guò)程。2、質(zhì)粒不親與性 : 在沒(méi)有選擇壓力的情況下 ,兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地 共存的現(xiàn)象。3、cDNA 文庫(kù) :就是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA 片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、 RACE:就是一種通過(guò) PCR

8、進(jìn)行cDNA末端快速克隆的技術(shù)，就是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄 成 cDNA 第一鏈后用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到3,或 5,端之間未知序列的方法。5、 基因工程 :在分子水平上的進(jìn)行的遺傳操作，指將一種或多種微生物的基因或基因組提取出 來(lái)，或人工合成基因 ，按著人們的愿望 ，進(jìn)行嚴(yán)密的設(shè)計(jì) ，經(jīng)過(guò)體外加工重組 ，轉(zhuǎn)移到另一種生物 體的細(xì)胞內(nèi) ，使之能在受體細(xì)胞遺傳并獲得新的遺傳性狀的技術(shù)。6、 RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRNA,以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈撚后用已知一 對(duì)引物 ，擴(kuò)增嵌合分子 ，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄 PCR7、Insert inaction: 即插入失活 ,

9、 基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn) ,在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理,并將外源 DNA 片段插入該位點(diǎn) ,則插入的外源 DNA 片段將破壞原有基因的讀碼框,往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無(wú)法翻譯表達(dá) ,或即使翻譯表達(dá) ,形成的也就是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì),這一現(xiàn)象稱為插入失活。8、 S-D 序列:在大腸桿菌 mRNA 的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上 ,含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同 16S 核 糖體 RNA 3,末端堿基互補(bǔ)的序列 ,該序列最初由 Shine 、 Dalgarno 發(fā)現(xiàn) ,故后來(lái)命名為 Shine Dalgarno 序列 ,簡(jiǎn)稱 S-D 序列。9、

10、 穿梭質(zhì)粒載體 :指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記,因而可在兩種不同 宿主細(xì)胞中存活與復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、 MCS: 指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA 片 段。三、簡(jiǎn)答題 （共 25分,每題 5分）1、什么就是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí) ,常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在,這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成就是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象,這就是由于肽鏈折疊過(guò)程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合 ,而不就是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過(guò)程就是什么？PCR反應(yīng)體系所要求的條件：a、被分離的目

11、的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的DNA引物（約20個(gè)堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如:TagDNA聚合酶。c、dNTP。d、作為模板 的目的DNA序列,E無(wú)菌水，F(xiàn)緩沖液PCR 反應(yīng)體系的基本反應(yīng)過(guò)程 :預(yù)變性、變性、退火、延伸、復(fù)延伸。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA樣品的純度。DNA的甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。DNA分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4、作為基因工程載體必須具備的基本條件就是什么？ 能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立與穩(wěn)定的自我復(fù)制 具有合適的限制內(nèi)切酶位點(diǎn) 具有合適的選擇標(biāo)記基因5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)就是什么？ 就是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論

12、上的三大發(fā)現(xiàn)與技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn) : 證實(shí)了 DNA 就是遺傳物質(zhì) 揭示了 DNA 分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型與半保留復(fù)制機(jī)理 遺傳密碼的破譯與遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明 : 限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA 切割 DNA 連接酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA 片段的連接 基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問(wèn)答題 (每題 10分,共40 分)1 簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的一般過(guò)程A 目的基因分析 (1)ORF 分析 (2) 酶切位點(diǎn)分析B 載體選擇與分析 (1)多克隆位點(diǎn)分析 (2) 抗性標(biāo)記分析 (3) 啟動(dòng)子與其她篩選標(biāo)記分析C 連接體系與連接時(shí)間確定2 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)就是什么

13、？?jī)?yōu)點(diǎn) :大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉,基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知識(shí)清楚 ,對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解,而且歷經(jīng)二十年的基因工程實(shí)踐,大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系 ,有多種適用的寄主菌株與載體系列,大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點(diǎn) :在通常情況下 ,細(xì)菌的 RNA 聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子 ;許多真核基因的蛋白質(zhì) 產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)翻譯后的加工修飾,如正確的折疊與組裝 ,而細(xì)菌中通常并沒(méi)有這樣的修飾機(jī)制,從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無(wú)法產(chǎn)生有活性的蛋白;外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別 ,并被當(dāng)做“異已分子”降解

14、掉。3 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？提高啟動(dòng)子強(qiáng)度 縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離 高效的翻譯起始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū) 提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性 用以下方法提高翻譯水平 :調(diào)整 SD 序列與 AUG 間的距離用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基增加 mRNA 的穩(wěn)定性的 減輕細(xì) 胞的代謝負(fù)荷 :誘導(dǎo)表達(dá)表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性 ,防止其降解 :克隆一段原核序列，表達(dá)融合蛋白采用某種突變菌株表達(dá)分泌蛋白質(zhì)4試述3 RACE技術(shù)原理與方法PCR用于擴(kuò)增代表 mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點(diǎn)與其 3或5末端之間區(qū)域的部分 cDNA稱 為快速擴(kuò)增 cDNA 末端技術(shù)。 如果已敿目的 mRNA 的一片段鏈內(nèi)短序列 ，據(jù)此或設(shè)計(jì)基因特 異引物 ，用原先存在的 poly(A) 尾(3末端 )或附加的同聚尾 (5末端 )互