大連市科技計劃項目可行性報告

1、大連市科技計劃項目可行性報告一、申報單位情況1、基本情況：單位名稱：大連醫(yī)科大學地址：大連市旅順口區(qū)旅順南路西段9號注冊時間：1947-05-04注冊資金：21435.00萬元登記注冊類型：事業(yè)型研究單位2、研發(fā)能力：大連醫(yī)科大學現(xiàn)有國際科技合作基地1個，國家中醫(yī)藥管理局實驗室1個，遼寧省高校重大科技平臺1個，遼寧省轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究中心4個，遼寧省重點實驗室11個，遼寧省工程實驗室1個，遼寧省工程技術(shù)研究中心2個，遼寧（大連）實驗動物公共服務(wù)平臺1個，遼寧省高校重點實驗室6個，遼寧省衛(wèi)生發(fā)展研究中心1個，大連市重點實9個。2013年獲批各級各類科研課題278項，獲得資助經(jīng)費4250.77萬元。其中

2、遼寧省科技計劃項目19項、遼寧省教育廳課題22項、大連市科技計劃項目27項（指導性項目6項）。參與973計劃課題、國家科技支撐計劃課題等科研合作8項，到位經(jīng)費118.19萬元。獲2013年教育部高等學?？茖W研究優(yōu)秀成果獎(科學技術(shù))二等獎2項；2013年遼寧省政府科技進步獎13項，一等獎1項，二等獎5項，三等獎7項；2013年度中國中西醫(yī)結(jié)合學會科技二等獎1項。2012年大連市科學進步獎26項，一等獎8項，二等獎9項，三等獎9項。獲得發(fā)明專利5項，實用新型專利10項。本項目可依托的前期研究成果：近年來，我們研究了吸煙史，遺傳多態(tài)性和dna甲基化對小細胞肺癌的生存狀態(tài)、環(huán)境和遺傳因素的影響。我們

3、在美國白色人種中，發(fā)現(xiàn)了小細胞肺癌患者外周血的dna甲基化標本在小細胞肺癌病例和對照組之間的差異。我們用illumina公司微珠芯片測試了1505個cpg位點，用焦磷酸測序技術(shù)檢測并驗證的9個位點。在匹配的44例小細胞肺癌參照對中，去除那些在小細胞肺癌治療（化療或放療）中潛在的相關(guān)因素后，我們確定了52個獨立基因的62個cpg中顯著的不同點（虛假發(fā)現(xiàn)率0.05）。然后，我們在138個獨立的匹配病例對對照中，驗證了精心挑選的9個cpg位點（所有p值為0.0003）的甲基化的差異。確認的9個cpg位點在所有病例及其對照組的85.8中預測出的危險性高于對照組，兩者（在基因csf3r和ercc1）存在

4、顯著的統(tǒng)計學差異。我們的重復試驗結(jié)果顯示出應用大規(guī)模甲基化試驗獲取生物標志物的發(fā)現(xiàn)和有效的外周血中dna的可行性。本研究確定的cpg位點有著幫助預測和早期確診小細胞肺癌的巨大潛力。此外，我們還觀察到患者的存活與白細胞dna甲基化相關(guān)。總之，我們在小細胞肺癌的預后相關(guān)因素研究中，已經(jīng)積累了很好的工作基礎(chǔ)，通過量化患者外周血的dna甲基化水平，篩選與小細胞肺癌生物學行為相關(guān)的生物標記物，從而預測其療效，提供有益于預后的臨床試驗資料，揭示可驗證遺傳變異，并通過藥物基因組學和流行病學的方法改變環(huán)境因素、選擇最佳治療方案，準確預測小細胞肺癌患者的臨床病程和生存期等重要信息。已發(fā)表5篇sci文章，回國后繼

