dvc高效液相色譜法的分析原理、應用及發(fā)展趨勢

1、高效液相色譜法的分析原理、應用及發(fā)展趨勢摘要 詳細介紹了高效液相色譜法的特點、類型以及分析原理，列舉了其在環(huán)境分析、食品分析、藥品分析中的應用，介紹了近幾年高效液相色譜法的發(fā)展趨勢。關鍵詞：高效液相色譜法 原理 應用 發(fā)展趨勢高效液相色譜法（high performance liquid chromatography hplc）是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。這種方法使以往的柱色譜達到了高速化，分離性能高，應用性廣，較其他

2、一些色譜法具有很多優(yōu)越性1。1 高效液相相色譜法的特點2高效液相色譜法比起經(jīng)典液相色譜法的最大優(yōu)點在于高速、高效、高靈敏度、高自動化。與經(jīng)典液相色譜法比較如下表：表1-1：高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法比較項目高效液相色譜法高效液相色譜法柱長/cm102510200柱內(nèi)徑/mm2101050固定相粒徑/m55075600理論塔板數(shù)（柱效）21035104250柱壓降/mpa5150.0010.3進樣量/g10-610-20.110分析時間/h0.051.0120氣相色譜法分析對象只限于分析氣體和沸點較低的化合物，它們僅占有機物總數(shù)的20。對于占有機物總數(shù)近80的那些高沸點、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量

3、大的物質(zhì)，目前主要采用高效液相色譜法進行分離和分析。他們之間的區(qū)別如下表：表1-2：高效液相色譜法與氣相色譜法比較項目高效液相色譜法氣相色譜法進樣方式樣品制成溶液樣品需氣化或裂解流動相溶液惰性氣體分離原理吸附、分配、篩析、親和等吸附和分配檢測器uvd、pdad、rid等tcd、fid、ecd等應用范圍低、中、高沸點有機化合物離子型無機化合物低沸點有機化合物熱不穩(wěn)定化合物永久性氣體生物活性分子總之，高效液相色譜法是吸取了氣相色譜與經(jīng)典液相色譜優(yōu)點，并用現(xiàn)代化手段加以改進，因此得到迅猛的發(fā)展。目前高效液相色譜法已被廣泛應用于分析對生物學和醫(yī)藥上有重大意義的大分子物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、多糖

4、類、植物色素、高聚物、染料及藥物等物質(zhì)的分離和分析。2 高效液相相色譜法的主要類型及其分離原理2.1 液-液分配色譜法及化學鍵合相色譜3在液-液色譜中,流動相和固定相都是液體,它能適用于各種樣品類型的分離和分析，無論是極性的和非極性的，水溶性和油溶性的，離子型的和非離子型的化合物。其分離原理與液液萃取基本相同，都是根據(jù)物質(zhì)在兩種互不相溶的液體中溶解度的不同，具有不同的分配系數(shù)。所不同的是液液色譜的分配是在柱中進行的，使這種分配平衡可反復多次進行，造成各組分的差速遷移，提高了分離效率，從而能分離各種復雜組分。當達到平衡時，物質(zhì)的分配服從下式： 式中，k是分配系數(shù)，cs和cm分別是溶質(zhì)在固定相和流

5、動相中的濃度，vm和vs分別是流動相和固定相的體積。2.2 液-固吸附色譜法4液-固吸附色譜是以固體吸附劑作為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體顆粒物質(zhì)，在它們的表面存在吸附中心。液固色譜實質(zhì)是根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來進行分離的。當流動相通過固定相（吸附劑）時，吸附劑表面的活性中心就要吸附流動相分子。同時，當試樣分子（x）被流動相帶入柱內(nèi)，只要它們在固定相有一定程度的保留就要取代數(shù)目相當?shù)囊驯晃降牧鲃酉嗳軇┓钟茫┯谑?，在固定相表面發(fā)生競爭吸附:式中xm和xa分別表示在流動相中的溶質(zhì)分子和被吸附的溶質(zhì)分子，sa代表被吸附在吸附劑表面上的溶劑分子，sm表示在流動相中的溶劑分子，n是被吸附

