通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟抗氧化能力的影響

1、通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟抗氧化能力的影響 關(guān)鍵詞：糖尿病 【摘要】 目的 研究通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及作用機(jī)制。方法 鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠給予通心絡(luò)治療6周后，檢測通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟氧自由基代謝狀態(tài)及抗氧化能力的改變。結(jié)果 通心絡(luò)治療組血糖水平明顯高于正常對(duì)照組，而與糖尿病大鼠相比，兩組血糖水平相當(dāng)，p0.05；與正常對(duì)照組大鼠比較，糖尿病大鼠腎皮質(zhì)丙二醛（mda）含量增加，通心絡(luò)治療組mda水平高于正常對(duì)照組，低于糖尿病組，但差異無顯著性（p0.05）；與nc組相比，dm組谷胱甘肽(gsh)水平均有下降，差異有顯著性（p0.05）；與dm組相比，txl組gsh水平有升高趨勢

2、，但仍顯著低于nc組水平。與nc組相比，txl組與dm組超氧化物歧化酶(sod)水平均降低，差異有顯著性。其中txl組sod水平高于dm組，但兩組間差異無顯著性（p0.05）。各組大鼠腎臟t-aoc及cat活性差異均無顯著性。結(jié)論 通心絡(luò)可部分改善高糖引起的腎臟氧化應(yīng)激，提高腎臟的抗氧化能力，對(duì)糖尿病引起的大鼠腎臟損害具有一定的保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】 糖尿病，實(shí)驗(yàn)性；通心絡(luò)；氧化性應(yīng)激；腎 effect of tong xinluo on oxidative stress in the kidney of diabetic rats 【abstract】 objective to study

3、the effects of tong xinluo on the oxidative stress and antioxidative system in kidney of diabetic rats.methods after the stz-induced diabetic rats were treated with tong xinluo for six weeks， the sod， cat， t-aoc， mda and gsh in kidney cortex were measured.results the level of blood glucose in group

4、txl was higher than that of group cn. and had no significant difference with group dm(p0.05). the content of mda in group dm was higher than group cn(p0.05) and lower than group txl， but showed no significant difference within group dm and group txl(p0.05). the content of gsh increased significantly

5、 higher in group txl than group dm(p0.05) but lower than group cn(p0.05). the activity of sod increased significantly in group txl than in group dm(p0.05). our test showed no significant difference in t-aoc and cat within all groups.conclusion tong xinluo could improve the antioxidative ability， dec

6、rease oxidative stress and protect the kidney in diabetic rats. 【key words】 diabetes；experimental；tongxinluo；oxidative stress；kidney 糖尿病并發(fā)癥發(fā)病的統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說認(rèn)為，在持續(xù)高糖狀態(tài)下，線粒體活性氧基生成增加可能是導(dǎo)致糖尿病各種并發(fā)癥發(fā)生、發(fā)展的中心環(huán)節(jié)1，2，引起糖尿病組織損害的四條通路多元醇通路激活、蛋白質(zhì)非酶糖化增加、pkc(蛋白激酶c)激活、己糖胺途徑激活等實(shí)質(zhì)上都是高糖誘導(dǎo)的超氧化物過表達(dá)的結(jié)果。由此，氧自由基生成增多引起的氧化應(yīng)激成為糖尿病微血管病變

7、發(fā)生、發(fā)展的重要影響因素。有研究證實(shí)3，通心絡(luò)可有效降低早期糖尿病腎病的內(nèi)皮素（et）水平和尿白蛋白排泄率（uaer），可有效地延緩糖尿病腎病腎功能衰竭的進(jìn)展。通心絡(luò)對(duì)糖尿病腎臟有一定的保護(hù)作用，但機(jī)制尚不明確。根據(jù)糖尿病并發(fā)癥的統(tǒng)一發(fā)病機(jī)制學(xué)說，糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展及改善與氧化損傷的相應(yīng)變化密切有關(guān)，因此本研究采用通心絡(luò)治療糖尿病大鼠，擬從氧化與抗氧化系統(tǒng)方面探討通心絡(luò)改善糖尿病腎臟病變的機(jī)制。 1 材料與方法 1.1 材料 鏈脲佐菌素（stz）購自美國sigma公司，通心絡(luò)超微顆粒（成分：人參、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鱉蟲、赤芍等）由以嶺藥業(yè)提供。超氧化物歧化酶（sod）、過氧化氫酶（cat

8、）、谷胱甘肽（gsh）、脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)物丙二醛（mda）、總抗氧化力（t-aoc）測定試劑盒購自南京建成公司。血糖測定采用美國羅氏公司血糖測定儀。雄性sd大鼠（體重160180g），購自上海中科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 1.2 方法 1.2.1 dm大鼠模型的制備與處理 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5天，禁食18h后先按體重隨機(jī)分為2組，一組（15只）大鼠單次腹腔注射stz 60mg/kg誘發(fā)糖尿病，另一組（5只）大鼠同時(shí)腹腔注射等體積的上述緩沖液作為對(duì)照。注射stz的動(dòng)物于注射3天后，空腹血搪持續(xù)高于167mmol/l，尿糖呈強(qiáng)陽性的動(dòng)物確定為糖尿病動(dòng)物。按空腹血糖水平再將糖尿病動(dòng)物隨機(jī)分為2組，加上對(duì)照組共3