5、續(xù)小細胞肺癌防治方面研究，又有多篇文章發(fā)表，基于此，我們擬進一步在我國黃色人種中，與美方合作，同步對小細胞肺癌外周血dna進行全面分析，以獲取其他與小細胞肺癌防治相關(guān)的cpg位點，現(xiàn)已完成1000余例小細胞肺癌患者臨床資料收集，并以此為基礎(chǔ)建立了小細胞肺癌患者數(shù)據(jù)庫、標本庫，已采集小細胞肺癌患者及對照組血液標本400余例，已完成前期實驗，選定20個生物標志物，擬進行所有標本甲基化水平檢測。項目負責人及主要承擔人員簡介：陳駿，男，47歲，大連醫(yī)科大學附屬二院腫瘤內(nèi)科教授，主任醫(yī)師，腫瘤學博士，碩士研究生導師。1991年畢業(yè)于大連醫(yī)科大學臨床醫(yī)療系，留校從事腫瘤臨床工作至今。2009年博士畢業(yè)于中

6、國醫(yī)科大學腫瘤學系腫瘤內(nèi)科專業(yè)，2001年至2003年于北京中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院學習，2007年至2008年于美國mayo clinic醫(yī)院做訪問學者，進行肺癌流行病學研究（此課題為美國nih在研項目），并完成博士課題；與澳大利亞西澳大學（uwa, university of western australia）合作，進行乳腺癌、大腸癌流行病學研究，此課題獲得澳大利亞國家醫(yī)學衛(wèi)生研究理事會重點項目支助， 2012年獲澳大利亞政府奮進獎長江研究員獎學金，于2012年8月至10月在澳大利亞uwa進行腫瘤流行病學學習，并完成相關(guān)課題研究。目前主持遼寧省自然基金一項，大連市科技局計劃

7、項目一項，參與國家自然基金兩項，已在國內(nèi)外發(fā)表文章30余篇，其中sci文章6篇（累計影響因子25分以上），相關(guān)文章獲遼寧省自然科學學術(shù)成果一等獎一項、三等獎一項，大連市自然科學優(yōu)秀學術(shù)論文一等獎兩項?，F(xiàn)為中國抗癌協(xié)會臨床腫瘤學協(xié)作專業(yè)委員會會員，中國抗癌協(xié)會化療專業(yè)委員會青年委員，遼寧省抗癌協(xié)會化療專業(yè)委員會委員，大連市醫(yī)學會醫(yī)療事故鑒定專家，大連市醫(yī)學會高級職稱評審專家，中國微生態(tài)學雜志編委、中華臨床醫(yī)師雜志編委、中國醫(yī)藥科學雜志編委、教育部中國科技論文在線評審專家，德國腫瘤學官方雜志j cancer res clinic onc審稿人、美國著名雜志public library of sci

8、ence（plos one）及jto審稿人。楊平，女，54歲，美籍華人，博士后，現(xiàn)為美國mayo clinic流行病學教授，大連醫(yī)科大學客座教授。1984-1985獲美國john hopkins university 流行病學碩士；1985-1990獲john hopkins university 流行病學博士；1991-1992為美國賓夕法尼亞州fox-chase 癌癥中心博士后?，F(xiàn)為：美國癌癥研究協(xié)會、美國預防腫瘤學會、 國際肺癌研究協(xié)會、 美國流行病學會、流行病研究學會、 國際流行病協(xié)會、國際遺傳流行病學會委員或會員。為mayo clinic研究小組委員會、肺癌研究委員會、gcrc顧問委

9、員會、醫(yī)學遺傳學研究委員會成員。主要研究領(lǐng)域為：一般流行病學、遺傳、分子、藥理遺傳流行病學、 癌癥生存者生存質(zhì)量、醫(yī)療需要和社會心理評估。重點在肺癌遺傳流行病學：從病因、臨床治療和療效、短期和長期生存?，F(xiàn)有多項肺癌在研課題為nih支助項目（其中4項為95%支助）。已發(fā)表sci文章200余篇。為cancer、cancer research、clinical cancer research 等20多種權(quán)威雜志編委。3、經(jīng)濟財務(wù)狀況：注冊資金21435.00萬元。4、發(fā)展思路：小細胞肺癌患者外周血dna甲基化，與小細胞肺癌防治相關(guān)性研究，目前在世界范圍內(nèi)鮮有大樣本研究，多局限于動物實驗階段，美國ma

