抗原抗體反應(yīng)與免疫化學(xué)

1、多塞多塞(1916) 法國(guó)免疫學(xué)家、醫(yī)學(xué)家法國(guó)免疫學(xué)家、醫(yī)學(xué)家 1965年發(fā)現(xiàn)人類的白細(xì)胞表面抗原年發(fā)現(xiàn)人類的白細(xì)胞表面抗原(HLA) 系統(tǒng)，此發(fā)現(xiàn)在系統(tǒng)，此發(fā)現(xiàn)在 輸血和組織器官移植中有重要意義，于輸血和組織器官移植中有重要意義，于1980年獲諾貝爾獎(jiǎng)。年獲諾貝爾獎(jiǎng)。 利根川進(jìn)利根川進(jìn)(1939) 日本分子生物學(xué)家日本分子生物學(xué)家 1976年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，80年代初揭示了年代初揭示了 抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病 所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)。于所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)

2、。于1987年獲諾貝爾獎(jiǎng)。年獲諾貝爾獎(jiǎng)。 杰尼杰尼(19111994)丹麥免疫學(xué)家丹麥免疫學(xué)家 50至至70年代相繼提出了年代相繼提出了 抗體形成的抗體形成的“天然天然”選擇學(xué)說、抗體多樣性發(fā)生學(xué)說和免疫系選擇學(xué)說、抗體多樣性發(fā)生學(xué)說和免疫系 統(tǒng)統(tǒng) 的網(wǎng)絡(luò)學(xué)說，由此建立了細(xì)胞免疫學(xué)理論。于的網(wǎng)絡(luò)學(xué)說，由此建立了細(xì)胞免疫學(xué)理論。于1984年獲諾年獲諾 貝爾獎(jiǎng)。他被稱為是貝爾獎(jiǎng)。他被稱為是“現(xiàn)代免疫學(xué)之父現(xiàn)代免疫學(xué)之父”。 2.1抗原的免疫原性與分子基礎(chǔ)抗原的免疫原性與分子基礎(chǔ) 2.1.1抗原及其免疫原性基礎(chǔ)抗原及其免疫原性基礎(chǔ) n抗原概念：指能刺激機(jī)體免疫誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與抗原概念：指能刺激機(jī)

3、體免疫誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與 應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物 質(zhì)。質(zhì)。 n免疫性能：完全抗原和半抗原免疫性能：完全抗原和半抗原 n免疫原性和免疫反應(yīng)性免疫原性和免疫反應(yīng)性 n抗原產(chǎn)生作用的因素：免疫原性是抗原最重要的性抗原產(chǎn)生作用的因素：免疫原性是抗原最重要的性 質(zhì)，免疫原性取決于三個(gè)因素：抗原性質(zhì)、宿主的反質(zhì)，免疫原性取決于三個(gè)因素：抗原性質(zhì)、宿主的反 應(yīng)性和免疫方式。應(yīng)性和免疫方式。 n宿主的反應(yīng)性宿主的反應(yīng)性 n免疫方式免疫方式 n抗原性質(zhì)？抗原性質(zhì)？ 抗原性質(zhì)：抗原性質(zhì)： n異物性：分子量大?。夯瘜W(xué)結(jié)構(gòu)：異物性：分子量大?。夯?/p>

4、學(xué)結(jié)構(gòu)： 抗原特異性基礎(chǔ)抗原特異性基礎(chǔ) n半抗原及其應(yīng)用（藥物殘留檢測(cè)）半抗原及其應(yīng)用（藥物殘留檢測(cè)） n半抗原半抗原-載體效應(yīng)：載體不僅賦予半抗原以免疫原性，載體效應(yīng)：載體不僅賦予半抗原以免疫原性， 還與半抗原免疫應(yīng)答的記憶性密切相關(guān)。還與半抗原免疫應(yīng)答的記憶性密切相關(guān)。 天然抗原的表位天然抗原的表位 n抗原表位：也稱抗原決定簇，表位是抗原分子抗原表位：也稱抗原決定簇，表位是抗原分子 表面或者其他部位的具有一定組成和結(jié)構(gòu)的特表面或者其他部位的具有一定組成和結(jié)構(gòu)的特 殊化學(xué)基團(tuán)。蛋白質(zhì)抗原有幾個(gè)氨基酸殘基組殊化學(xué)基團(tuán)。蛋白質(zhì)抗原有幾個(gè)氨基酸殘基組 成；糖類抗原有單糖殘基組成的特殊結(jié)構(gòu)。成；糖類

