比色法和分光光度計(jì)分析法

1、比色法和分光光度計(jì)分析法 一一. 概述概述 (1) 比色法和可見分光光度法的特點(diǎn)比色法和可見分光光度法的特點(diǎn) 比色法比色法: 在分析化學(xué)中在分析化學(xué)中, 利用比較利用比較 有色溶液顏色的深淺來測(cè)定物質(zhì)含有色溶液顏色的深淺來測(cè)定物質(zhì)含 量的分析方法稱為比色法。過去大量的分析方法稱為比色法。過去大 多用眼睛觀察比較多用眼睛觀察比較, 故又稱目視比故又稱目視比 色法。色法。 第二節(jié)第二節(jié) 比色法和可見分光光度法比色法和可見分光光度法 比色法和分光光度計(jì)分析法 光電比色法光電比色法(分光光度法分光光度法): 隨著近代分析儀器的發(fā)展隨著近代分析儀器的發(fā)展, 目前已目前已 普遍使用光電比色計(jì)普遍使用光電比

2、色計(jì)(分光光度計(jì)分光光度計(jì))通通 過測(cè)量有色溶液對(duì)入色光的吸收程度過測(cè)量有色溶液對(duì)入色光的吸收程度 對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分析對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分析, 稱為光電比色法稱為光電比色法(分分 光光度法光光度法)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 與目視比色法相比與目視比色法相比, 光度法的特點(diǎn)光度法的特點(diǎn): 靈敏度高靈敏度高;10-5 10-6mol/L 準(zhǔn)確度較高準(zhǔn)確度較高; 儀器設(shè)備較簡(jiǎn)單儀器設(shè)備較簡(jiǎn)單, 操作簡(jiǎn)便、操作簡(jiǎn)便、 快速；快速； 應(yīng)用廣泛。應(yīng)用廣泛。 比色法和分光光度計(jì)分析法 (2) 光的性質(zhì)和物質(zhì)的顏色光的性質(zhì)和物質(zhì)的顏色 光的性質(zhì)光的性質(zhì): 光是一種電磁波光是一種電磁波, 具具 有波粒二象性。光的波動(dòng)性

3、可用有波粒二象性。光的波動(dòng)性可用 波長(zhǎng)來描述波長(zhǎng)來描述, 其單位常用納米其單位常用納米(nm) 表示表示, 波長(zhǎng)越短波長(zhǎng)越短, 能量越高。能量越高。 比色法和分光光度計(jì)分析法 具有同一波長(zhǎng)的光稱為單色光具有同一波長(zhǎng)的光稱為單色光,由不由不 同波長(zhǎng)光組成的光稱為復(fù)合光。同波長(zhǎng)光組成的光稱為復(fù)合光。 比色法和分光光度計(jì)分析法 互補(bǔ)色光互補(bǔ)色光: 若將兩種顏色的光按適當(dāng)?shù)娜魧煞N顏色的光按適當(dāng)?shù)?強(qiáng)度比混合可成白光強(qiáng)度比混合可成白光, 那么這兩種光稱為那么這兩種光稱為 互補(bǔ)色光。互補(bǔ)色光。 比色法和分光光度計(jì)分析法 物質(zhì)的顏色物質(zhì)的顏色: 物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。

4、 當(dāng)一束白光通過溶液時(shí)當(dāng)一束白光通過溶液時(shí), 若溶液對(duì)各若溶液對(duì)各 種色光都不吸收種色光都不吸收, 則白光全部通過則白光全部通過, 溶液呈無色透明溶液呈無色透明; 若各種色光幾乎全若各種色光幾乎全 被吸收被吸收, 則溶液呈黑色則溶液呈黑色; 若溶液只吸收若溶液只吸收 某種色光某種色光, 則溶液呈透過光的顏色則溶液呈透過光的顏色, 也也 就是說就是說, 溶液呈吸收光的互補(bǔ)色光的溶液呈吸收光的互補(bǔ)色光的 顏色。顏色。 比色法和分光光度計(jì)分析法 例如例如, 白光通過白光通過CuSO4溶液時(shí)溶液時(shí), 溶液溶液 顏色為藍(lán)色。顏色為藍(lán)色。 比色法和分光光度計(jì)分析法 吸收曲線吸收曲線: 為了精確表明溶液對(duì)不