10、yo clinic醫(yī)院為全美最大的醫(yī)學中心，肺科的防治水平全美排名第一，楊平教授及其肺癌研究團隊在全美、乃至國際上享有很高聲譽，我們已有很好的合作基礎(chǔ)，近年來已合作發(fā)表十余篇高質(zhì)量學術(shù)論文，本項目需要美方楊平教授的技術(shù)支持與指導，我們將采取請進來、走出去的方式進行全方位合作，我們將邀請楊平教授來大連講學、給予技術(shù)支持和指導，同時，我們要派人到美國學習建模和測模等先進的技術(shù)與方法。本研究所采用技術(shù)均為行業(yè)認可的、國際上最先進技術(shù)，而以小細胞肺癌患者外周血脫氧核糖核酸甲基化檢測為基礎(chǔ)，建立小細胞肺癌患者防治模型，大連市尚未開展此項技術(shù)，但大連市為肺癌高發(fā)區(qū)，本項目完成后，其成果可以作為預防和監(jiān)測小

11、細胞肺癌治療效果和復發(fā)的新方法，提高預防發(fā)病及預測治療后復發(fā)時間和生存時間的準確性，并進而改善小細胞肺癌患者的預后，可廣泛應用于小細胞肺癌患者的防治工作中，具有很好的應用前景。二、項目基本情況1、項目概述。主要研究內(nèi)容： 在前期研究中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了美國白色人種小細胞肺癌患者，外周血dna甲基化與其防治具有相關(guān)性，基于此，首先我們要借助美方技術(shù)支持，借鑒美方小細胞肺癌防治建模、測模方法，合作研究我國黃色人種中，外周血白細胞dna甲基化與小細胞肺癌防治的相關(guān)性；在肺腺癌的靶向治療中，已經(jīng)明確了黃色人種與白色人種的顯著差異，黃色人種療效遠遠好于白色人種，本研究完成后，我們可以比較美國白色人種與中國

12、黃色人種，外周血白細胞dna甲基化與小細胞肺癌防治相關(guān)性方面，在統(tǒng)計學上有沒有顯著差異；最后，我們還可以發(fā)現(xiàn)小細胞肺癌患者中，外周血白細胞dna甲基化與戒煙狀態(tài)是否相關(guān)。技術(shù)水平及應用范圍：我們通過對小細胞肺癌患者及對照組，外周血dna甲基化水平進行全基因組檢測，首先確立基于血液的，與小細胞肺癌生存和復發(fā)相關(guān)的生物標志物；繼之開發(fā)和測試小細胞肺癌患者的生存和復發(fā)的多變量預測模型。本技術(shù)可以應用于小細胞肺癌的防治方面，為小細胞肺癌的防治提供一個既無創(chuàng)、又精準的新的防治手段。我市現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)、項目申報單位優(yōu)勢：對于人外周血dna甲基化與小細胞肺癌防治相關(guān)性研究，目前在世界范圍內(nèi)鮮有大樣本研究，多局

13、限于動物實驗階段，大連市尚未開展此項技術(shù)，但大連市為肺癌高發(fā)區(qū)，大連醫(yī)科大學兩所附屬醫(yī)院每年收治小細胞肺癌患者300-400例，大連醫(yī)科大學附屬二院腫瘤科為衛(wèi)生部腫瘤重點專科，中心實驗室及腫瘤研究所均有很好的科研條件，且與美方有多年合作基礎(chǔ)，可保證本項目的順利完成，形成了獨特的優(yōu)勢。本課題dna甲基化測定工作，將由大連醫(yī)科大學細胞生物學教研室的癌癥基因組學重點實驗室完成，該實驗室2004年和2006年被批準為遼寧省高校癌癥基因組學重點實驗室和遼寧省癌癥基因組學重點實驗室，2007年被遼寧省教育廳批準為“腫瘤的基礎(chǔ)與應用基礎(chǔ)研究創(chuàng)新團隊”，包括分子病理學實驗室、細胞培養(yǎng)室、dna室、rna室、蛋

14、白分析室、低溫操作室、生物信息分析室以及資料處理室，具備在組織、細胞、基因、乃至基因組水平系統(tǒng)地研究病變細胞的病理學、細胞生物學及分子遺傳學特點的實驗條件?，F(xiàn)主要從事以下研究：癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的研究；髓母細胞瘤生長、分化和凋亡的信號網(wǎng)絡(luò)及其調(diào)控；癌癥化療及其作用的分子機制；癌癥的基因組學和表觀遺傳學研究。在同行業(yè)中具有較高的科研水平和能力。本實驗設(shè)計及實施、完成過程中，將得到美國mayo clinic醫(yī)院楊平教授及其帶領(lǐng)的肺癌流行病學研究團隊的全程指導、技術(shù)支持及幫助，進一步保證了本課題的高質(zhì)量、高效率的完成。2、目的意義： 項目社會經(jīng)濟意義、相關(guān)領(lǐng)域國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀與趨勢、項目實施的必要