5、抗原有單糖殘基組成的特殊結(jié)構(gòu)。 n順序表位和構(gòu)象表位。順序表位和構(gòu)象表位。 表位的數(shù)目和定位表位的數(shù)目和定位 n數(shù)目：用飽和情況下能夠結(jié)合多少抗體分子來數(shù)目：用飽和情況下能夠結(jié)合多少抗體分子來 測(cè)定，一般情況下，表位數(shù)目與抗原分子量呈測(cè)定，一般情況下，表位數(shù)目與抗原分子量呈 正相關(guān)。甲狀腺球蛋白的分子量正相關(guān)。甲狀腺球蛋白的分子量700kD，大約，大約 有有40個(gè)表位。個(gè)表位。 n顯性表位：多個(gè)抗原表位中起主要作用，是宿顯性表位：多個(gè)抗原表位中起主要作用，是宿 主產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，這種表位稱之為顯主產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，這種表位稱之為顯 性表位，這種現(xiàn)象稱之為免疫顯性。性表位，這種現(xiàn)象稱之

6、為免疫顯性。 共同表位與交叉反應(yīng)共同表位與交叉反應(yīng) n單純抗原：一個(gè)表位 n共同抗原 n類屬抗原 n異嗜性抗原 n交叉反應(yīng)：由某一抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，也可 以與其共同抗原結(jié)合，發(fā)生特異性免疫反應(yīng)， 這種現(xiàn)象稱之為交叉反應(yīng)。 表位的細(xì)胞識(shí)別性表位的細(xì)胞識(shí)別性 nB細(xì)胞表位：供細(xì)胞表位：供B細(xì)胞識(shí)別誘導(dǎo)抗體應(yīng)答，而細(xì)胞識(shí)別誘導(dǎo)抗體應(yīng)答，而T細(xì)胞不細(xì)胞不 能識(shí)別的表位能識(shí)別的表位 nT細(xì)胞表位：細(xì)胞表位： 抗原的類型 n依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（T細(xì)細(xì) 胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原 n與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗

7、原、與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗原、 自身抗原。自身抗原。 n化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原 等。等。 2.2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)及特征免疫球蛋白結(jié)構(gòu)及特征 n概念： 一組具有抗體活性或抗體結(jié)構(gòu)的 球蛋白。由漿細(xì)胞產(chǎn)生，存在于血液和 其他體液（組織液和外分泌液）中。 Ig的基本結(jié)構(gòu)：Y字形。 一一IgG n IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白類型，占人血清是血清中含量最高的免疫球蛋白類型，占人血清 免疫球蛋白總量的免疫球蛋白總量的80%。 n IgG為單體為單體，IgG是主要的抗感染抗體，大多數(shù)抗菌是主要的抗感染抗體，大多數(shù)抗菌 性、抗病毒

8、性、抗毒素抗體都屬于性、抗病毒性、抗毒素抗體都屬于IgG類抗體。類抗體。 n 不少自身抗體如抗甲狀腺球蛋白抗體、系統(tǒng)性紅斑狼不少自身抗體如抗甲狀腺球蛋白抗體、系統(tǒng)性紅斑狼 瘡瘡(systemic lupus erythematosis, SLE)和引起和引起、 型超敏反應(yīng)的抗體也都屬于型超敏反應(yīng)的抗體也都屬于IgG類抗體。類抗體。IgG能通能通 過胎盤進(jìn)入嬰兒體內(nèi)，是新生兒抗感染的重要因素。過胎盤進(jìn)入嬰兒體內(nèi)，是新生兒抗感染的重要因素。 二二IgM IgM由由5個(gè)單體的個(gè)單體的IgM通過通過J鏈連接而成，鏈連接而成，是分是分 子量最大的免疫球蛋白，不能穿過血管壁。子量最大的免疫球蛋白，不能穿過

