有毒有害物質(zhì)的快速檢測

1、1、傳統(tǒng)的檢測方法：（1）生物鑒定法（2）儀器分析紫外分光光度測定法質(zhì)譜法、薄層層析、高效液相法特點(diǎn)：較準(zhǔn)確，但操作麻煩，儀器設(shè)備昂貴。2、快速檢測方法微柱法、選擇吸附真菌毒素法免疫學(xué)檢測的優(yōu)點(diǎn)：方便、快速、定性、定量競爭法競爭法ELISA原理原理如圖所示.在進(jìn)行測定時(shí)首先將包被了抗體的酶標(biāo)板的微孔分為測定孔和對照孔，在對照孔中加入已知濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液和酶標(biāo)記物；在測定孔中同時(shí)加入酶標(biāo)記物和待檢樣本（抗原），酶標(biāo)記物和樣品互相競爭包被抗體的結(jié)合點(diǎn)，形成酶標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物固定在微孔內(nèi)，沒有吸附的酶標(biāo)記物通過洗滌去除，加入底物溶液于微孔中，復(fù)合物上的酶催化底物使其水解、氧化還原成為有色的產(chǎn)

2、物。當(dāng)測定孔內(nèi)的樣本不含抗原時(shí)，固相上的抗體將和酶標(biāo)記物結(jié)合加入底物后呈色較深，當(dāng)樣本含有抗原時(shí)，樣本中的抗原和酶標(biāo)記物共同競爭抗體的結(jié)合位點(diǎn)，酶標(biāo)抗原的比例越高，結(jié)合在固相抗體上的酶標(biāo)抗原就越多，酶標(biāo)抗原的比例越低，結(jié)合在固相上的抗體就越少，而在一定的條件下，復(fù)合物上酶的量（也反映了固定化的抗原抗體復(fù)合物的量）和酶產(chǎn)物呈現(xiàn)的色澤成正比，因此可以用分光光度計(jì)進(jìn)行測定，從而計(jì)算出參與反應(yīng)的抗原和抗體的量，從而進(jìn)一步得知樣本中抗原的多少。這就是競爭法ELISA的原理。測定孔EEEEE酶標(biāo)記物底物溶液對照孔EEEEEEEEEEEEEEE酶標(biāo)記物底物溶液參考液(不含抗原)EE樣本(含抗原)ELISA試

3、驗(yàn)的建立：1、抗原的包被將AFB1與牛血清白蛋白連接形成完全抗原2、封阻在酶標(biāo)的微孔中加入封阻劑劑如BSA、脫脂牛奶等封阻未被子抗原包被的空隙。3、抗原抗體竟?fàn)幏磻?yīng)4、酶標(biāo)二抗與抗原抗體復(fù)合物的反應(yīng)5、底物顯色和吸光值的測定6、ELISA竟?fàn)幰种魄€1、1994年建立了規(guī)范的AFB1單克隆抗體酶聯(lián)免疫檢測方法，該法已列為國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 5009.22-1996）。 2、 1991年T-2毒素的免疫檢測方法由衛(wèi)生部食檢所陽傳和、羅雪云、計(jì)融于建立（GB/T 14933-94），方法最低檢出量為1ng/ml，敏感范圍為4-1000ng/ml。這是首次采用免疫技術(shù)建立的檢測真菌毒素的國家標(biāo)準(zhǔn) 。3、1995年，北京市營養(yǎng)源研究所路戈等也建立了ZEN單克隆抗體免疫檢測方法，最低檢出量為1ng/ml，敏感范圍5-1000ng/ ml。4、赭曲霉毒素A（OA）1992陽傳和、羅雪云等又建立了OA單克隆抗體免疫檢測方法，也已經(jīng)被批準(zhǔn)為國家標(biāo) 5、黃曲霉毒素M1（AFM1）我國規(guī)定牛乳中AFM1的含量不得超過0.5g/kg，乳制品按實(shí)際含乳量折算(GB 9676-88) 1996年，衛(wèi)生部食檢所李燕俊、計(jì)融開始研究AFM1的免疫檢測將樣品直接加入到顯色池中，向顯色