9、組：對(duì)照組(5只，control，cn)，糖尿病組(5只，diabetes mellitus，dm)，通心絡(luò)處理的糖尿病組(5只，diabetes mellitus+tong xinluo， txl)，并開始給藥處理。txl組每天上午灌服通心絡(luò)水溶液1g/kg，其余2組均灌服等體積稀釋液，為維持糖尿病大鼠的存活，根據(jù)血糖水平皮下注射諾和靈n24u/d，連續(xù)處理6周。動(dòng)物自由進(jìn)食飲水，每周測量血糖、體重。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前大鼠過夜禁食后乙醚麻醉下摘除眼球取血并處死動(dòng)物，留取血清。迅速切除雙側(cè)腎臟，左腎稱重，除留取供形態(tài)研究的樣品外，切取部分腎皮質(zhì)，液氮中保存?zhèn)溆谩?1.2.2 檢測指標(biāo)與方法 血糖水平用

10、羅氏血糖儀測定。制備腎皮質(zhì)組織勻漿液，用可見光法檢測cat活性；用tba法測定mda，用dtnb法定量測定gsh含量；比色法測sod活性與總抗氧化能力。 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用xs表示，各組間數(shù)據(jù)差異顯著性均采用方差分析。 2 結(jié)果 2.1 一般情況 造模組注射stz后2448h出現(xiàn)多飲、多尿，第34天多食明顯。通心絡(luò)處理組及模型對(duì)照組大鼠多飲、多尿癥狀較重，體重不增，毛發(fā)無光澤，易脫落。 2.2 通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠血糖及腎臟氧自由基的影響 各模型組與對(duì)照組相比，血糖水平明顯升高，但各模型組之間血糖水平差異無顯著性。各模型組腎體重比與正常對(duì)照組相比，差異具有顯著性（p0.05），各模型

11、組之間差異無顯著性。陽性對(duì)照組mda顯著升高，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；與陽性對(duì)照組相比，通心絡(luò)處理組mda水平有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)（見表1）。 表1 各組大鼠血糖、腎體重比及mda情況 (xs) 注：vs nc組，*p0.05；mda：丙二醛；glu：血糖 2.3 通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟抗氧化能力的影響 與nc組相比，各模型組gsh水平均有下降，其中txl處理組gsh水平較dm組有所改善，且差異有顯著性（p0.05）。與nc組相比，dm組sod水平降低，差異有顯著性，txl組sod水平高于dm組但低于nc組，差異均無顯著性。nc組大鼠t-aoc及

12、cat活性高于其他組，但各組間差異均無顯著性。見表2。 表2 各組大鼠gsh、sod、t-aoc、cat水平 (xs) 注：vs nc組*p0.05；vs dm組#p0.05；gsh：谷胱甘肽；sod：超氧化物歧化酶；t-aoc：總抗氧化力；cat：過氧化氫酶 3 討論 糖尿病時(shí)機(jī)體普遍存在著氧化與抗氧化機(jī)制的紊亂，腎組織中活性氧簇（ros）生成過多、組織中抗氧化酶發(fā)生糖化或氧化、還原性物質(zhì)消耗過多，是造成腎組織氧化損傷的重要機(jī)制。氧化損傷進(jìn)一步導(dǎo)致糖尿病微血管病變?nèi)缒I小球、視網(wǎng)膜、周圍神經(jīng)，并最終導(dǎo)致1型與2型糖尿病患者失明、腎功能衰竭及發(fā)生周圍神經(jīng)病變2，4。lee等5已證明在腎小球系膜細(xì)

13、胞和小管上皮細(xì)胞，高糖是以時(shí)間依賴方式誘導(dǎo)對(duì)二氯熒光素敏感的ros的產(chǎn)生。ros攻擊不飽和脂肪酸后，腎皮質(zhì)中所產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物mda含量、抗氧化酶（sod、cat）活性、t-aoc及gsh改變可反映腎皮質(zhì)的抗氧化能力和氧化應(yīng)激程度。可有效逆轉(zhuǎn)高血糖引起的上述因素改變的藥物將有利于糖尿病腎病的預(yù)防與治療。 3.1 通心絡(luò)對(duì)血糖的影響 現(xiàn)已公認(rèn)，活性氧對(duì)腎組織的損傷作用是腎組織病變的主要發(fā)病機(jī)制之一，甚至是許多細(xì)胞因子損傷腎組織的最終介質(zhì)，高血糖是誘導(dǎo)超氧化物過表達(dá)的主要因素。本研究結(jié)果顯示，與陽性對(duì)照組及褪黑素治療組相比，通心絡(luò)在糖尿病誘導(dǎo)成功后給藥，未發(fā)現(xiàn)有明顯的降血糖、升高體重的作用。故