15、性：小細胞肺癌是肺癌的一大類型，占所有肺癌的13%。小細胞肺癌具有獨特的生物學行為，易復發(fā)、轉(zhuǎn)移快、生存期短。局限期和廣泛期小細胞肺癌患者的中位生存期分別為15至20個月和8至13個月，兩年生存率分別為20-40%和小于5%。目前，對于不能手術(shù)的小細胞肺癌的標準治療方案是化療和放療，但在相同的化療和/或放療治療中，血藥濃度、毒性反應在患者間卻有著很大差異。顯然，應該有一個理性的、需要考慮病人的基因和腫瘤特異性生物標志物的客觀評價標準。遺憾的是，目前與預后相關(guān)的生物標志物的基礎(chǔ)研究明顯滯后于臨床，遠遠不能滿足臨床工作需要。隨著整個人類基因組序列的完成，通過基因途徑進行癌癥研究，確定能夠早期診斷、

16、指導治療方案并判斷預后的分子標志物顯得尤為重要在一項中期實驗中，我們在小細胞肺癌患者外周血白細胞dna中，也發(fā)現(xiàn)了甲基化特征。同時發(fā)現(xiàn)某些標志物與小細胞肺癌患者的生存顯著相關(guān)。這個令人興奮的發(fā)現(xiàn)，是我們現(xiàn)在要對小細胞肺癌患者dna表觀遺傳信息進行全面分析的初衷。根據(jù)最初的數(shù)據(jù)，我們期望發(fā)現(xiàn)與小細胞肺癌預后有關(guān)的其它標志物。這些標志物應當獨立于傳統(tǒng)的血清標志物并且可能提供補充信息，從而促進對小細胞肺癌復發(fā)和生存的預測。因此，大樣本長期隨訪，才能使這些預后標志得到驗證。此外，大規(guī)?；蚪M分析和微陣列技術(shù)的應用，使越來越多的分子標志物被發(fā)現(xiàn)。確定生物標志物在預測小細胞肺癌生物學行為方面的作用，建立基

17、于生物標志物的生存和復發(fā)預測模型，使其量化性能特征和預測精度得以提高。這些模型可能有助于我們監(jiān)測和干預小細胞肺癌患者的復發(fā)，在提高生存率、改善預后等方面提供很有價值的信息，從而指導小細胞肺癌的個體化治療。首先我們要研究我國小細胞肺癌患者外周血白細胞dna甲基化與其防治的關(guān)系。這些模型可能會有助于監(jiān)測和干預小細胞肺癌患者的復發(fā)，在提高生存率等方面提供很有價值的信息?？梢灶A見，本研究還會產(chǎn)生如下的積極作用：在此建立的血清和外周血dna標志物，可用來檢測高危吸煙人群罹患小細胞肺癌的風險，實現(xiàn)小細胞肺癌的早期診斷、早期治療，進一步提高小細胞肺癌患者的生存期和生存質(zhì)量，從而改善小細胞肺癌患者的防治水平。

18、其次，我們可以比較中國黃色人種與美國白色人種小細胞肺癌患者外周血白細胞dna甲基化與預后相關(guān)性方面，在統(tǒng)計學上的差異性，我們將進行黃色人種與白色人種的比較。美國mayo clinic醫(yī)院楊平教授作為本課題主要參與人，將提供在美國同步完成的相關(guān)dna甲基化實驗數(shù)據(jù)，兩實驗結(jié)果的比較，將發(fā)現(xiàn)小細胞肺癌患者預后因素判定中，外周血白細胞dna甲基化在黃色人種與白色人種中的差異。最后，我們還將發(fā)現(xiàn)小細胞肺癌患者中，外周血白細胞dna甲基化與戒煙狀態(tài)是否相關(guān)。所以，本研究對于小細胞肺癌的預防及臨床醫(yī)生治療方案的選擇具有一定的指導性意義。大連市為肺癌高發(fā)區(qū)，大連市尚未開展此項技術(shù)，小細胞肺癌防治水平很低，楊