9、血管壁。 IgM是機(jī)體最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，在胚胎發(fā)是機(jī)體最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，在胚胎發(fā) 育晚期的胎兒就有能力合成育晚期的胎兒就有能力合成IgM，主要在脾臟，主要在脾臟 合成合成。IgM主要分布于血液里，占人血清免疫主要分布于血液里，占人血清免疫 球蛋白總量的球蛋白總量的10%左右。左右。 三三IgA IgA占人血清免疫球蛋白總量的占人血清免疫球蛋白總量的10%15%，具有，具有 單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體單體IgA主要主要 存在于血清之中，而分泌型二聚體存在于血清之中，而分泌型二聚體IgA(SIgA)主要存主要存 在于外分泌液中，在于外分泌液中，

10、SIgA是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗 體，主要分布于初乳、唾液、呼吸道分泌液、胃腸液、體，主要分布于初乳、唾液、呼吸道分泌液、胃腸液、 泌尿生殖道分泌液中。泌尿生殖道分泌液中。SIgA能與相應(yīng)的病原微生物結(jié)能與相應(yīng)的病原微生物結(jié) 合，抑制病毒感染和細(xì)菌侵入，尤其對(duì)于防御流感病合，抑制病毒感染和細(xì)菌侵入，尤其對(duì)于防御流感病 毒，呼腸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、沙門氏菌、霍亂弧毒，呼腸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、沙門氏菌、霍亂弧 菌、淋病雙球菌等的感染發(fā)揮重要作用。菌、淋病雙球菌等的感染發(fā)揮重要作用。嬰兒可從初嬰兒可從初 乳中獲得乳中獲得SIgA，4-6個(gè)月后開始自身合成個(gè)月后開始自身

11、合成IgA。 四四 IgE IgE為單體，在人血清中含量極低，主要由鼻咽部、為單體，在人血清中含量極低，主要由鼻咽部、 扁桃腺、支氣管、胃腸道等處粘膜固有層的漿細(xì)胞合扁桃腺、支氣管、胃腸道等處粘膜固有層的漿細(xì)胞合 成與分泌。當(dāng)寄生蟲感染，如蠕蟲、血吸蟲和旋毛蟲成與分泌。當(dāng)寄生蟲感染，如蠕蟲、血吸蟲和旋毛蟲 等，真菌感染，如曲霉菌、白色念珠菌等可誘發(fā)機(jī)體等，真菌感染，如曲霉菌、白色念珠菌等可誘發(fā)機(jī)體 產(chǎn)生大量的產(chǎn)生大量的IgE。阿米巴痢疾和阿米巴肝膿腫時(shí)也能。阿米巴痢疾和阿米巴肝膿腫時(shí)也能 引發(fā)產(chǎn)生抗阿米巴的引發(fā)產(chǎn)生抗阿米巴的IgE抗體，但原蟲感染一般不引抗體，但原蟲感染一般不引 起起IgE分泌

12、量增加分泌量增加。IgE能介導(dǎo)速發(fā)型超敏反應(yīng)，如哮能介導(dǎo)速發(fā)型超敏反應(yīng)，如哮 喘、蕁麻疹、過敏性休克、枯草熱等。還有，花粉敏喘、蕁麻疹、過敏性休克、枯草熱等。還有，花粉敏 感者在花粉季節(jié)，機(jī)體內(nèi)感者在花粉季節(jié)，機(jī)體內(nèi)IgE含量升高。含量升高。 五五 IgD IgD在人血清含量中極低，不穩(wěn)定，容易被胰在人血清含量中極低，不穩(wěn)定，容易被胰 蛋白酶降解蛋白酶降解。IgD的功能不清楚，的功能不清楚，mIgD是是B 細(xì)胞成熟的重要標(biāo)志。在細(xì)胞成熟的重要標(biāo)志。在B細(xì)胞分化過程中，細(xì)胞分化過程中， 先出現(xiàn)先出現(xiàn)mIgM，后出現(xiàn)，后出現(xiàn)mIgD，當(dāng)當(dāng)mIgM和和 mIgD同時(shí)存在時(shí)，標(biāo)志著同時(shí)存在時(shí)，標(biāo)志著B