14、分析通心絡(luò)對(duì)糖尿病腎臟的保護(hù)作用并不依賴于其調(diào)節(jié)血糖水平的效應(yīng)。 3.2 通心絡(luò)對(duì)抗氧化能力的影響 糖尿病并發(fā)癥發(fā)病的統(tǒng)一發(fā)病機(jī)制學(xué)說認(rèn)為，在持續(xù)高糖狀態(tài)下，線粒體活性氧基生成增加可能是糖尿病各種并發(fā)癥發(fā)生的中心環(huán)節(jié)1，2，引起糖尿病組織損害的四條通路多元醇通路激活、蛋白質(zhì)非酶糖化增加、pkc激活、己糖胺途徑激活實(shí)質(zhì)上都是高糖誘導(dǎo)的超氧化物過表達(dá)的結(jié)果。研究證實(shí)高血糖可誘導(dǎo)腎系膜細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)ros產(chǎn)生的增加6，當(dāng)ros的損傷作用超過機(jī)體的抗氧化作用時(shí)，便可通過激活pkc、mapk及核因子nf-rb7而進(jìn)一步影響血脂、蛋白及dna的損傷，最終導(dǎo)致慢性并發(fā)癥的發(fā)生。已有一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床

15、研究證實(shí)了通心絡(luò)具有保護(hù)超氧化物歧化酶(sod)活性、清除氧自由基的作用。秦鑒等8建立小鼠的缺血再灌注模型，觀察高、中、低劑量的通心絡(luò)對(duì)心肌組織sod活性、丙二醛(mda)水平，發(fā)現(xiàn)通心絡(luò)能夠提高缺血再灌注心肌的sod活性，降低mda水平，具有明顯的抗氧自由基損傷作用。張子新9等的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)同樣觀察到通心絡(luò)治療的家兔sod水平明顯升高。楊昆10觀察通心絡(luò)膠囊對(duì)25例冠心病患者的療效時(shí)發(fā)現(xiàn)，通心絡(luò)治療組血漿mda含量降低比對(duì)照組明顯，而紅細(xì)胞sod活性則明顯高于對(duì)照組。本研究旨在觀察通心絡(luò)對(duì)糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激及抗氧化能力的影響。結(jié)果顯示，與糖尿病大鼠相比，通心絡(luò)可以顯著增加還原性物質(zhì)gsh的含

16、量，降低腎皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物mda的含量，增強(qiáng)抗氧化酶sod、cat的活性，提高腎臟的t-aoc，從而提高腎臟的抗氧化能力，并減輕高糖引起的氧化損傷。以上結(jié)果顯示，通心絡(luò)可以增加機(jī)體的抗氧化能力，并在一定程度上清除過氧化物，降低高糖引起的氧化損傷。但其差異不明顯，可能與樣本量小，實(shí)驗(yàn)周期短有關(guān)。且具體分子機(jī)制尚待進(jìn)一步研究明確。 3.3 通心絡(luò)在糖尿病并發(fā)癥治療中的藥用價(jià)值 通心絡(luò)由人參、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鱉蟲、赤芍等藥物組成。現(xiàn)代藥理研究表明11，人參具有降血脂、血糖的功能，能延緩糖尿病的發(fā)生時(shí)間，降低尿糖，增高胰島神經(jīng)叢特別是內(nèi)神經(jīng)叢的膽堿酯酶活性；水蛭有利尿、消除尿蛋白的作用，并能改善

17、微循環(huán)；土鱉蟲、全蝎具有抗凝、抗血栓形成的作用；赤芍具有降低全血濃度、抑制血小板聚集，降低血小板粘附性，降低纖維蛋白原，抑制血栓形成等作用。全方具有擴(kuò)張血管、抗凝、降低血濃度、改善微循環(huán)的作用。臨床研究顯示，通心絡(luò)具有降低早期糖尿病腎病的et水平，降低腎小球高濾過，改善腎小球基底膜的作用，可有效地延緩糖尿病腎功能衰竭3。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通心絡(luò)可部分改善高糖引起的氧化損傷，增加機(jī)體的抗氧化能力。根據(jù)糖尿病并發(fā)癥的統(tǒng)一發(fā)病機(jī)制可以認(rèn)為，通心絡(luò)對(duì)糖尿病微血管病變的發(fā)生發(fā)展具有一定的防治作用，同時(shí)也證明糖尿病微血管并發(fā)癥屬于絡(luò)病范疇。但其確切作用及作用機(jī)制尚需大樣本的動(dòng)物及臨床研究進(jìn)一步證實(shí)。 【參考

18、文獻(xiàn)】 1 ceriello a.new insights on oxidative stress and diabetic complications may lead to a“causal” antioxidant therapy. diabetes care，2003，26(5)：1589-1596. 2 brownlee m. biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications. nature，2001 dec 13；414(6865)：813-820. 3 孫世寧，黃紅芳.通心絡(luò)膠囊對(duì)早期糖尿病腎病患者血漿、尿內(nèi)皮素的影響.新中醫(yī)，2004，36（4）：32-33. 4 west ic.radicals and oxidative stress in diabetes. diabet med，2000，17：171-180. 5 ha h，yang y， lee hb， et al. mechamisms of reactive oxygen species generation in llc