19、平教授及其肺癌研究團隊在全美、乃至國際上享有很高聲譽，我們已有很好的前期合作基礎(chǔ)，本項目需要且能得到美方楊平教授的技術(shù)支持與指導，我們將采取請進來、走出去的方式進行全方位合作，我們將邀請楊平教授來大連講學、給予技術(shù)支持和指導，同時，我們要派人到美國，學習小細胞肺癌防治建模和測模等先進的技術(shù)與方法。本項目完成后，可廣泛應用于大連市小細胞肺癌患者的防治工作中，具有很好的應用前景3、預期目標： 預期研究結(jié)果：1） 本研究可以作為預防和監(jiān)測小細胞肺癌治療效果和復發(fā)的新方法，提高預防發(fā)病及預測治療后復發(fā)時間和生存時間的準確性，并進而改善小細胞肺癌患者的預后。2） 本研究結(jié)果可作為一個新的非侵入性臨床化驗

20、手段，用來檢測高危吸煙人群罹患小細胞肺癌的風險，通過開展這項研究，我們將發(fā)現(xiàn)更多的候選基因和分子，并繼續(xù)獲得寶貴的數(shù)據(jù)資源，為今后短期和長期的小細胞肺癌防治研究工作打下堅實基礎(chǔ)。3） 通過中美兩國研究數(shù)據(jù)的對比，我們將發(fā)現(xiàn)中國黃色人種與美國白色人種小細胞肺癌患者中，外周血白細胞dna甲基化與其防治方面存在差異性。4） 我們將發(fā)現(xiàn)小細胞肺癌患者外周血白細胞dna甲基化與吸煙有關(guān)。還將發(fā)現(xiàn)，相比繼續(xù)吸煙者，確診后戒煙的患者死亡風險減少，治療效果較好，生活質(zhì)量提高。預期成果：1）發(fā)表sci收錄論文35篇；2）在國家級核心期刊發(fā)表文章56篇；3）申報省市級科技進步獎；4）培養(yǎng)研究生56名。以上成果均具

21、有獨立知識產(chǎn)權(quán)。4、 推廣及應用前景。本項目完成后，其成果可以作為預防和監(jiān)測小細胞肺癌治療效果和復發(fā)的新方法，提高預防發(fā)病及預測治療后復發(fā)時間和生存時間的準確性，并進而改善小細胞肺癌患者的預后，可廣泛應用于小細胞肺癌患者的防治工作中，具有很好的應用前景。三、項目可行性分析1、項目創(chuàng)新性： 1）本研究是在前期研究dna甲基化與小細胞肺癌防治相關(guān)性、戒煙狀態(tài)與小細胞肺癌防治相關(guān)性等工作基礎(chǔ)上的延續(xù)，而在小細胞肺癌患者中，關(guān)于dna甲基化、戒煙狀態(tài)與其防治三者的關(guān)系上目前尚沒有確切報道，而前期研究及目前工作均建立在國際合作的基礎(chǔ)上。2）本研究通過國際合作，可以建立我國黃色人種小細胞肺癌防治模型，可作

22、為一個新的無創(chuàng)性臨床檢查手段，用來檢測高危吸煙人群罹患小細胞肺癌的風險，從而實現(xiàn)早防、早診、早治，提高患者的療效。通過開展這項研究，我們將繼續(xù)獲得寶貴的數(shù)據(jù)資源，并為今后短期和長期的小細胞肺癌防治研究工作打下堅實基礎(chǔ)，如果更多的候選基因和分子能夠被發(fā)現(xiàn)，將可作為監(jiān)測小細胞肺癌療效和復發(fā)的新策略，進而改善小細胞肺癌患者的防治水平。3）本研究將通過國際合作，比較美國白色人種與中國黃色人種，小細胞肺癌患者外周血白細胞dna甲基化與其防治相關(guān)性方面，在統(tǒng)計學的差異性，在實驗方法上為一特色。2、前期工作基礎(chǔ)： 美國mayo clinic醫(yī)院為全美最大的醫(yī)學中心，肺科的防治水平全美排名第一，楊平教授及其肺