6、的溶劑分子數(shù)。溶質(zhì)分子x被吸附，將取代固定相表面上的溶劑分子，當達到平衡時，可用下式表示：式中，k為吸附平衡常數(shù)，亦分配系數(shù)。上式表明，溶劑分子吸附性強，則被吸附的溶質(zhì)分子將相應的減少。顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對它的吸附力強，保留值越大。2.3 離子對色譜法4 離子對色譜法是分離分析強極性有機酸和有機堿的極好方法，它是離子對萃取技術與色譜法相結(jié)合的產(chǎn)物。離子對色譜法是將一種（或數(shù)種）與溶質(zhì)離子電荷相反的離子（稱對離子或反離子）加到流動相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成離子對，從而控制溶質(zhì)離子保留行為的一種色譜法。關于離子對色譜機理，至今仍不十分明確，已提出三種機理：離子對形成機理；離子

7、交換機理；離子相互作用機理?，F(xiàn)以離子對形成機理說明之。假如有一離子對色譜體系，固定相為非極性鍵合相，流動相為水溶液，并在其中加入一種電荷與組分離子a-相反的離子b+，b+離子由于靜電引力與帶負電的人組分離子生成離子對化合物a-b+。離子對生成反應式 kab是其平衡常數(shù)，克表示為：根據(jù)定義，溶質(zhì)的分配系數(shù)根據(jù)上兩式，有式中為相比率。容量因子k隨kab和b+水相的增大而增大。離子對色譜法操作簡便，只要改變流動相的ph值、平衡離子的濃度和種類，就可在較大范圍內(nèi)改變分離的選擇性，能較好解決難分離混合物的分離問題。此法發(fā)展迅速，應用較廣泛.2.4 離子色譜法4離子色譜法是由離子交換色譜法派生出來的一種分

8、離方法，離子交換色譜法在無機離子的分析和應用受到限制，離子色譜法可同時測定多種無機和有機離子。他們在離子交換分離柱后加一根抑制柱，抑制柱中裝填與分離柱電荷相反的離子交換樹脂。通過分離柱后的樣品再經(jīng)過抑制柱，使具有高背景電導的流動相轉(zhuǎn)變成低背景電導的流動相，從而用電導檢測器可直接檢測各種離子的含量。這種色譜技術稱為離子色譜。若樣品為陽離子，用無機酸作流動相，抑制柱為高容量的強堿性陰離子交換劑。當試樣經(jīng)陽離子交換劑的分離往后，隨流動相進入抑制柱，在抑制柱中發(fā)生兩個重要反應：由以上反應可見：經(jīng)抑制柱后，一方面將大量酸轉(zhuǎn)變?yōu)殡妼Ш苄〉乃肆鲃酉啾镜纂妼У挠绊?。同時，又將樣品陽離子m+轉(zhuǎn)變成相應的

9、堿，由于oh-離子的淌度為cl-離子的2.6倍，提高了所測陽離子電導的檢測靈敏度。對于陰離子樣品也有相似的作用機理。2.5 離子交換色譜法4離子交換色譜法是利用離子交換原理和液相色譜技術的結(jié)合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)，通常都可用離子交換色譜法進行分離。它不僅適用無機離子混合物的分離，亦可用于有機物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子。因此，應用范圍較廣。其原理是利用不同待測離子對固定相親和力的差別來實現(xiàn)分離的。其固定相采用離子交換樹脂，樹脂上分布有固定的帶電荷基團和可游離的平衡離子。當待分析物質(zhì)電離后產(chǎn)生的離子可與樹脂上可游離的平衡離子進行

10、可逆交換，其交換反應通式如下：陽離子交換 陰離子交換達到平衡后，以濃度表示平衡常數(shù)kx為：分配系數(shù)dx為：2.6 空間排阻色譜法5 空間排阻色譜以凝膠為固定相，溶質(zhì)按分子大小分離。小分子可以擴散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰，全部在死體積前出峰；可對相對分子質(zhì)量在100-105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離。其分離原理如下圖：圖2-1：排阻色譜法分離示意圖圖中，下部分為相對分子質(zhì)量分布較窄的聚合物標準試樣的洗脫曲線，上部分表示洗脫體積和聚合物相對分子質(zhì)量之間的關系（即校正曲線）。由圖可見，凝膠有一個排斥

