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1、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)一、實(shí)驗(yàn)室基本組成(一)基本實(shí)驗(yàn)室1. 準(zhǔn)備室:進(jìn)行一切與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的準(zhǔn)備工作, 完成所使用的各種藥品的貯備、 稱量、溶 解、器皿洗滌、培養(yǎng)基配制與分裝、培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿的滅菌、培養(yǎng)材料的預(yù)處 理等。要求:最好有 25 平方米左右。要求寬敞明亮、以便于放置多個(gè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)和相 關(guān)設(shè)備,方便多人同時(shí)工作;同時(shí)要求通風(fēng)條件好,便于氣體交換;實(shí)驗(yàn)室地面 應(yīng)便于清潔,并應(yīng)進(jìn)行防滑處理。設(shè)備:準(zhǔn)備室應(yīng)具備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、藥品柜、水池、儀器、藥品、防塵櫥(放置培 養(yǎng)容器)、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計(jì)及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器等。2、洗滌滅菌室完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。要求:
2、洗滌滅菌室根據(jù)工作量的大小決定其大小,一般面積控制在 25 平方 米。在實(shí)驗(yàn)室的一側(cè)設(shè)置專用的洗滌水槽, 用來清洗玻璃器皿。 中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)還應(yīng) 配置 2 個(gè)水槽,用于清洗小型玻璃器皿,地面應(yīng)耐濕并 排水良好。設(shè)備:水池、落水架、中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)、高壓滅菌鍋、超聲波清洗器、干燥滅菌 器等。3、緩沖間是進(jìn)入無菌室前的一個(gè)緩沖場(chǎng)地, 減少人體從外界帶入的塵埃等污染物。 工 作人員在此換上工作服、拖鞋,戴上口罩,才能進(jìn)入無菌室和培養(yǎng)室。 進(jìn)入無 菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋,以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。要求 :緩沖間需 5-10 平方米,可建在準(zhǔn)備室外或無菌操作室外,應(yīng)保持清 潔無菌;備有鞋架和衣帽掛鉤,并有清潔的
3、實(shí)驗(yàn)用拖鞋、已滅菌過的工作服;墻 頂用 1-2 盞紫外燈定時(shí)照射,對(duì)衣物進(jìn)行滅菌。 緩沖間最好也安一盞紫外線滅 菌燈,用以照射滅菌。 緩沖間的門應(yīng)該與接種室的門錯(cuò)開, 兩個(gè)門也不要同時(shí)開 啟,以保證無菌室不因開門和人的進(jìn)出帶進(jìn)雜菌。設(shè)備: 1-2 盞紫外燈、水槽、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、鞋帽架、柜子、滅菌后的工作服、拖 鞋、口罩。4、無菌操作室(接種室)也叫接種室,主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼 代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無菌操作的技術(shù)程序, 是植物離體培養(yǎng)研 究或生產(chǎn)中最關(guān)鍵的一步。要求:接種室宜小不宜大,一般 10 平方米,其規(guī)模根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和環(huán)境控 制的難易程度而定。 要