23、癌研究團隊在全美、乃至國際上享有很高聲譽，我們已有很好的合作基礎(chǔ)，自2007年開始，就與楊平教授保持很好的合作關(guān)系，也因此，2012年楊平教授被聘為大連醫(yī)科大學客座教授，近年來已合作發(fā)表十余篇高質(zhì)量學術(shù)論文，其中，sci文章5篇。我們合作在美國白色人種中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了小細胞肺癌患者外周血的dna甲基化標本在小細胞肺癌病例和對照組之間的差異。確定的cpg位點有著幫助預測和早期確診小細胞肺癌的巨大潛力。此外，我們還觀察到患者的存活與白細胞dna甲基化相關(guān)?？傊覀兒献髟谛〖毎伟┑姆乐蜗嚓P(guān)因素研究中，已經(jīng)積累了很好的工作基礎(chǔ)，通過量化患者外周血的dna甲基化水平，篩選與小細胞肺癌生物學行為相關(guān)的生

24、物標記物，從而預測其療效，提供有益于預后的臨床試驗資料，揭示可驗證遺傳變異，并通過藥物基因組學和流行病學的方法改變環(huán)境因素、選擇最佳治療方案，準確預測小細胞肺癌患者的臨床病程和生存期等重要信息。已發(fā)表5篇sci文章，回國后繼續(xù)小細胞肺癌防治方面研究，又有多篇文章發(fā)表，基于此，我們擬進一步在我國黃色人種中，與美方合作，同步對小細胞肺癌外周血dna進行全面分析，以獲取其他與小細胞肺癌防治相關(guān)的cpg位點，現(xiàn)已完成1000余例小細胞肺癌患者臨床資料收集，并以此為基礎(chǔ)建立了小細胞肺癌患者數(shù)據(jù)庫、標本庫，已采集小細胞肺癌患者及對照組血液標本400余例，已完成前期實驗，選定20個生物標志物，擬進行所有標本

25、甲基化水平檢測。大連醫(yī)科大學附屬二院腫瘤科為衛(wèi)生部腫瘤重點?？?，中心實驗室及腫瘤研究所均有很好的科研條件，可保證本項目的順利完成，形成了獨特的優(yōu)勢。本課題dna甲基化測定工作，將由大連醫(yī)科大學細胞生物學教研室的癌癥基因組學重點實驗室完成，該實驗室2004年和2006年被批準為遼寧省高校癌癥基因組學重點實驗室和遼寧省癌癥基因組學重點實驗室，2007年被遼寧省教育廳批準為“腫瘤的基礎(chǔ)與應用基礎(chǔ)研究創(chuàng)新團隊”，包括分子病理學實驗室、細胞培養(yǎng)室、dna室、rna室、蛋白分析室、低溫操作室、生物信息分析室以及資料處理室，具備在組織、細胞、基因、乃至基因組水平系統(tǒng)地研究病變細胞的病理學、細胞生物學及分子遺

26、傳學特點的實驗條件?，F(xiàn)主要從事以下研究：癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的研究；髓母細胞瘤生長、分化和凋亡的信號網(wǎng)絡(luò)及其調(diào)控；癌癥化療及其作用的分子機制；癌癥的基因組學和表觀遺傳學研究。在同行業(yè)中具有較高的科研水平和能力。本實驗設(shè)計及實施、完成過程中，將得到合作方美國mayo clinic醫(yī)院楊平教授及其帶領(lǐng)的肺癌流行病學研究團隊的全程指導、技術(shù)支持及幫助，美國mayo clinic醫(yī)院肺病研究全美排名第一，具有很強的研發(fā)能力、很高的科研能力，代表了國際先進水平，楊平教授為肺癌流行病學中心學術(shù)帶頭人，為國際知名的肺癌流行病學家，現(xiàn)已被聘為大連醫(yī)科大學客座教授，進一步保證了本課題的高質(zhì)量、高效率的完成。3