11、極限（a點），凡是比a點對應的相對分子質(zhì)量大的分子，均被排斥在所有的膠空之外，因而在保留體積vo時一起被洗脫，將以一個單一的譜峰1出現(xiàn)，顯然，vo是柱中凝膠填料顆粒之間的體積。另一方面，凝膠還有一個全滲透極限（b點），凡是比b點對應的相對分子質(zhì)量小的分子都可完全凝膠空中。在保留體積vm時一起被洗脫，將以一個單一的譜峰4出現(xiàn)，相對分子質(zhì)量介于上述兩個極限之間的化合物，將按相對分子質(zhì)量降低的次序被洗脫。當混合物的分子大小不同而又在此分級范圍內(nèi)時，它們就可得到分離。2.7 親和色譜5親和色譜是利用生物大分子和固定相表面存在某種特異性親和力，進行選擇性分離的一種方法。它通常是在載體（無機或有機填料）表

12、面先鍵合一種具有一般反應性能的所謂間隔臂（如環(huán)氧、聯(lián)氨等）；隨后，再連接上配基（酶、抗原或激素等）。這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子相互作用而被保留，沒有這種作用的分子不被保留。下圖為親和色譜法示意圖。圖2-2：親和色譜法示意圖 將上述高效液相相色譜法的不同類型于下表進行比較，可以看出因為各類型方法的分離機制不同可用于分離不同種類的混合物6。表2-1：不同類型分離方法比較吸附色譜分配色譜離子色譜排阻色譜親和色譜固定相全多孔固體吸附劑固定液載帶在固相基體上高效微粒離子交換劑具有不同孔徑的多孔性凝膠多種不同性能的配位體鍵聯(lián)在固相基體上流動相不同極性有機溶劑不同極性有機溶劑和水

13、不同ph值的緩沖溶液有機溶劑或一定ph值的緩沖溶液不同ph值的緩沖溶液，可加入改性劑分離原理吸附與解吸溶解與揮發(fā)可逆性的離子交換多孔凝膠的滲透或過濾具有鎖匙結(jié)構(gòu)絡合物的可逆性離解3 分離類型選擇依據(jù)73.1 根據(jù)相對分子質(zhì)量選擇 相對分子質(zhì)量十分低的樣品，其揮發(fā)性好，適用于氣相色譜。標準液相色譜類型（液一固、液一液、及離子交換色譜）最適合的相對分子質(zhì)量范圍是20o2000。對于相對分子質(zhì)量大于2000的樣品，則用尺寸排阻法為最佳。 3.2 根據(jù)溶解度選擇弄清樣品在水、異辛烷、苯、四氯化碳、異丙醇中的溶解度是很有用的。如果樣品可溶于水井屬于能離解物質(zhì)，以采用離子交換色譜為佳；如樣品可溶于烴類（如

14、苯或異辛烷），則可采用液一固吸附色譜；如樣品溶解于四氯化碳，則多采用常規(guī)的分配和吸附色譜分離；如樣品既溶于水又溶于異丙醇時，常用水和異丙醇的混合液作液一液分配色譜的流動相，以憎水性化合物作固定相。3.3 根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇用紅外光譜法，可預先簡單地判斷樣品中存在什么官能團。然后，確定采用什么方法合適。例如，酸、堿化合物用離子交換色譜；脂肪族或芳香族用液一液分配色譜、液一固吸附色譜；異構(gòu)體用液一固吸附色譜；同系物不同官能團及強氫鍵的用液一液分配色譜。4 高效液相色譜法的應用4.1 高效液相色譜法在環(huán)境分析中的應用由于化學工業(yè)的發(fā)展和天然化合物的開發(fā),使得環(huán)境污染越來越嚴重。據(jù)報道,被確認為環(huán)境污染