13、細(xì)胞成熟，并且細(xì)胞成熟，并且 容易被抗原激活容易被抗原激活。 mIgM 和和mIgD 是是B細(xì)胞細(xì)胞 抗原受體?？乖荏w。 免疫學(xué)反應(yīng)舉例免疫學(xué)反應(yīng)舉例 n輸血輸血 n根據(jù)人類紅細(xì)胞表面所含有的 A 、 B 抗原的不同，將 人類血型分為 A 、 B 、 AB 和 O 四種血型。 A 型和 B 型紅細(xì)胞上分別有 A 抗原和 B 抗原； AB 型紅細(xì)胞上 有 A 、 B 兩種抗原； O 型紅細(xì)胞上不含 A 、 B 抗原， 但含有 A 、 B 抗原的前體物質(zhì) H 抗原，如圖 2-3 所示。同一人血清中不含與本人血清抗原相應(yīng)的抗體。 A 血型人血清中含有抗 B ， B 血型人血清中含有抗 A ， AB

14、 血型人血清中既無抗 A 又無抗 B ， O 血型人血清 中既有抗 A 又有抗 B 。 2.3免疫學(xué)反應(yīng)舉例 一、體外免疫學(xué)檢測(cè)一、體外免疫學(xué)檢測(cè) （一）體液免疫檢測(cè)（血清學(xué)反應(yīng)） 1、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)： 特異性 可逆性 比例性 n特異性特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間 結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。這種高度的特異性在傳染病的結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。這種高度的特異性在傳染病的 診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的 發(fā)展進(jìn)步，還將在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到更加深入和發(fā)展進(jìn)步，還將在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到更

15、加深入和 廣泛的應(yīng)用，比如腫瘤的診斷和特異性治療等。廣泛的應(yīng)用，比如腫瘤的診斷和特異性治療等。 n比例性比例性是指抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量 比關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)可見反應(yīng)， 在抗原抗體比例相當(dāng)或抗原稍過剩的情況下，反應(yīng)最 徹底，形成的免疫復(fù)合物沉淀最多、最大。而當(dāng)抗原 抗體比例超過此范圍時(shí)，反應(yīng)速度和沉淀物量都會(huì)迅 速降低甚至不出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)。 n可逆性可逆性是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后，在一是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后，在一 定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。 由于抗原抗體反應(yīng)是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合，由于抗原抗體反

16、應(yīng)是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合， 所形成的復(fù)合物并不牢固，可以隨時(shí)解離，解所形成的復(fù)合物并不牢固，可以隨時(shí)解離，解 離后的抗原抗體仍保持原來的理化特征和生物離后的抗原抗體仍保持原來的理化特征和生物 學(xué)活性。學(xué)活性。 2.3免疫學(xué)反應(yīng)舉例 一、體外免疫學(xué)檢測(cè) 1、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)： 抗體過剩比例適當(dāng)抗原過剩 抗原抗體的比例與其形成免疫復(fù)合物大小的關(guān)系 一、體外免疫學(xué)檢測(cè) 常見的體液免疫檢測(cè)法： （1）凝集反應(yīng)： 間接凝集和間接凝集抑制試驗(yàn) n凝集反應(yīng)：凝集反應(yīng)：顆粒性抗原顆粒性抗原(如細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的如細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的 乳膠顆粒乳膠顆粒)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下可形成凝

17、集團(tuán)塊的現(xiàn)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下可形成凝集團(tuán)塊的現(xiàn) 象。象。 n直接凝集反應(yīng)：直接凝集反應(yīng)： 顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng) 抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法 是一種定性試驗(yàn)方法?？捎靡阎贵w來檢測(cè)未知抗原。若鑒定新是一種定性試驗(yàn)方法?？捎靡阎贵w來檢測(cè)未知抗原。若鑒定新 分離的菌種時(shí)，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與分離的菌種時(shí)，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與 其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽(yáng)性反應(yīng)。其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼

18、可見的凝集現(xiàn)象，為陽(yáng)性反應(yīng)。 n間接凝集反應(yīng)：間接凝集反應(yīng)： 將可溶性抗原（或抗體）先吸附于將可溶性抗原（或抗體）先吸附于 一種與免疫無關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面，一種與免疫無關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面， 然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用。然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用。 （2）沉淀反應(yīng)： 單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) n單向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：一種常用的定量檢測(cè)抗原的一種常用的定量檢測(cè)抗原的 方法。將適量抗體與瓊脂混勻，澆注成板，凝固后，方法。將適量抗體與瓊脂混勻，澆注成板，凝固后， 在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就會(huì)向孔的四周擴(kuò)在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就會(huì)向孔的四周擴(kuò) 散，邊擴(kuò)散