27、、擬采取的研究方法：（見圖1）我們將借助美方的技術(shù)支持，借鑒美方小細胞肺癌防治建模及測模方法，建立我國黃色人種小細胞肺癌防治模型。目標，確立基于血液的，與小細胞肺癌防治相關(guān)的生物標志物。目標i.a從文獻及我們最初的研究中測量并選擇血清生物標志物。i.a.1從文獻中已建立的方案中選擇已存在的生物標志物。i.a.2選擇新的與ttr和生存相關(guān)的sclc血清標志物。i.a.3在建立的模型樣本中檢測選擇好的血清標志物。i.a.4測量保留在第二目標模型中血清標志物的樣本。目標i.b.識別和驗證白細胞dna甲基化標志物。i.b.1鑒定其它白細胞dna甲基化標志物。i.b.2使用自定義甲基化檢測驗證選定的甲基

28、化標志物。i.b.3建立和驗證預測模型目標ii.開發(fā)和測試小細胞肺癌患者防治的多變量預測模型。ii.a僅通過臨床變量（基準模型）建立多元cox模型預測ttr或小細胞肺癌的生存。ii.b確認在ii.a衍生的基準模型中增加snp標志。ii.c在目標ii.b模型中增加現(xiàn)存的分子標志。ii.d在目標ii.c模型中增加在本研究鑒定的新標志。ii.e檢測由目標ii.a、ii.b、ii.c和ii.d中得到的模型并與現(xiàn)存模型進行比較。圖 1 本項目研究內(nèi)容、研究方法及研究目標（技術(shù)路線圖）可行性分析：1）理論上整體思路可行：小細胞肺癌與非小細胞肺癌相比，組織分型單一，所以，目前對現(xiàn)有不能手術(shù)的小細胞肺癌患者的

29、有限的標準治療方法用的是統(tǒng)一的判斷方式，但在相同的化療和/或放療治療中，患者間的預后有著很大差異，故研究小細胞肺癌防治相關(guān)因素很有意義。隨著整個人類基因組序列的完成，通過基因途徑進行癌癥的研究，在確定診斷、預后和治療性分子標志物方面起著極其重要的作用。大規(guī)?；蚪M分析和微陣列技術(shù)的應用，使越來越多的分子標志物被發(fā)現(xiàn)。確定生物標志物在預測小細胞肺癌生物學行為方面的作用，建設(shè)基于臨床標志物的生存和復發(fā)預測模型，使其量化性能特征和預測精度得以提高。這些模式可能會有助于預防和監(jiān)測和干預小細胞肺癌患者的復發(fā)，在提高生存率等方面提供很有價值的信息，從而指導小細胞肺癌的個體化治療。2）實驗上有很好的前期工作

30、基礎(chǔ)：近年來，我們研究了如吸煙史，遺傳多態(tài)性和dna甲基化對小細胞肺癌患者的生存狀態(tài)、環(huán)境和遺傳因素的影響。申請人于20072008年度于美國mayo clinic做訪問學者，從事小細胞肺癌的流行病學及藥理實驗學研究，掌握了一些先進的科研方法，積累了豐富的科研經(jīng)驗。申請人在實驗中發(fā)現(xiàn)，在美國白色人種中，戒煙狀況與小細胞肺癌患者預后具有相關(guān)性（正相關(guān)）；同時，在谷胱甘肽合成和dna修復途徑中，進行基因單核苷酸多態(tài)性標志，進一步發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽途徑和dna修復的基因遺傳變異，與小細胞肺癌患者預后具有相關(guān)性；還研究了外周血的dna甲基化在小細胞肺癌病例和對照組之間的差異。現(xiàn)已有六篇文章被國外權(quán)威sci雜

31、志收錄：european journal of cancer; lung cancer; annals of oncology; journal of thoracic oncology; asian pacific journal cancer prevention等。本研究dna甲基化測定工作，將由大連醫(yī)科大學細胞生物學教研室的癌癥基因組學重點實驗室完成，該實驗室2004年和2006年被批準為遼寧省高校癌癥基因組學重點實驗室和遼寧省癌癥基因組學重點實驗室，2007年被遼寧省教育廳批準為“腫瘤的基礎(chǔ)與應用基礎(chǔ)研究創(chuàng)新團隊”，具備在組織、細胞、基因、乃至基因組水平系統(tǒng)地研究腫瘤細胞的病理學、細