15、物的已超過350 種,人們能在水中、空氣中、污泥里、魚、禽體內(nèi)發(fā)現(xiàn)這些污染物。通過食物鏈,它們將進一步污染肉類、蛋類、糧食、蔬菜等。環(huán)境污染的檢測早已成為分析化學中重要的研究課題之一。h p l c 已在環(huán)境監(jiān)測中得到廣泛應用,特別適用于分子量大、揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差的有機污染物的分離和分析。如多環(huán)芳烴、酚類、多環(huán)聯(lián)苯、鄰苯二甲酸酯類、聯(lián)苯胺類、陰離子表面活性劑、有機農(nóng)藥、除草劑等,其中多數(shù)屬于美國環(huán)保局(epa)清潔水法案中頒布的114項優(yōu)先有機污染物范圍8。肖尚有等利用原柱富集-高效液相色譜法測定了水體中痕量鄰苯二甲酸二甲酯的含量，使用spherisorb c18色譜柱(250 mm 4.

16、 6 mm i. d. , 5m,大連依利特分析儀器有限公司)；洗脫流動相為v (甲醇)v (水) =6040混合液；流速為 0. 6 ml /min；柱溫為室溫；檢測波長為240 nm。rsd為2. 66%，精密度為2. 90%9。丁宗慶等利用凝固-漂浮分散液液微萃取-高效液相色譜法測定水樣中氯酚的含量，色譜條件為：tc-c18色譜柱( 150 mm 4.6mm，5 m，agilent 公司)；流動相為v( 甲醇)v( 水) = 70 30；流速為1. 0 ml/min;檢測波長為245 nm；柱溫為30 ，進樣體積為20 l。取得了較高的靈敏度、精密度和準確度10。陳素清等利用流動注射在線

17、預富集-高效液相色譜法測定水中的4-壬基酚和雙酚a含量，采用eclip se xdb2c18色譜柱；流動相為v (甲醇) v (水) = 93 7 ；混合液為流動相；流速為1. 0 ml /min,紫外檢測波長為227 nm；保留時間定性，外標法定量。重復測量11次的相對標準偏差為2. 3%和1. 5%11。梁麗麗等利用高效液相色譜法檢測水體中微囊藻毒素的含量，色譜條件：inerteilods23色譜柱(416 mm 250 mm, 5m)；柱溫25 ；流動相：v (0. 1% tfa) v (甲醇) =4258；流速：1 ml /min；進樣量：20l；檢測波長為239 nm。操作簡便、靈敏

18、度高、檢測速度快12。徐麗等利用高效液相色譜法分離檢測亞氯酸鹽與硫氧化合物混合物，采用phenomenex gemini c18分析柱(250 mm 4. 6 mm，5 m)，乙腈-水(含四丙基氫氧化銨(tpaoh)離子對試劑)作為流動相，利用紫外檢測器在230 nm 處對各物質(zhì)進行分離檢測。當流動相組成為:乙腈-7. 0 mmol /ltpaoh 水溶液(1585，v/v，ph 5 9)，流速為1. 0 ml/min 時，各物質(zhì)在15 min 內(nèi)都可以得到完全分離。用此方法對亞氯酸鹽-硫代硫酸鹽反應過程中各物質(zhì)進行跟蹤檢測，并進行動力學分析，在亞氯酸鹽過量的準一級條件下，測得ph 9. 0

19、時，亞氯酸鹽-硫代硫酸鹽反應體系的速率常數(shù)為9. 75 104 (mol /l) -2s-1，這與文獻報道的結(jié)果相符13。董杰等利用單滴液相微萃取-高效液相色譜法測定水中二甲戊樂靈農(nóng)藥殘留，最佳色譜條件為：hypersil ods色譜柱(200 mm 4. 6 mm，5m ods c218微粒，美國安捷倫公司)；流動相為100%甲醇；流速0. 8 ml /min；柱溫25 ;；2l進樣量，檢測波長為235 nm。相對標準偏差(rsd)在215%3. 4%，具有較高的精密度14。4.2 高效液相色譜法在食品分析中的應用近年來，由于人們生活水平的提高和食品安全問題的頻發(fā)，使得人們對食品質(zhì)量的關注越