5、為了精確表明溶液對(duì)不 同波長(zhǎng)光的吸收情況同波長(zhǎng)光的吸收情況, 可將不同波長(zhǎng)可將不同波長(zhǎng) 的單色光依次通過某一固定濃度的有的單色光依次通過某一固定濃度的有 色溶液色溶液, 測(cè)量該溶液對(duì)各單色光的吸測(cè)量該溶液對(duì)各單色光的吸 收程度收程度, 即吸光度即吸光度, 以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo), 吸光度為縱坐標(biāo)作圖所得曲線吸光度為縱坐標(biāo)作圖所得曲線, 即為即為 吸收曲線吸收曲線, 或稱吸收光譜?；蚍Q吸收光譜。 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 二、朗伯二、朗伯-比爾定律比爾定律 (1) 朗伯朗伯-比爾定律比爾定律 透光度透光度(透光率透光率T): 0 t I I T 吸光度吸光度(A)

6、: 0 t lg I I A 朗伯朗伯-比爾定律比爾定律: Kbc I I TA t 0 lglg 比色法和分光光度計(jì)分析法 此式表明此式表明: 當(dāng)一束平行的單色光通當(dāng)一束平行的單色光通 過吸光物質(zhì)的均勻溶液時(shí)過吸光物質(zhì)的均勻溶液時(shí), 溶液的吸溶液的吸 光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成 正比。正比。 K:比例常數(shù)比例常數(shù), 與入射光波長(zhǎng)與入射光波長(zhǎng), 溶液溶液 中吸光物質(zhì)的本性及溶液的溫度有中吸光物質(zhì)的本性及溶液的溫度有 關(guān)。關(guān)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 (2) 吸光系數(shù)吸光系數(shù) 當(dāng)當(dāng)b以以cm, c以以g/L為單位為單位, K為吸光為吸光 系數(shù)系數(shù), 用符號(hào)

7、用符號(hào)a表示表示, 單位為單位為L(zhǎng)/g cm A=abc 當(dāng)當(dāng)b以以cm, c以以mol/L為單位時(shí)為單位時(shí), K為為 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù), 用符號(hào)用符號(hào)表示表示, 單位單位 為為L(zhǎng)/ mol cm A=bc a與與的關(guān)系的關(guān)系: M a 比色法和分光光度計(jì)分析法 比吸光系數(shù)比吸光系數(shù)( ): 指質(zhì)量濃度指質(zhì)量濃度 為為 1%(g/mL), b為為1cm時(shí)的吸光度時(shí)的吸光度 值值, 單位為單位為mL/g cm 同一物質(zhì)的同一物質(zhì)的與與 之間的關(guān)系之間的關(guān)系: 1% 1cm E 1% 1cm E r 1% 1cm 10 M E 比色法和分光光度計(jì)分析法 例例1 一含一含F(xiàn)e2+ 液液, 用

8、鄰二氮菲顯色測(cè)定用鄰二氮菲顯色測(cè)定, 吸收池厚吸收池厚 度為度為2cm,在在508nm處測(cè)得吸光度為處測(cè)得吸光度為 0.19, 求其摩爾吸光系數(shù)和比吸光系求其摩爾吸光系數(shù)和比吸光系 數(shù)。數(shù)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 (3) 偏離朗伯偏離朗伯-比爾定律的原因比爾定律的原因 標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線: 根據(jù)朗伯根據(jù)朗伯-比爾定律比爾定律,當(dāng)當(dāng) 吸收池厚度不變吸收池厚度不變, 以吸光度為縱坐以吸光度為縱坐 標(biāo)標(biāo), 濃度為橫坐標(biāo)作圖時(shí)濃度為橫坐標(biāo)作圖時(shí), 應(yīng)得到一應(yīng)得到一 條通過原點(diǎn)的直線條通過原點(diǎn)的直線, 稱為校正曲線或稱為校正曲線或 標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線。 比色法和分光光度計(jì)分析

9、法 偏離朗伯偏離朗伯-比爾定律的主要原因比爾定律的主要原因: 定律僅適用于稀溶液定律僅適用于稀溶液 化學(xué)變化引起的偏離化學(xué)變化引起的偏離(正偏離正偏離) 非單色入射光引起的偏離非單色入射光引起的偏離(負(fù)負(fù) 偏離偏離) 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 三三. 方法和儀器方法和儀器 (1) 目視比色法目視比色法 目視比色法目視比色法: 用眼睛觀察比較溶液顏色深用眼睛觀察比較溶液顏色深 度以測(cè)量物質(zhì)含量的分析方法稱度以測(cè)量物質(zhì)含量的分析方法稱 為目視比色法。為目視比色法。 比色法和分光光度計(jì)分析法 標(biāo)準(zhǔn)系列法的原理標(biāo)準(zhǔn)系列法的原理: 朗伯朗伯-比爾定律對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列法原比爾定律對(duì)標(biāo)準(zhǔn)