32、胞生物學及分子遺傳學特點的實驗條件，現(xiàn)主要從事癌癥的基因組學和表觀遺傳學研究。以上均為本實驗順利進行提供了很好的前期工作基礎(chǔ)及實驗條件。3）臨床上病例來源及隨訪有保障：大連醫(yī)科大學兩所附屬醫(yī)院每年收治小細胞肺癌患者300400例，附屬二院腫瘤科為衛(wèi)生部腫瘤重點?？疲嗄陙硪研纬闪送晟频哪[瘤患者隨訪體制。十多名醫(yī)護人員進行患者隨訪、數(shù)據(jù)庫錄入及維護工作，現(xiàn)數(shù)據(jù)庫內(nèi)已錄入各種腫瘤患者20000余例，肺癌6000余例，小細胞肺癌1000余例，科室內(nèi)擁有一個經(jīng)驗豐富的科研團隊，為本實驗的進行提供了豐富的病例來源及很好的隨訪機制保障。4）人員配備合理，研究隊伍可行：申請人多年來從事小細胞肺癌的基礎(chǔ)及臨

33、床實驗研究，于20072008年度于美國mayo clinic做訪問學者，從事小細胞肺癌的流行病學及藥理實驗研究；2012年獲澳大利亞政府奮進獎長江研究員獎學金，于澳大利亞西澳大學進行腫瘤預后相關(guān)因素研究。掌握了一些先進的科研方法，積累了一些科研經(jīng)驗，現(xiàn)已有六篇文章被國外權(quán)威sci雜志收入。參與國家級、部級及省市級課題多項，主持遼寧省科技廳自然科學基金項目一項、大連市科技局計劃項目一項。主要參與人楊平教授為美國john hopkins university 流行病學博士，mayo clinic流行病學教授，2012年被大連醫(yī)科大學聘為客座教授，在肺癌遺傳流行病學方面有很深的造詣，將為本課題設(shè)計

34、、實驗實施及統(tǒng)計分析方面提供一定幫助。課題組成員由教授、講師、助教及多名研究生組成，均具有豐富的肺癌基礎(chǔ)研究經(jīng)驗，充分掌握了該研究所需的前沿動態(tài)和相關(guān)技術(shù)，為本課題的完成奠定了堅實的基礎(chǔ)。4、項目成熟性和可靠性。近年來，我們研究了吸煙史，遺傳多態(tài)性和dna甲基化對小細胞肺癌的生存狀態(tài)、環(huán)境和遺傳因素的影響。本人于美國期間，研究了dna甲基化對小細胞肺癌患者生存狀態(tài)和遺傳因素的影響。已發(fā)表5篇sci文章，回國后繼續(xù)小細胞肺癌防治方面研究，已有多篇文章發(fā)表，基于此，我們擬進一步在我國黃色人種中，與美方合作，同步對小細胞肺癌外周血dna進行全面分析，以獲取其他與小細胞肺癌防治相關(guān)的cpg位點，現(xiàn)已完

35、成1000余例小細胞肺癌患者臨床資料收集，并以此為基礎(chǔ)建立了小細胞肺癌患者數(shù)據(jù)庫、標本庫，已采集小細胞肺癌患者及對照組血液標本400余例，已完成前期實驗，選定20個生物標志物，擬進行所有標本甲基化水平檢測。美國mayo clinic醫(yī)院為全美最大的醫(yī)學中心，肺科的防治水平全美排名第一，楊平教授及其肺癌研究團隊在全美、乃至國際上享有很高聲譽，通過國際合作，我們將借助美方的技術(shù)支持，借鑒美方小細胞肺癌防治建模及測模方法，建立我國黃色人種小細胞肺癌防治模型，進而為我國小細胞肺癌防治提供一新的、可行的檢測手段。故本項目實驗技術(shù)成熟，實驗方法可靠。5、市場競爭能力預測：對于人外周血dna甲基化與小細胞肺癌防治相關(guān)性研究，目前在世界范圍內(nèi)鮮有大樣本研究，多局限于動物實驗階段，大連市尚未開展此項技術(shù)，但大連市為肺癌高發(fā)區(qū)，本項目完成后，其成果可以作為預防和監(jiān)測小細胞肺癌治療效果和復發(fā)的新方法，提高預防發(fā)病及預測治療后復發(fā)時間和生存時間的準確性，并進而改善小細胞肺癌患者的預后，可廣泛應用于小細胞肺癌患者的防治工作中，具有