20、來越高，這就需要找出一種可以快速準確檢測食品成分的有效方法，hplc 可以廣泛地用于檢測食品的農(nóng)藥殘留，食品中過量的食品添加劑，食品中違禁成分；也可用于食品中營養(yǎng)成分的分析15。王娟等利用反相高效液相色譜法測定牛奶中的主要蛋白質(zhì)，采用agilentzorbax 300sb-c8( 250 mm4. 6 mm，5 m) 色譜柱，三氟乙酸-水-乙腈流動相梯度洗脫，214 nm 檢測，柱溫45 ，外標法定量。測定-cn，s2-cn，s1-cn，-cn，whey 和igg 的線性關系良好，相關系數(shù)均大于0. 999，加標回收率在74. 8% 132. 5%之間。測定了國內(nèi)外9 種不同品牌純牛奶商品中蛋

21、白質(zhì)的含量，同時與蛋白質(zhì)分析儀測定結(jié)果進行了比較，相對誤差在7. 0%9. 2%之間，準確度較高16。 彭青枝等利用高效液相色譜法測定罐裝食品中雙酚a的含量，色譜條件是：g lobal chroma tog raphy c18色譜柱，乙腈+ 0. 02 mo l/l乙酸銨溶液為流動相梯度洗脫，熒光檢測器，激發(fā)波長：28 nm；發(fā)射波長：310 nm。相對標準偏差分別為3. 1%、4. 9%，該方法簡便快速、靈敏準確17。 華永有等利用高效液相色譜法測定燕窩類保健品中唾液酸的含量，采用grace apo llo c18 色譜柱( 250 mm4. 6 mm, 5 m )； 流動相為甲醇- 0.

22、1% 磷酸( 2575)；流速為1. 0 m l/m in；柱溫為40 紫外檢測波長201 nm。rsd為1.13%本方法靈敏度高、重復性好，可準確測定燕窩類保健品中唾液酸的含量，為真假燕窩制品的鑒別提供了一種行之有效的方法18。 陳磊等利用高效液相色譜法同時檢測黃酒中的5-羥甲基糠醛和9種多酚，采用diamonsil c18柱(150 mm4. 6 mm，5 m) 分離，柱溫為42 ，檢測波長為280 nm，流動相為乙腈和3%乙酸水溶液，梯度洗脫，20 min 內(nèi)10 種物質(zhì)得到了較好的分離。各化合物回歸方程的相關系數(shù)r為0. 99110. 9995，檢出限為0. 20. 5 mg /l;

23、相對標準偏差rsd2. 4 %。結(jié)果滿足定量分析要求19。 王小芳等利用高效液相色譜熒光檢測法測定雞蛋中三種雌激素，目標化合物以水/甲醇/乙腈( 50!30!20，v / v /v)為流動相，過xterrarp18色譜柱( 5m，4.6 mm150 mm )，熒光檢測器進行檢測，相對標準偏差為1. 52% 5. 11%，方法簡便、精確20。4.3 高效液相色譜法在藥品分析中的應用隨著色譜技術的發(fā)展，結(jié)合計算機各種軟件的開發(fā)，使hplc與各種檢測儀器聯(lián)用，更加拓寬了hplc的應用范圍，如hplc-ms聯(lián)用技術是以高效液相色譜為分離手段，以質(zhì)譜為鑒定工具的一種分離分析技術，具有高度的專屬性,，對多

24、數(shù)藥物的檢測靈敏度超過其他分析方法，使定量測試速度顯著加快，可以對混合物中的微量組分進行分析。hplc法在中藥有效成分測定、中藥質(zhì)量控制和中藥藥物動力學等方面的廣泛應用,其具有分離性能好、適用范圍廣、分析速度快、選擇性好、靈敏度高、樣品用量少等優(yōu)點。隨著與質(zhì)譜、串聯(lián)質(zhì)譜等聯(lián)用技術的逐步發(fā)展與完善,高效液相色譜法將在中藥鑒定、中藥活性成分分析、中藥及其制劑生產(chǎn)的質(zhì)量監(jiān)控等方面起到重要的作用，成為分離、鑒定和含量測定的首選手段21。史雪靖利用hplc法測定復方芩連膠囊中黃芩苷的含量，采用hplc - uv 法, 色譜柱為d iamonsil c18 ( 250mm4.6mm, 5m) ; 流動相為