10、系列法原 理的解釋理的解釋: A=sbscs=xbxcx 比色法和分光光度計(jì)分析法 標(biāo)準(zhǔn)系列法的優(yōu)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)系列法的優(yōu)點(diǎn): 儀器簡(jiǎn)單儀器簡(jiǎn)單, 操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便,適宜于大批適宜于大批 試樣分析試樣分析 適宜于稀溶液中微量組分的測(cè)定適宜于稀溶液中微量組分的測(cè)定 某些不完全符合朗伯某些不完全符合朗伯-比爾定律比爾定律 的顯色反應(yīng)的顯色反應(yīng), 仍可用此法進(jìn)行測(cè)仍可用此法進(jìn)行測(cè) 定。定。 標(biāo)準(zhǔn)系列法的缺點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)系列法的缺點(diǎn): 準(zhǔn)確度較差。準(zhǔn)確度較差。 比色法和分光光度計(jì)分析法 (2) 光電比色法和可見分光光度法光電比色法和可見分光光度法 光電比色法的原理光電比色法的原理: 所用儀器為所用儀器為 光電比色計(jì)。

11、光電比色計(jì)。 光源光源濾光片濾光片一定波長(zhǎng)范圍的一定波長(zhǎng)范圍的 近似單色光近似單色光有色溶液有色溶液透過光透過光 光電池光電池檢流計(jì)的標(biāo)盤檢流計(jì)的標(biāo)盤 比色法和分光光度計(jì)分析法 可見分光光度法所用的儀器稱為可見分光光度法所用的儀器稱為 分光光度計(jì)分光光度計(jì), 它是利用分光能力很強(qiáng)的它是利用分光能力很強(qiáng)的 棱鏡或光柵的原理棱鏡或光柵的原理, 作為單色器作為單色器, 可連可連 續(xù)獲得不同波長(zhǎng)的單色光續(xù)獲得不同波長(zhǎng)的單色光, 其波長(zhǎng)范圍其波長(zhǎng)范圍 比用濾光片獲得的更窄。因此用分光比用濾光片獲得的更窄。因此用分光 光度計(jì)可連續(xù)測(cè)量某一定濃度有色溶光度計(jì)可連續(xù)測(cè)量某一定濃度有色溶 液在不同波長(zhǎng)下的吸光度

12、液在不同波長(zhǎng)下的吸光度, 從而可得其從而可得其 吸收光譜吸收光譜,通過吸收光譜可選擇最適宜通過吸收光譜可選擇最適宜 的測(cè)定波長(zhǎng)。的測(cè)定波長(zhǎng)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 所以分光光度計(jì)采用適當(dāng)?shù)墓庠此苑止夤舛扔?jì)采用適當(dāng)?shù)墓庠?和檢測(cè)器和檢測(cè)器, 使測(cè)量的范圍不只局限于使測(cè)量的范圍不只局限于 可見光區(qū)。如用紅外光作為光源成可見光區(qū)。如用紅外光作為光源成 為紅外分光光度法為紅外分光光度法; 用紫外線作為光用紫外線作為光 源稱為紫外分光光度法。源稱為紫外分光光度法。 比色法和分光光度計(jì)分析法 光電比色計(jì)和可見分光光度計(jì)的光電比色計(jì)和可見分光光度計(jì)的 基本部件基本部件 光光 源源 單色器單色器吸收池吸

13、收池 檢測(cè)器檢測(cè)器指示器指示器 比色法和分光光度計(jì)分析法 a. 光源光源 要求要求: 光源須具有足夠的輻射強(qiáng)度光源須具有足夠的輻射強(qiáng)度, 且穩(wěn)定性好。且穩(wěn)定性好。 鎢燈是可見分光光度計(jì)常用鎢燈是可見分光光度計(jì)常用 的光源。的光源。 比色法和分光光度計(jì)分析法 b. 單色器單色器 光電比色計(jì)光電比色計(jì): 用濾光片獲得單色光。用濾光片獲得單色光。 選擇濾光片的原則是選擇濾光片的原則是: 濾光片最易濾光片最易 透過的光應(yīng)是有色物質(zhì)最易吸收的透過的光應(yīng)是有色物質(zhì)最易吸收的 光光, 即濾光片的顏色與溶液的顏色應(yīng)即濾光片的顏色與溶液的顏色應(yīng) 為互補(bǔ)色為互補(bǔ)色; 也可以使用不同的濾光片也可以使用不同的濾光片