4、求封閉性好, 干爽安靜,清潔明亮,能較長(zhǎng)時(shí)間保持無菌, 因此不易設(shè)在容易受潮的地方; 地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑, 易于清潔 和消毒;配置拉動(dòng)門,以減少開關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng);為便于消毒處理,地面及內(nèi) 墻壁都應(yīng)采用防水和耐腐蝕材料; 為了保持清潔, 無菌室應(yīng)防止空氣對(duì)流。 接種 室要求在適當(dāng)位置吊裝12盞紫外線滅菌燈,用以照射滅菌。最好安裝一小型 空調(diào),使室溫可控,這樣可使門窗緊閉,減少與外界空氣對(duì)流。 一般新建實(shí)驗(yàn) 室的無菌室在使用之前應(yīng)進(jìn)行滅菌處理, 處理方法是甲醛和高錳酸鉀熏蒸, 并需 定期滅菌處理,還可用紫外線照射 1-2h/ 周,或每次使用前照射 1 0-30min 。設(shè)備:紫外燈
5、、空調(diào)、解剖鏡、消毒器、酒精燈、接種器械(接種鑷子、剪 刀、解剖刀、接種針) ,實(shí)驗(yàn)臺(tái)、和擱架, 還有超凈工作臺(tái)和整套滅菌接種儀器、 藥品等。5、培養(yǎng)室對(duì)接種到培養(yǎng)瓶等器皿中的植物離體材料進(jìn)行控制條件下的培養(yǎng), 無論是研 究性實(shí)驗(yàn)室還是生產(chǎn)性實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行培養(yǎng)的場(chǎng)所。要求:約需 20-30 平方米左 右,培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定,其設(shè) 計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。 基本要求是能夠控制光照和溫度, 并保持 相對(duì)的無菌環(huán)境, 因此,培養(yǎng)室應(yīng)保持清潔和適度干燥; 為滿足植物培養(yǎng)材料生 長(zhǎng)對(duì)氣體的需要, 還應(yīng)安裝排風(fēng)窗和換氣扇等培養(yǎng)室的換氣裝置; 為節(jié)省能源和
6、空間,應(yīng) 配置適宜的培養(yǎng)架,并安裝日光燈照明。研究用實(shí)驗(yàn)室, 通??筛鶕?jù)光照時(shí)間設(shè)置成長(zhǎng)日照、 中日照、短日照培養(yǎng)室, 也可以根據(jù)溫度設(shè)置成高溫和低溫培養(yǎng)室, 每一個(gè)培養(yǎng)室的空間不宜過大, 便于 對(duì)條件的均勻控制。 進(jìn)行精細(xì)培養(yǎng)類型如細(xì)胞培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng), 可采用光照 培養(yǎng)箱或人工氣候箱代替培養(yǎng)室。為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時(shí)間及其強(qiáng)度, 培養(yǎng)室的房間不要窗戶, 但應(yīng) 當(dāng)留一個(gè)通氣窗,并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制,光照由日光燈控制。天 花板和內(nèi)墻最好用塑料鋼板裝修, 地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè), 一般要分兩間, 一 為光照培養(yǎng)室,一為暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)架上
7、培養(yǎng)。 培養(yǎng)架大多由金屬制成, 一般設(shè) 5 層,最低一 層離地高約10cm,其他每層間隔30cm左右,培養(yǎng)架即高1 . 7m左右。培養(yǎng)架長(zhǎng) 度都是根據(jù)日光燈的長(zhǎng)度而設(shè)計(jì), 如采用40W日光燈,則長(zhǎng)I . 3m 30W勺長(zhǎng)Im, 寬度一般為60cm。日光燈一般用40V,固定在培養(yǎng)架的側(cè)面或擱板的下面,每 層有兩支日光燈,距離在 20cm光照強(qiáng)度為2000-3000Ix。培養(yǎng)室最重要的因子是溫度,一般保持在2027 C左右,具備產(chǎn)熱裝置,并安裝窗式或立式空調(diào)機(jī)。由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度, 最好不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定,相對(duì)濕度以保持在70%- 80%為好,可安