25、甲醇-水-磷酸( 55: 45: 0.2)；檢測波長為280nm；流速為1.0ml/min；柱溫為30，rsd =1.05%。本方法操作簡便、靈敏度高、準確性和重現(xiàn)性好22。張崇禧等利用hplc分析暴馬丁香不同部位的紫丁香苷含量，利用alltech 高效液相色譜儀對暴馬丁香不同部位中的紫丁香苷含量進行了測定, 色譜柱為ods- c18( 4. 6mm250mm, 5um)，測定紫丁香苷的流動相為乙腈水( 1288)，體積流量1ml/ min，柱溫為室溫，檢測波長265nm。結(jié)果表明：紫丁香苷在0.1- 7. 0g與峰面積具有良好的線性關系, 紫丁香苷含量為韌皮部3. 593%枝皮1.174%

26、干皮1.166%木栓層0. 568%枝條 0. 509% 根0. 421% 木質(zhì)部0. 104%。該方法簡便可靠、快速、重現(xiàn)性好，適用于暴馬丁香中紫丁香苷的含量測定23。蔣心惠等利用高效液相色譜法測定硫酸特布他林與紅細胞膜表面2 腎上腺素受體結(jié)合量，色譜柱為c18柱，以0. 020 mol /l kh2po4溶液( 含0. 25% 三乙胺，ph 5. 1) -甲醇( 2080，v/v) 為流動相，在熒光激發(fā)波長280 nm，發(fā)射波長320 nm 處測定樣品含量。測定重復性相對標準偏差為0. 8%和1. 2%，準確度較高24。馮仕銀等利用高效液相色譜法測定人血漿及尿液中頭孢呋辛和舒巴坦的含量。采

27、用welchmaterials xb2c18分析柱( 150 mm4. 6 mm, 5 m ) ，流動相為乙腈20. 01 mol/l kh2 po4 (血漿測定15 85(v /v ) ，尿樣測定1090 (v /v )，含0. 04%三乙胺,以h3 po4 調(diào)節(jié)至ph 3. 2)，流速1. 0 ml /min,紫外檢測波長sul為220 nm、cxm及內(nèi)標咖啡酸為274 nm。血漿樣品在酸性條件下用乙醚提取濃集后進樣,以內(nèi)標法進行定量分析。本方法快速簡便，靈敏準確，可用于同時測定血漿及尿中sul和cxm濃度,亦可用于藥代動力學、生物利用度研究25。5 高效液相色譜法的發(fā)展趨勢5.1 高效液

28、相色譜法與質(zhì)譜法聯(lián)用質(zhì)譜法(mass spectrometry, ms)，即用電場和磁場將運動的離子（帶電荷的原子、分子或分子碎片）按它們的質(zhì)荷比分離后進行檢測的方法，測出了離子的準確質(zhì)量，就可以確定離子的化合物組成。hplc-ms聯(lián)用技術是以高效液相色譜為分離手段，以質(zhì)譜為鑒定工具的一種分離分析技術，具有高度的專屬性26.27。馬晨晨等利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定細菌群體感應效應的11 種ahls 類信號分子，色譜條件為waters sunfire c18色譜柱( 50 mm2.1 mm，3.5m) ；流速: 0.2 ml /min；進樣量：10l；分析時間：12 min；柱溫：35

29、；流動相a為甲醇( 2 mmoi /l 乙酸銨，0.1% 甲酸)，b 為水( 2 mmoi /l乙酸銨，0. 1% 甲酸)。質(zhì)譜條件為：采用電噴霧離子源(esi)，離子源溫度120，脫溶劑溫度350 ；脫溶劑氣和錐孔氣n2，脫溶劑氣流速500 l /h，錐孔氣流速50 l /h，碰撞氣體為氬氣;毛細管電壓為3.50 kv； 掃描方式為正離子掃描，駐留時間50 ms；監(jiān)測模式為mrm 模式。結(jié)果相對標準偏差為3.5% 13.9%。本方法操作簡便、快速、準確、靈敏度高28。 戴琳等用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中蟲酰肼和甲氧蟲酰肼殘留，色譜條件為sunfire系列c18反相色譜柱(150