19、邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。一定時(shí)間后，在散，邊擴(kuò)散邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。一定時(shí)間后，在 兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗 原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成 標(biāo)準(zhǔn)曲線，則從曲線中可求出標(biāo)本中抗原的含量。本標(biāo)準(zhǔn)曲線，則從曲線中可求出標(biāo)本中抗原的含量。本 試驗(yàn)主要用于檢測(cè)標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各試驗(yàn)主要用于檢測(cè)標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各 種補(bǔ)體成分的含量，敏感性很高。種補(bǔ)體成分的含量，敏感性很高。 （2）沉淀反應(yīng)： 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) n雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：常用

20、于定性檢測(cè)，也可用于半定量常用于定性檢測(cè)，也可用于半定量 檢測(cè)。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內(nèi)，讓檢測(cè)。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內(nèi)，讓 它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在最適當(dāng)比例處相遇時(shí)，即形成一它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在最適當(dāng)比例處相遇時(shí)，即形成一 條清晰的沉淀線。根據(jù)有否出現(xiàn)沉淀線，可用已知的抗體鑒定未條清晰的沉淀線。根據(jù)有否出現(xiàn)沉淀線，可用已知的抗體鑒定未 知的抗原，或用已知的抗原鑒定未知的抗體。知的抗原，或用已知的抗原鑒定未知的抗體。 n臨床常用本方法檢查原發(fā)性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原臨床常用本方法檢查原發(fā)性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原 發(fā)

21、性肝癌的早期輔助診斷發(fā)性肝癌的早期輔助診斷。甲種胎兒蛋白（甲種胎兒蛋白（-Fetal protein, AFP），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第9周才周才 出現(xiàn)此種蛋白，出現(xiàn)此種蛋白，1319周達(dá)高峰，到周達(dá)高峰，到21周后逐漸下降，胎兒出周后逐漸下降，胎兒出 生后該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗(yàn)方法檢查不出，而肝生后該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗(yàn)方法檢查不出，而肝 癌病人的血清檢出有此種蛋白。癌病人的血清檢出有此種蛋白。 （2）沉淀反應(yīng)： 對(duì)流免疫電泳 - + n對(duì)流免疫電泳：對(duì)流免疫電泳：即將抗原和抗體在瓊脂凝膠孔中即將抗原和

22、抗體在瓊脂凝膠孔中 電泳，帶負(fù)電荷的抗原向正極運(yùn)動(dòng)，帶正電荷的抗體電泳，帶負(fù)電荷的抗原向正極運(yùn)動(dòng)，帶正電荷的抗體 向負(fù)極運(yùn)動(dòng)，二者在瓊脂凝膠中相互作用而形成沉淀向負(fù)極運(yùn)動(dòng)，二者在瓊脂凝膠中相互作用而形成沉淀 線。線。 （3）補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)： 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng) 一、體外免疫學(xué)檢測(cè) 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫熒光技術(shù) 免疫熒光直接法免疫熒光間接法 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫酶技術(shù) 1、包被抗體 洗 2、加抗原 洗 3、加酶標(biāo)抗體 洗 4、加底物顯色 1、包被抗原 洗 2、加抗體 洗 3、加酶標(biāo)抗 球蛋白 洗 4、加底物顯色 ELISA雙抗體夾心法ELISA間接法 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫標(biāo)記技術(shù)：放射免疫測(cè)定法（放射免疫測(cè)定

23、法（RIARIA） 將放射性檢測(cè)高靈敏度與抗原將放射性檢測(cè)高靈敏度與抗原-抗體反應(yīng)高特異性相結(jié)合、抗體反應(yīng)高特異性相結(jié)合、 對(duì)抗原對(duì)抗原(激素、藥物等激素、藥物等)進(jìn)行測(cè)定的技術(shù)。即利用標(biāo)記物與非進(jìn)行測(cè)定的技術(shù)。即利用標(biāo)記物與非 標(biāo)記物對(duì)抗體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用，通過比較未標(biāo)記的未知量標(biāo)記物對(duì)抗體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用，通過比較未標(biāo)記的未知量 抗原及已知量標(biāo)準(zhǔn)抗原，分別對(duì)放射性標(biāo)記抗原與特定抗抗原及已知量標(biāo)準(zhǔn)抗原，分別對(duì)放射性標(biāo)記抗原與特定抗 體結(jié)合的抑制效應(yīng)，可得出未知抗原的量。體結(jié)合的抑制效應(yīng)，可得出未知抗原的量。 n膠體金是由氯金酸膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞在還原劑