14、測(cè)量同一有色溶液的吸光度測(cè)量同一有色溶液的吸光度, 測(cè)得吸測(cè)得吸 光度最大時(shí)所用的濾光片就是最適光度最大時(shí)所用的濾光片就是最適 宜的濾光片。宜的濾光片。 比色法和分光光度計(jì)分析法 分光光度計(jì)分光光度計(jì): 單色器由棱鏡或光柵、單色器由棱鏡或光柵、 狹縫和準(zhǔn)直鏡等部分組成。狹縫和準(zhǔn)直鏡等部分組成。 棱鏡棱鏡: 色散元件色散元件, 有石英或玻璃兩有石英或玻璃兩 種種, 它們對(duì)不同波長(zhǎng)光具有不同的折它們對(duì)不同波長(zhǎng)光具有不同的折 射率。石英棱鏡對(duì)紫外光分光效果好射率。石英棱鏡對(duì)紫外光分光效果好, 玻璃棱鏡對(duì)可見光分光效果好玻璃棱鏡對(duì)可見光分光效果好, 因?yàn)橐驗(yàn)?玻璃對(duì)紫外光有吸收玻璃對(duì)紫外光有吸收, 故

15、不能用于紫故不能用于紫 外光區(qū)。外光區(qū)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 光柵光柵:色散元件色散元件, 利用光的衍射和干利用光的衍射和干 涉原理制成。當(dāng)白光通過密刻平行條涉原理制成。當(dāng)白光通過密刻平行條 痕的光柵后痕的光柵后, 將不同波長(zhǎng)的光色散成將不同波長(zhǎng)的光色散成 連續(xù)光譜。具有波長(zhǎng)范圍寬、色散均連續(xù)光譜。具有波長(zhǎng)范圍寬、色散均 勻、分辨本領(lǐng)高等優(yōu)點(diǎn)。勻、分辨本領(lǐng)高等優(yōu)點(diǎn)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 c. 吸收池吸收池(比色皿比色皿) 用于盛裝被測(cè)試液和參比溶液。用于盛裝被測(cè)試液和參比溶液。 按制作材料不同分為石英吸收按制作材料不同分為石英吸收 池和玻璃吸收池。池和玻璃

16、吸收池。 比色法和分光光度計(jì)分析法 d. 檢測(cè)器檢測(cè)器 作用作用: 是將光強(qiáng)度信號(hào)轉(zhuǎn)換為可是將光強(qiáng)度信號(hào)轉(zhuǎn)換為可 測(cè)電信號(hào)測(cè)電信號(hào), 常見檢測(cè)器有光電池和常見檢測(cè)器有光電池和 光電管。光電管。 光電池光電池: 國(guó)產(chǎn)國(guó)產(chǎn)581-G型光電比色型光電比色 計(jì)及計(jì)及72型分光光度計(jì)。型分光光度計(jì)。 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): 光電池靈敏度較高光電池靈敏度較高, 產(chǎn)生的光電產(chǎn)生的光電 池不需要經(jīng)過放大便可直接用池不需要經(jīng)過放大便可直接用 靈敏檢流計(jì)測(cè)量。靈敏檢流計(jì)測(cè)量。 缺點(diǎn)缺點(diǎn): 光電池經(jīng)強(qiáng)光照射或連續(xù)使用時(shí)光電池經(jīng)強(qiáng)光照射或連續(xù)使用時(shí) 間過長(zhǎng)間過長(zhǎng), 易產(chǎn)生易產(chǎn)生

17、“疲勞現(xiàn)象疲勞現(xiàn)象”, 導(dǎo)導(dǎo) 致致 靈敏度降低靈敏度降低, 遇此情況遇此情況, 應(yīng)暫停使應(yīng)暫停使 用并避光放置用并避光放置, 待其復(fù)原后再用。待其復(fù)原后再用。 比色法和分光光度計(jì)分析法 光電管光電管: 國(guó)產(chǎn)國(guó)產(chǎn)721型分光光度計(jì)型分光光度計(jì) 比色法和分光光度計(jì)分析法 e. 指示器指示器 比色法和分光光度計(jì)分析法 (3) 常用光電比色計(jì)和分光光度計(jì)常用光電比色計(jì)和分光光度計(jì) 光電比色計(jì)光電比色計(jì): 國(guó)產(chǎn)國(guó)產(chǎn)581-G型型, 儀器通儀器通 常配有紅色、綠色、藍(lán)色三塊濾光常配有紅色、綠色、藍(lán)色三塊濾光 片片, 其透過光的最大波長(zhǎng)分別在其透過光的最大波長(zhǎng)分別在650、 530和和440mm左右。左右。