30、 mm211mm315m,waters公司)；柱溫：室溫；流動相：011%甲酸溶液(a)和甲醇(b)；梯度洗脫程序：0 min時20%b；0310 min線性增加至90%b；3812 min90%b；812815 min降至20%b；之后進行系統(tǒng)平衡。流速：0125 ml / min；進樣量：20l。質(zhì)譜條件為正離子檢測模式；離子源溫度360 ；電離電壓418 kv；霧化氣和氣簾氣：n2；流量：116 l /min；輔助氣：n2；流量：17 l /min。監(jiān)測模式：采用srm模式。結(jié)果相對標準偏差小于8%，該法簡單、靈敏，準確度較高29。5.2 微柱高效液相色譜法高效液相色譜法具有很多優(yōu)點但也

31、存在一些不足，如流動相消耗量大，所用溶劑大多有毒且價格昂貴等。特別是對于一些較復雜樣品的分析，用單相分離分析方法往往很難完成。微柱高效液相色譜由于填充粒度小而密集，就等效于理論塔板數(shù)的增多，可使色譜柱的柱效提高。采用內(nèi)徑較小的柱子，可使縱向擴散減少，峰展寬效應大大降低，進而縮短了分析時間又提高了檢測靈敏度。采用微柱還可以分析極少量的樣品,使流動相用量大為減少，利于節(jié)約溶劑和環(huán)境保護30。5.3 進樣富集處理 對于流體中待檢物含量較少，基質(zhì)干擾較大的待測物，直接使用高效液相色譜法檢測靈敏度不高，需對待測物進行富集處理，固相萃?。╯olid-phase extraction，簡稱spe）是近年發(fā)展

32、起來一種樣品預處理技術，由液固萃取和柱液相色譜技術相結(jié)合發(fā)展而來，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預處理過程，操作簡單、省時、省力。固相萃取-高效液相色譜法已得到廣泛應用31。6 高效液相色譜法的前景展望 高效液相色譜法出現(xiàn)于20世紀70年代初，80年代趨于成熟。由于其具有分離分析效能高、速度快、檢測靈敏度高等特點而被廣泛應用在化學化工、商品檢驗、食品衛(wèi)生、環(huán)境檢測、藥品分析等諸多領域。但是，隨著人們對檢測靈敏度和精確度的提高，高效液相色譜法需要在提高自身檢測能力的同時與其他先進檢測方法有效聯(lián)合。我們相信，

33、高效液相色譜法會得到更廣泛的使用。參考文獻1 嚴拯宇儀器分析m長沙東南大學出版社，2009：266-2672 周梅村儀器分析m武漢華中科技大學出版社，2008：271-2723 馮玉紅現(xiàn)代儀器分析使用教程m北京北京大學出版社，2008：204 朱明華儀器分析m北京高等教育出版社，2008：71-755 陳集，朱鵬飛儀器分析教程m北京化學工業(yè)出版社2010：202-2036 杜一平現(xiàn)代儀器分析方法m華東理工大學出版社2008：787 葉憲曾，張新祥等儀器分析教程m北京北京大學出版社2007:3708 趙黎高效液相色譜在環(huán)境分析中的應用j科技資訊，2008， (16)：111-1139 肖尚有，王

34、杰鋒等原柱富集-高效液相色譜法測定水體中痕量鄰苯二甲酸二甲酯j分析化學研究簡報，2009，37(8)：1193-119610 丁宗慶，張瓊瑤凝固-漂浮分散液液微萃取-高效液相色譜法測定水樣中氯酚j分析化學研究報告，2010，38(10)：1400-140411 陳素清，梁華定等流動注射在線預富集-高效液相色譜法測定水中的4-壬基酚和雙酚aj分析化學研究簡報，2008，36(7)：959-96312 梁麗麗，弓愛君等高效液相色譜法檢測水體中微囊藻毒素j分析化學研究簡報，2010，38(5)：740-74213 徐麗，鄭菊花等高效液相色譜法分離檢測亞氯酸鹽與硫氧化合物混合物j分析化學研究簡報，2010，38(4)：537-54114 董杰，曹鵬等單滴液相微萃取-高效液相色譜法測定水中二甲戊樂靈農(nóng)藥殘留j分析化學研究