老鷹茶總黃酮降血糖作用的實驗研究

1、老鷹茶總黃酮降血糖作用的實驗研究中國中醫(yī)藥科技2oo8年3月第15卷第2期mar.2o08vo1.15no.2?ll9?老鷹茶總黃酮降血糖作用的實驗研究*呂雄文李俊鄒宇宏金涌程文明章秋黃艷張駿艷(安徽醫(yī)科大學藥學院?合肥230032)摘要目的:觀察老鷹茶總黃酮(比)的降血糖作用,并探討其作用機制.方法:tflc連續(xù)5天灌胃正常小鼠,觀察其降血糖作用.采用腎上腺素腹腔注射,四氧嘧啶尾靜脈注射和鏈脲佐茵素腹腔注射制備糖尿病小鼠和大鼠模型,觀察tflc的降糖作用以及對血清胰島素(ins)和血脂的影響.結果:tflc可降低正常小鼠的血糖值;顯著對抗由腎上腺素引起的小鼠血糖升高,明顯降低四氧嘧啶糖尿病小

2、鼠血糖,并升高血清ins水平,顯著降低鏈脲佐茵素糖尿病大鼠模型的血糖和血清tc,tg,ldlc含量,同時升高血清hdlc含量.結論:tflc具有明顯的降血糖作用,其機制與其促進ins分泌和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂有關.主題詞糖尿病/中醫(yī)藥療法老鷹茶總黃酮/治療應用老鷹茶總黃酮/藥理學血糖/藥物作用大鼠小鼠老鷹茶(l/tsea(forearm),又稱豹皮樟,屬樟科,木姜子屬,俗稱”白茶”,在安徽皖南山區(qū)資源豐富,民間飲用歷史悠久.其味芳香,性甘涼,具有清涼止渴,解毒消腫,醒神益智,明目健胃,順氣解表,散瘀止痛等功效ll0j,但其有效部位在治療糖尿病方面的研究目前尚未見報道.為了認識和了解這一野生植物資源

3、,以便更好的開發(fā)利用,本實驗主要觀察了老鷹茶總黃酮(totalfhvonoidsof/seacoreana,1fljc)對糖尿病小鼠和大鼠模型的降血糖作用,并探討其部分作用機制.1實驗材料1.1啊制備老鷹茶采自安徽省寧國縣,陰干備用.用12倍量(ww,溶劑體積,藥材干重)80%乙醇回流提取3次,每次2小時,提取液濃縮,干燥,所得醇提物加適量水溶解,調(diào)ph=2,先用石油醚脫色,再用正丁醇萃取,正丁醇萃取部分精制得黃酮部分(i),余液上大孔吸附樹脂柱,先用水洗脫去除水溶性雜質(zhì),再用9o%乙醇洗脫得黃酮部分(),合并兩部分得到tflc.總黃酮得率在3%以上,純度不低于55%.1.2動物普通級昆明種小

4、鼠,雌雄各半,體重1822g;普通級spaguedawlay(sd)大鼠,雄性,體重200220g;均由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供.實驗中未注明時均指實驗前禁食2小時.1.3藥物與試劑格列本脲:天津太平洋制藥有限公司,批號020907.苯乙雙胍:南通制藥總廠,批號011017.鹽酸二甲雙胍片:中美上海施貴寶制藥有限公司,批號0303078.鹽酸腎上腺素注射渡上海禾豐制藥有限公司,批號0212027.四氧嘧啶(一):sigma公司產(chǎn)品,臨用前用生理鹽水配制成1%溶液.鏈脲佐菌素(toc/n,stz):sigma公司,臨用前用ph4.5的0.1mol/l檸檬酸緩沖液配制成1%溶安徽省教育廳自然科

5、學研究項目no.2oojl9s安徽省高等學校青年教師科研資助計劃自然科學項目no.2004jq164安徽醫(yī)科大學博士科研經(jīng)費資助計劃項目no.)(120d44液.葡萄糖測定試劑盒:上海榮升生物技術有限公司產(chǎn)品.胰島素放射免疫分析測定盒:北京北方生物技術研究所.tg,ri,ldl,hdl測定試劑盒:上?？迫A東菱診斷用品有限公司產(chǎn)品.1.4儀器fa2004a電子天平:上海精天天平廠制造.dl一5m低速冷凍離心機:長沙湘儀離心機儀器有限公司產(chǎn)品.722紫外分光光度計:上海分析儀器廠制造.muhiskanmk3酶標儀:上海雷勃分析儀器有限公司產(chǎn)品.cc一911.y放射免疫計數(shù)器:中科大科技實業(yè)總公司中

6、加光電儀器公司產(chǎn)品.2實驗方法2,1正常小鼠的分組及給藥正常小鼠50只隨機分為對照組,tfi.c給藥組(100,300,900mg?d)及格列本脲給藥組(50mg/?d).對照組給予等體積生理鹽水(2olll,kg?d),均為灌胃給藥,每天1次,連續(xù)5天,于末次給藥后3小時取血測血糖含量.2.2腎上腺素高血糖模型的建立,分組及給藥正常小鼠6o只隨機分為正常對照組,高血糖模型組,tfi.e給藥組(100,300,900z/l(g?d)及格列本脲給藥(50mg/kg?do正常對照組及高血糖模型組給予等量生理鹽水,均為灌胃給藥,每天1次,連續(xù)5天,于末次給藥后1小時,正常對照組腹腔注射等體積生理鹽水