18、 比色法和分光光度計(jì)分析法 可見光光度計(jì)可見光光度計(jì): 國(guó)產(chǎn)國(guó)產(chǎn)721型分光光度計(jì)型分光光度計(jì) 比色法和分光光度計(jì)分析法 四、顯色反應(yīng)及其影響因素四、顯色反應(yīng)及其影響因素 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng): 將被測(cè)組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩珜⒈粶y(cè)組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩?化合物的反應(yīng)稱為顯色反應(yīng)?；衔锏姆磻?yīng)稱為顯色反應(yīng)。 顯色劑顯色劑:使被測(cè)組分顯色的試劑稱使被測(cè)組分顯色的試劑稱 為顯色劑。為顯色劑。 比色法和分光光度計(jì)分析法 (1) 對(duì)顯色反應(yīng)的要求對(duì)顯色反應(yīng)的要求 選擇性好選擇性好 靈敏度高靈敏度高 有色化合物組成恒定有色化合物組成恒定 有色化合物的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定有色化合物的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定 顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無明顯吸收顯色劑在測(cè)

19、定波長(zhǎng)處無明顯吸收 比色法和分光光度計(jì)分析法 (2) 顯色劑顯色劑 顯色劑可分為無機(jī)顯色劑和有機(jī)顯顯色劑可分為無機(jī)顯色劑和有機(jī)顯 色劑兩大類。由于大多數(shù)有機(jī)顯色色劑兩大類。由于大多數(shù)有機(jī)顯色 劑能與金屬離子形成穩(wěn)定的有特征劑能與金屬離子形成穩(wěn)定的有特征 顏色的螯合物顏色的螯合物, 靈敏度較高靈敏度較高, 選擇性選擇性 也較好。因此也較好。因此, 在比色分析和光度分在比色分析和光度分 析中主要選用有機(jī)顯色劑。析中主要選用有機(jī)顯色劑。 比色法和分光光度計(jì)分析法 兩種常用的有機(jī)顯色劑：兩種常用的有機(jī)顯色劑： 鄰二氮菲鄰二氮菲 其結(jié)構(gòu)式為其結(jié)構(gòu)式為 這是目前廣泛用于測(cè)定這是目前廣泛用于測(cè)定Fe2+的較

20、好的的較好的 顯色劑。先用鹽酸羥胺把待測(cè)試液顯色劑。先用鹽酸羥胺把待測(cè)試液 中的中的Fe3+還原為還原為Fe2+ ,然后在然后在pH56 的條件下的條件下,與鄰二氮菲反應(yīng)與鄰二氮菲反應(yīng),生成穩(wěn)定生成穩(wěn)定 的橙紅色配合物，配合物的的橙紅色配合物，配合物的max為為 508nm.反應(yīng)是特效的反應(yīng)是特效的,靈敏度也較高，靈敏度也較高， 摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)為為1.1104L/mol.cm。 比色法和分光光度計(jì)分析法 . 雙硫腙雙硫腙 其結(jié)構(gòu)式為其結(jié)構(gòu)式為 比色法和分光光度計(jì)分析法 (3) 影響顯色反應(yīng)的因素：影響顯色反應(yīng)的因素： 顯色劑的用量：顯色劑的用量： 顯色反應(yīng)表示式顯色反應(yīng)表示式: M+

21、R MR (被測(cè)組分被測(cè)組分)(顯色劑顯色劑)(有色配合物有色配合物) 顯色劑的用量應(yīng)當(dāng)適宜顯色劑的用量應(yīng)當(dāng)適宜,其用量是其用量是 通過實(shí)驗(yàn)確定。通過實(shí)驗(yàn)確定。 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 實(shí)驗(yàn)方法為：固定被測(cè)組分的濃度和實(shí)驗(yàn)方法為：固定被測(cè)組分的濃度和 其它條件其它條件,改變顯色劑在溶液中的濃度改變顯色劑在溶液中的濃度 cR,分別測(cè)量吸光度分別測(cè)量吸光度(A),繪制繪制A-cR曲線。曲線。 比色法和分光光度計(jì)分析法 比色法和分光光度計(jì)分析法 溶液的酸度溶液的酸度 適宜酸度范圍確定方法：適宜酸度范圍確定方法： 固定顯色劑和被測(cè)組分的濃度固定顯色劑和被測(cè)組分的濃度, 改變