8、裝加濕器??刂乒庹諘r(shí)間可安裝定時(shí)開關(guān)鐘,一般需要每天光照10-16h,也有的需要連續(xù)照明。短日照植物需要短日照條件, 長(zhǎng)日照植物需要長(zhǎng)日照條件。 現(xiàn)代組培實(shí)驗(yàn) 室大多設(shè)計(jì)為采用天然太陽光照作為主要能源, 這樣不但可以節(jié)省能源, 而且組 培苗接受太陽光生長(zhǎng)良好,馴化易成活。在陰雨天可用燈光作補(bǔ)充。設(shè)備:培養(yǎng)架(控溫控光控濕)、搖床、轉(zhuǎn)床、自動(dòng)控時(shí)器、紫外燈、光照 培養(yǎng)箱或人工氣候箱、 生化培養(yǎng)箱、 邊臺(tái)實(shí)驗(yàn)臺(tái)用于拍攝培養(yǎng)物生長(zhǎng)狀況, 除濕 機(jī)、顯微鏡、溫濕度計(jì)、空調(diào)等。(二)輔助實(shí)驗(yàn)室1 、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室用于對(duì)培養(yǎng)物的觀察分析與培養(yǎng)物的計(jì)數(shù), 對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研 究,由制片室和顯微觀察室
9、組成。 制片是獲取顯微觀察數(shù)據(jù)的基礎(chǔ), 配備有切片 機(jī)、磨刀機(jī)、溫箱及樣品處理和切片染色的設(shè)備。應(yīng)有通風(fēng)櫥和廢液處理設(shè)施。 顯微觀察室主要是顯微鏡和圖像拍攝、處理設(shè)備。要求:明亮、清潔、干燥、防止潮濕和灰塵污染。設(shè)備:雙筒實(shí)體顯微鏡、顯微鏡、倒置顯微鏡等。2、生化分析實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室, 應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室, 隨時(shí)對(duì) 培養(yǎng)物成分進(jìn)行取樣檢查。大型次生代謝物生產(chǎn),還需有效分離實(shí)驗(yàn)室。二、儀器設(shè)備和器皿用具(一)常規(guī)設(shè)備1 、天平組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室需要 2-3 臺(tái)不同精度的天平。感量 0.001g 的天平(分析天 平)和感量 0.0001g 的天平 (電子天平) 用于稱量微量
10、元素和一些較高精確度的 實(shí)驗(yàn)用品。感量 0.01g 和 0.1g 的天平,用于大量元素母液配制和一些用量較大 的藥品的稱量。2、冰箱各種維生素和激素類藥品以及培養(yǎng)基母液均需低溫報(bào)存, 某些試驗(yàn)還需植物 材料進(jìn)行低溫處理,一般普通冰箱即可。3、酸度計(jì)用于測(cè)定培養(yǎng)基及其它溶液的pH, 般要求可測(cè)定pH范圍1-14之間,精 度 0.01 即可。4、離心機(jī)用于細(xì)胞、原生質(zhì)體等活細(xì)胞分離, 亦用于培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞器、 核酸以及蛋 白質(zhì)的分離提取。 根據(jù)分離物質(zhì)不同配置不同類型的離心機(jī)。 細(xì)胞、原生質(zhì)體等 活細(xì)胞的分離用低速離心機(jī); 核酸、蛋白質(zhì)分離用高速冷凍離心機(jī); 規(guī)?;a(chǎn) 次生產(chǎn)物,還需選擇大型離心
11、分離系統(tǒng)。5、加熱器 用于培養(yǎng)基的配制。研究性實(shí)驗(yàn)室一般選用帶磁力攪拌功能的加熱器,規(guī)?;笮蛯?shí)驗(yàn)室用大功率加熱和電動(dòng)攪拌系統(tǒng)。6、其它純水器、分裝設(shè)備(二)滅菌設(shè)備維持相對(duì)得無菌環(huán)境是組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本要求。1 、高壓滅菌鍋用于培養(yǎng)基、 玻璃器皿以及其它可高溫滅菌用品的滅菌, 根據(jù)規(guī)模大小有手 提式、立式、臥式等不同規(guī)格。2、干熱消毒柜用于金屬工具如鑷子、剪刀、解剖刀,以及玻璃器皿的滅菌。一般選用200E 左右的普通或遠(yuǎn)紅外消毒柜。3、過濾滅菌器用于一些酶制劑、 激素以及某些維生素等不能高壓滅菌試劑的滅菌, 主要有 真空抽濾式和注射器式4、紫外燈方便經(jīng)濟(jì)的控制無菌環(huán)境的裝置,緩沖間、接種室