7、,其余5組均腹腔注射腎上腺素30(0?一,誘導腎上腺素性高血糖模型,于注射后30分鐘取血測血糖含量.2.3四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的建立,分紐及給藥正常小鼠6o只,除10只正常對照組外,其余均尾靜脈注射1%四氧嘧啶生理鹽水(1oomg/kg)制備糖尿病模型,72小時后(禁食12小時)尾靜脈采血測定空腹血糖值,血糖值高于16.7mmol/l者納人實驗,根據(jù)血糖水平將高血糖小鼠分為5組,灌胃給藥(tnc100,300,9tg/kg?d一,苯l,/gloom.d)或等體積生理鹽水,每天1次,連續(xù)5天,于末次給藥前?120?中國中醫(yī)藥科技2008年3月第15卷第2期mar.2oo8vo1.15no.2禁

8、食16小時,末次給藥后1小時取血測血糖及血清胰島素含量.2.4鏈脲佐菌素糖尿病大鼠模型的建立,分組及給藥sd大鼠禁食12小時后腹腔注射鏈脲佐菌素40ms/ks,72小時后(禁食12小時)尾靜脈采血測定空腹血糖值,血糖值高于16.7rural?l者納入實驗,根據(jù)血糖水平將高血糖大鼠分為糖尿病模型組,tflc給藥組(100,200,400ms/ks?d)及二甲雙胍給藥h(200mg/kg?d),每組1o只.另取1o只同批次正常大鼠作為正常對照組.正常對照組及糖尿病模型組給予等體積生理鹽水,均為灌胃給藥,每天1次,連續(xù)14天,于末次給藥后3o分鐘,取血測定血糖及血脂.2.5測定方法血糖測定:采用葡萄

9、糖氧化酶法.血清tc,tg測定:采用氧化酶法.血清ldlc,hdlc測定:采用直接清除法.血清胰島素測定:采用放射免疫法.2.6統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)用均數(shù)標準差(s)表示,采用spss11.0進行studentt檢驗.3實驗結果3.1tfec對正常小鼠血糖的影響見表1.表1tflc對正常小鼠血糖的影響(s)與空白組比較*p<o.05,*p<o.013.2tfec對腎上腺素性高血糖小鼠血糖的影響見表2.表2tflc對腎上腺素性高血糖小鼠血糖的影響(s)與正常組比較p<o.05,p<o.01;與模型組比較*p<0.05.*p<0.013.3tflc對四氧嘧啶糖尿病小鼠

10、血糖及血清胰島素水平的影響見表3.表3tflc對四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖及血清胰島素水平的影響(s)o.曬與正常組比較p<0.05,p<0.01;與模型組比較p<3.4tflc對鏈脲佐茵素糖尿病大鼠血糖,血脂的影響見表4.表4tfi/2對鏈脲佐菌索糖尿病大鼠血糖及血脂的影響(s)刪n二與正常對照組比較p<o.05,p<o.01;與模型組比較*p<o.o54討論老鷹茶含有黃酮,苷類,有機酸,香豆素和鞣質(zhì)等成分,其中黃酮類是老鷹茶的主要成分,主要有山柰酚,山柰酚一3一opd一葡萄糖苷及槲皮素一3一opd一葡萄糖苷2.本實驗初步研究了tflc的降血糖作用及部分機理,

11、研究結果表明tflc能降低正常小鼠的血糖含量,提示其可通過刺激胰島b細胞分泌胰島素產(chǎn)生降糖作用.腎上腺素通過分解肝糖原使血糖升高】,而tfie降低腎上腺素性高血糖小鼠的血糖值,說明其可能具有抑制腎上腺素引起的肝糖原分解和促進肝糖原合成的作用,從而可減少血糖的來源,增加血糖的去路,明顯降低代謝異常導致的血糖升高.四氧嘧啶和鏈脲佐菌素均為胰島g細胞殺傷劑,可選擇性地損傷胰島b細胞,引起實驗性糖尿病.在糖尿病小鼠和大鼠模型中,tflc具有顯著的降糖作用,同時對四氧嘧啶糖尿病小鼠血清中胰島素的釋放也具有促進作用.提示其主要通過保護胰島p細胞或促進受損p細胞的修復以及促進胰島素分泌,增加血清胰島素含量而

12、達到降低血糖的目的.糖尿病是一種常見多發(fā)的代謝疾病,常伴有血脂的升高,而糖,脂代謝紊亂與糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展密切相關.因此降低血脂對于阻止或延緩并發(fā)癥,改善糖尿病患者的預后具有重大意義.本實驗采用小劑量鏈脲佐菌素制備糖尿病大鼠模型,成模2周已出現(xiàn)明顯的脂代謝紊亂,模型組的tc,tg,ldl均明顯高于正常對照組,而hdl水平顯著降低.與有關報道一致【7,經(jīng)tflc治療后tc,tg,ldl均顯著降低,hdl水平也顯著升高,說明tflc對糖尿病大鼠血脂紊亂具有一定的調(diào)節(jié)作用.綜上所述,tfec具有良好的降血糖活性,與陽性對照藥磺酰脲類和雙胍類均具有相似性.可能是通過直接刺激胰島b細胞釋放胰島素