22、溶液的改變?nèi)芤旱膒H值值,分別測(cè)量吸光度分別測(cè)量吸光度, 繪制繪制A- pH曲線。曲線平坦部分所曲線。曲線平坦部分所 對(duì)應(yīng)的對(duì)應(yīng)的pH值即為適宜的酸度范圍。值即為適宜的酸度范圍。 比色法和分光光度計(jì)分析法 顯色時(shí)間顯色時(shí)間 作吸光度作吸光度-時(shí)間曲線時(shí)間曲線, 確定適宜的確定適宜的 顯色時(shí)間。顯色時(shí)間。 顯色溫度顯色溫度 溶劑的性質(zhì)溶劑的性質(zhì) 共存離子的干擾及其消除共存離子的干擾及其消除 比色法和分光光度計(jì)分析法 消除共存離子干擾的方法：消除共存離子干擾的方法： b. 加入掩蔽劑加入掩蔽劑 c. 分離干擾離子分離干擾離子 比色法和分光光度計(jì)分析法 五、光度測(cè)量條件的選擇五、光度測(cè)量條件的選擇

23、(1) 選擇合適波長(zhǎng)的入射光選擇合適波長(zhǎng)的入射光 選被測(cè)有色物質(zhì)的選被測(cè)有色物質(zhì)的max為入射為入射 光光 如在如在max處顯色劑或干擾組分處顯色劑或干擾組分 有明顯的吸收有明顯的吸收, 則應(yīng)選靈敏度較則應(yīng)選靈敏度較 低但能避免干擾的適宜波長(zhǎng)的光低但能避免干擾的適宜波長(zhǎng)的光 作為入射光。作為入射光。 比色法和分光光度計(jì)分析法 (2) 選擇適宜的參比溶液選擇適宜的參比溶液 . 當(dāng)被測(cè)溶液、顯色劑及所用其他當(dāng)被測(cè)溶液、顯色劑及所用其他 試劑均無色試劑均無色,可用純?nèi)軇┳鳛閰⒈热芤嚎捎眉內(nèi)軇┳鳛閰⒈热芤? 稱為溶劑空白。稱為溶劑空白。 . 當(dāng)顯色劑無色而被測(cè)試液中存在當(dāng)顯色劑無色而被測(cè)試液中存在 其

24、他有色離子時(shí)其他有色離子時(shí),可用不加顯色劑的被可用不加顯色劑的被 測(cè)試液作為參比溶液測(cè)試液作為參比溶液,稱為試樣空白。稱為試樣空白。 . 當(dāng)顯色劑或其他試劑有色當(dāng)顯色劑或其他試劑有色,可用顯可用顯 色劑或其他試劑作為參比溶液色劑或其他試劑作為參比溶液,稱為試稱為試 劑空白。劑空白。 比色法和分光光度計(jì)分析法 . 用不含被測(cè)組分的試樣用不含被測(cè)組分的試樣, 在相同條件在相同條件 下與被測(cè)試樣同時(shí)進(jìn)行處理下與被測(cè)試樣同時(shí)進(jìn)行處理, 測(cè)吸光測(cè)吸光 度時(shí)以前者所得溶液為參比溶液度時(shí)以前者所得溶液為參比溶液, 稱稱 為平行操作空白。如臨床上進(jìn)行某為平行操作空白。如臨床上進(jìn)行某 種藥物濃度的監(jiān)測(cè)種藥物濃度的監(jiān)測(cè),取正常人血樣和取正常人血樣和 待測(cè)血藥濃度的血樣在相同條件下待測(cè)血藥濃度的血樣在相同條件下 處理處理, 用前者得到的溶液作為參比溶用前者得到的溶液作為參比溶 液。液。 比色法和分光光度計(jì)分析法 (3) 控制適當(dāng)?shù)奈舛茸x數(shù)范圍控制適當(dāng)?shù)奈舛茸x數(shù)范圍 適宜讀數(shù)范圍適宜讀數(shù)范圍: 吸光度吸光度A在在0.151.0內(nèi)，內(nèi)， 或透光度或透光度T值在值在0.100.70內(nèi)。內(nèi)。 (1) 校正曲線法校正曲線法(適用于經(jīng)常性的批量分適用于經(jīng)常性的批量分 析）析） (2) 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法（標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法（標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法） 此法適宜于非經(jīng)常