12、和培養(yǎng)室必備。(三)無菌操作設(shè)備1、接種箱 是使用較早的最簡(jiǎn)單的無菌裝置, 主體為玻璃箱罩、 入口有袖罩, 內(nèi)裝紫外 燈和日光燈,使用時(shí)對(duì)無菌室要求較高。2、超凈工作臺(tái) 其操作臺(tái)面是半開放區(qū), 具方便、 操作舒適優(yōu)點(diǎn), 通過過濾的空氣連續(xù)不斷 吹出,大于 0.03um 直徑的微生物很難在工作臺(tái)的操作空間停留,保持了較好的 無菌環(huán)境。 由于過濾器吸附微生物, 使用一段時(shí)間后過濾網(wǎng)易堵塞, 因此應(yīng)定期 更換。(四)培養(yǎng)設(shè)備 培養(yǎng)設(shè)備是指根據(jù)需要所選用的不同規(guī)格和控制精度的用于植物細(xì)胞、 組織 和器官培養(yǎng)的設(shè)施和設(shè)備。1、培養(yǎng)架 目前所有植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室植株繁殖培養(yǎng)的通用設(shè)施。 成本低、設(shè)計(jì)靈活、
13、 可充分利用培養(yǎng)空間,以操作方便、最大限度利用培養(yǎng)空間為原則。一般有 4-5 層,層間間隔40-50cm,光照強(qiáng)度可根據(jù)培養(yǎng)植物特性來確定,一般每架上配備 2-4 盞日光燈。2、培養(yǎng)箱細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等要求精確培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn),可用光照培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱、濕度控制培養(yǎng)箱等培養(yǎng)。3、搖床進(jìn)行液體培養(yǎng)時(shí),為改善通氣狀況,可用振蕩培養(yǎng)箱或搖床。(五)其他設(shè)備 可安裝時(shí)間程序控制器、 溫度控制系統(tǒng)或空調(diào)實(shí)體顯微鏡、 倒置式生物顯微 鏡及配套的攝影、錄像和圖像處理設(shè)備;電泳儀、萃取和層析設(shè)備、紫外分光光 度計(jì)、高效液相色譜儀、氣相色譜儀、酶聯(lián)免疫測(cè)定系統(tǒng)。三、培養(yǎng)容器與用具 培養(yǎng)容器指盛有培養(yǎng)基并提供
14、培養(yǎng)物生長(zhǎng)空間的無菌裝置, 培養(yǎng)用具指培養(yǎng) 物接種封口所用的各種金屬或塑料制品,實(shí)驗(yàn)室必備。(一)培養(yǎng)容器 包括各種規(guī)格的培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、培養(yǎng)瓶。玻璃容器,一般用無色并 不產(chǎn)生顏色折射的硼硅酸鹽玻璃材質(zhì)。塑料容器材質(zhì)輕、不易破碎、制作方便, 廣泛使用。一般為聚丙烯、聚碳酸酯材料的培養(yǎng)容器。(二)金屬用具1、鑷子 植物組織解剖用小的尖頭鑷子, 分株轉(zhuǎn)移繁殖轉(zhuǎn)接用槍型鑷子, 16-22cm 長(zhǎng)2、剪刀 不銹鋼醫(yī)用彎頭剪,做取材和切段轉(zhuǎn)移繁殖, 14-22cm。3、解剖刀 組織切段,多用短柄可換刀片的醫(yī)用不銹鋼解剖刀。4、其他用具 接種鏟、接種針在花藥培養(yǎng)、花粉培養(yǎng)中有用。(三)塑料用具 各種
15、封口膜、蓋、塑料盤及其它實(shí)驗(yàn)用具。項(xiàng)目單價(jià)數(shù)目?jī)r(jià)格中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)180059000邊臺(tái)1800712600儲(chǔ)物柜800129600通風(fēng)櫥300013000超凈工作臺(tái)3550621300咼壓蒸汽火菌鍋3900311700冰箱300039000干熱滅菌箱253012530組培架12003036000接種器械火菌器4001400空調(diào)22001022000超純水機(jī)290012900搖床830018300紫外燈管538424pH計(jì)1382276電子分析天平200024000天平2483744酒精燈1510150實(shí)驗(yàn)室凳子100121200離心機(jī)248012480磁力攪拌器1483444顯微鏡3982796橡膠手套2810280一次性口罩2010200實(shí)驗(yàn)服5010500接種器材2010200分光光度計(jì)48002960
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