13、,保護胰島p細胞或促進受損p細胞修復,抑制過多內(nèi)源性肝葡萄糖生成和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂等多種途徑發(fā)揮作用,其他可能有關的作用機制如增加胰島素敏感性,改善胰島素抵抗以及對2型糖尿病的降糖調(diào)脂作用等有待進一步研究.糖尿病治療的最終目標不僅是使血糖水平正?；?而且是從根本上糾正代謝紊亂,才能避免并發(fā)癥的發(fā)生,故迫切中國中醫(yī)藥科技2o08年3月第l5卷第2期mar.2o08vo1.15n0.2需要對糖尿病及高脂血癥等均有防治作用的藥物.1nf由于對糖尿病,脂質(zhì)代謝紊亂均具有較好的療效,因而具有開發(fā)成降血糖新藥的前景.本文的研究結果為開發(fā)和利用皖南山區(qū)老鷹茶提供了一定的科學依據(jù).參考文獻1郁建平,葉輝.老鷹

14、茶(豹皮樟)天然食用色素的初步研究.食品科學.2oo2,23(2):40.2郁建平,古練權.貴州老鷹茶的化學成分.植物資源與環(huán)境學報,2001,10(3):61.3孫紅,宋波,于德偉,等.消渴欣膠囊降血糖作用研究.中藥藥理與臨床,2o05,21(1):37.4s&udelskit.themechanism0falloxanandstreptootocinactioninecellsoftheratp1crt.phyolres,2001,50(6):537.5famjm,luill,cianflonek.diabetes,lipidsandadipocyteseeretagogues.b

15、iochemcellbiol,2o04,82(1):170.6郝賢,付雪艷.益氣養(yǎng)陰活血方對2型糖尿病胰島素抵抗及血脂的影響.中國中醫(yī)藥科技,2oo6,13(2):74.7劉瑩,朱東屏,徐向進,等.靈菊七提取物對糖尿病大鼠治療作用的實驗研究.解放軍藥學學報,2oo6,22(4):287.(收稿:2oo70412)hplc法測定宮瘤消膠囊中丹皮酚的含量陳大中宗嗚王智張瑞(黑龍江中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院?哈爾濱l50o4o黑龍江中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院?哈爾濱150001)1材料與試藥高效液相色譜儀(美國waters600e一2487),millenniuh產(chǎn)色譜工作站(美國waters),丹皮酚(中

16、國生物制品檢定所提供,編號:o78o一9704),甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純,水為蒸餾水.宮瘤消膠囊(牡丹皮,牡蠣,制香附,三棱,莪術等):黑龍江中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院制備提供.2方法與結果2.1色譜條件色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,日本島津shimpack色譜柱(4.6nra250n-al,5/an).流動相:甲醇一水(45:55);流速:1.0ml/min;柱溫:30;檢測波長:274nm.2.2對照品溶液的制備精密稱取對照品丹皮酚4.76mg,加甲醇適量使溶解,并轉移至50ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度.2.3供試品溶液制備取本品lo粒,傾出內(nèi)容物,研細,稱取粉末lg,精

17、密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,搖勻,稱定重量,超聲處理(300w,頻率5ol)30分鐘,放冷,再稱定重量.用甲醇補足減失重量,搖勻,濾過,精密量續(xù)濾液5ml,置10ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得.2.4標準曲線繪制分別精密吸取上述濃度的丹皮酚對照品溶液0.25051.0,1.5.2.0,2.5ml轉移至10ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度.分別精密吸取不同濃度的丹皮酚對照品溶液各20td,注入液相色譜儀,測定峰面積,計算標準曲線,得回歸方程:y=一251.29+2016737.33x(r=0.9997),結果表明,丹皮酚在0.04760.476ptg之間呈良好的

18、線性關系.2.5精密度試驗取官瘤消膠囊(批號:20070312)10粒,傾出內(nèi)容物,研細,取粉末1g,精密稱定,按2.3制備供試品溶液,連續(xù)測定6次,測得峰面積值,照上述色譜條件測定蜂面積,計算相對標準差rsd:1.33%.2.6穩(wěn)定性試驗精密吸取供試品溶液按2.1色譜條件,按設定時間每次間隔20分鐘連續(xù)測定6次,計算丹皮酚的峰面積積分值的相對標準差rsd=1.46%.供試品溶液在2小時之內(nèi)穩(wěn)定.2.7重現(xiàn)性試驗稱取同一批號宮瘤消膠囊(批號20070312)供試品6份,取粉末lg,精密稱定重量,照2.3制備供試品溶液和測定峰面積,計算平均含量及相對標準差rsd=1.19%,本方法重現(xiàn)性較好.2.8回收率試驗取本品官瘤消膠囊(批號20070312)10粒,傾出內(nèi)容物,研細,取