24、如白磷、抗壞血酸、枸櫞 酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電 作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于 靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金標(biāo)金標(biāo)記，實(shí)記，實(shí) 質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。 n免疫金標(biāo)記技術(shù)免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用主要利用 了金顆粒具有

25、高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡 下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)， 肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫 檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為 免疫金銀染色。免疫金銀染色。 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫標(biāo)記技術(shù)：膠體金免疫技術(shù)膠體金免疫技術(shù) 二、體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè)二、體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè) （一）體液免疫檢測(cè) 1 1、I

26、 I型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn) 用常見變應(yīng)原作皮內(nèi)注射或劃痕后，在 20分鐘內(nèi)引起紅斑及丘疹。如超過1cm或無 紅腫但注射處有癢感，或全身有不適反應(yīng) 者均為陽(yáng)性，反之為陰性。 2、中和反應(yīng)皮膚試驗(yàn)、中和反應(yīng)皮膚試驗(yàn) 將微量外毒素注射于受試者前臂屈側(cè)皮內(nèi)，24-48小 時(shí)局部出現(xiàn)皮膚紅腫者為陽(yáng)性反應(yīng)，表示無免疫力。 陰性反應(yīng)為有免疫力。 n錫克實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)白喉易感性：錫克實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)白喉易感性：注射一定量的白喉毒素 于受試者前臂屈側(cè)皮內(nèi)。受試者如無免疫力，2448 小時(shí)，局部皮膚出現(xiàn)紅腫，直徑在12厘米者為陽(yáng)性 反應(yīng)。相反，受試者如有免疫力，其血清中含有足量 的抗毒素抗體，能中和注入的毒素

27、，局部不出現(xiàn)紅腫， 為陰性反應(yīng)。此試驗(yàn)除用來測(cè)定機(jī)體對(duì)白喉的易感性 以外，還可檢測(cè)白喉預(yù)防接種后是否產(chǎn)生免疫力。 二、體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè) （二）細(xì)胞免疫檢測(cè) 以特異性抗原或有絲分裂原注入皮內(nèi)，剌激體內(nèi) 致敏T細(xì)胞分化增殖，釋放淋巴因子，引起局部皮膚的IV 型超敏反應(yīng)。 1、特異性抗原皮膚試驗(yàn)：在受試者前臂內(nèi)側(cè)皮 內(nèi)注入少量可溶性抗原，24-48小時(shí)后，觀察局部皮膚紅 腫硬結(jié)的大小。大于1cm即為陽(yáng)性，表示有細(xì)胞免疫力。 2、植物血凝素（PHA）皮試：將PHA注射于受試 者前臂屈側(cè)皮內(nèi)，6-12小時(shí)后局部出現(xiàn)紅斑硬結(jié)，24-48 小時(shí)達(dá)高峰，即為陽(yáng)性反應(yīng)，常用于檢測(cè)細(xì)胞免疫水平。 利根川進(jìn)利根川進(jìn)(

28、1939) 日本分子生物學(xué)家日本分子生物學(xué)家 1976年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，80年代初揭示了年代初揭示了 抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病 所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)。于所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)。于1987年獲諾貝爾獎(jiǎng)。年獲諾貝爾獎(jiǎng)。 抗原的類型 n依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（T細(xì)細(xì) 胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原 n與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗原、與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗原、 自身抗原。自身抗原。 n化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原 等。等。 三三IgA IgA占人血清免疫球蛋白總量的占人血清免疫球蛋白總量的10%15%，具有，具有 單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體單體IgA主要主要 存在于血清之中，而分泌型二聚體存在于血清之中，而分泌型二聚體IgA(SIgA)主要存主要存 在于外分泌液中，在于外分泌液中，SIgA是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗 體，主要分布于初