細(xì)胞培養(yǎng)箱清潔

1、細(xì)胞培養(yǎng)箱的清潔和消毒1. 培養(yǎng)箱消毒：先用純水擦洗，再用 95 的酒精擦洗，再照紫外就可以拉！ 注意周圍環(huán)境的清潔就不會(huì)那么容易污染的拉！2. 我的經(jīng)驗(yàn)是在補(bǔ)充水時(shí)最好把水加熱一下，達(dá)到培養(yǎng)箱的溫度。3. 這么早就養(yǎng)細(xì)胞了，我們這里一般是用 70的乙醇擦洗，然后再用 0.1 的新潔爾滅擦洗，不放心的話再用高錳酸鉀加甲醛 1：1 比例熏一遍。注意要是 熏的話千萬注意混合之后馬上離開， 然后密閉細(xì)胞培養(yǎng)室， 味道很刺激的。 最好 在養(yǎng)細(xì)胞前消毒，否則，確實(shí)沒地方放細(xì)胞。4. 我們的方法比較簡(jiǎn)單，先用 75%酒精擦拭內(nèi)壁，通風(fēng) 10 分鐘，紫外線照 射 30 分鐘即可。5. 我們的通常處理是先用

2、75%的酒精擦拭內(nèi)壁， 然后用甲醛 +高錳酸鉀熏蒸 一個(gè)晚上，然后通風(fēng)一整天（同時(shí)打開紫外線照射）。6. 我們是把培養(yǎng)箱里的板層拿出來高壓一下，箱壁用 75酒精擦一遍，換 用詩(shī)樂氏擦一遍，再紫外照一夜，效果很好，其他的請(qǐng)高手指教。7. 熏蒸后吹一天是絕對(duì)不夠的，最起碼要一個(gè)星期才可以讓甲醛散盡，要 不細(xì)胞長(zhǎng)不好的8. 有的培養(yǎng)箱能加熱內(nèi)壁到 90 度，也有的帶有紫外線功能。 常規(guī)應(yīng)該每周 用酒精擦洗內(nèi)部一次。 具體的操作請(qǐng)參考培養(yǎng)箱的手冊(cè)， 或著咨詢培養(yǎng)箱技術(shù)支 持。使用消毒劑應(yīng)小心，培養(yǎng)箱內(nèi)有檢測(cè)溫度、濕度和二氧化碳濃度的傳感器， 腐蝕性消毒劑或有機(jī)溶劑有可能損壞某些器件， 請(qǐng)慎用。 另外，

3、揮發(fā)性的甲醛有 毒，易燃、易爆。如果在培養(yǎng)箱內(nèi)殘留甲醛的話，細(xì)胞會(huì)死光光哦（我實(shí)驗(yàn)室的 真實(shí)故事）?？傊?，先看培養(yǎng)箱手冊(cè)，再聯(lián)系技術(shù)支持，方可萬無一失啊。9. 常規(guī)最好什么也不放！硫酸銅的作用是抑制細(xì)菌生長(zhǎng)（但多數(shù)用在處理 污染的孔板）。因?yàn)楝F(xiàn)在的孵箱都有抑菌功能。10. 我們實(shí)驗(yàn)室的做法 :把平皿高壓滅菌后 , 在無菌操作臺(tái)內(nèi)加入適量的滅 菌雙蒸水或者生理鹽水 . 再加少量新潔爾滅 ,濃度沒關(guān)系 . 細(xì)胞養(yǎng)的都可以 .11. 我建議1 最好先把培養(yǎng)箱徹底消毒 . 具體方法也是用 75%的酒精好好清洗培養(yǎng)箱2, 操作時(shí)嚴(yán)格按照無菌操作的原則3 我認(rèn)為雙抗的更換問題倒是不大 , 除非你正在使用的

4、是污染的抗生素4 盡量減少觀看細(xì)胞的次數(shù)及時(shí)間 .12. 我們實(shí)驗(yàn)室清潔培養(yǎng)箱的方法： 用洗衣粉或洗潔精洗一遍清水沖凈 84 消毒液洗清水沖凈 75酒精擦洗一遍13. 這是我們實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的培養(yǎng)箱消毒方法 （一般一個(gè)月一次） ，希望對(duì)你 會(huì)有用14. 首先把培養(yǎng)箱里的東西全部取出， 放盡培養(yǎng)箱里的三蒸水； 反復(fù)用三蒸 水沖洗培養(yǎng)箱，然后用 75%酒精擦 3 遍，之后再用三蒸水擦 3 遍；培養(yǎng)箱里的架 子先用自來水反復(fù)沖洗，然后用蒸餾水、三蒸水、 75%酒精各擦 3 次，于紫外下 照射消毒 1 h 左右；最后將三蒸水（里面應(yīng)加少許染料）加入培養(yǎng)箱，將消毒好 的架子放入即15. 培養(yǎng)箱應(yīng)放置無菌室

5、, 水中應(yīng)加適量的疊氮鈉 （防腐）或者硫酸銅 , 注意 空氣消毒 .16. 消毒培養(yǎng)箱的常用方法有兩種： 把細(xì)胞移出，記住擰緊瓶蓋，通常放在超凈臺(tái)內(nèi)，室溫一兩個(gè)小時(shí)，問題不大。 如培養(yǎng)室有空調(diào)，也可將空調(diào)打開。然后先用 75%酒精棉球擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁，注 意不要漏掉任何一個(gè)角落。 擦拭兩遍后用一蒸水或二蒸水清洗內(nèi)壁， 可多清洗幾 遍。最后用消過毒的棉球或 75%酒精棉球把內(nèi)壁再擦拭一遍即可。整個(gè)操作沒有 必要在無菌條件下。 最后可在培養(yǎng)箱的水里加上亞甲基藍(lán)， 混勻即可。 亞甲基藍(lán) 溶液可起到一定的抑菌殺菌作用。 待培養(yǎng)箱內(nèi)酒精幾乎揮發(fā)完時(shí)， 將細(xì)胞放入培 養(yǎng)箱中。還有一種辦法就是直接用蒸餾水清洗

6、完，然后再用紫外燈照 （ 最好是那種培養(yǎng)箱 里就帶有紫外燈的，就方便多了。 ）通常培養(yǎng)箱是需要定期清洗的， 我們室是 1-2 月清洗一次， 當(dāng)然這要根據(jù)細(xì)胞養(yǎng) 的多少和培養(yǎng)箱使用的頻繁程度來決定的。17. 我們實(shí)驗(yàn)室液發(fā)生過類似事件， 我把我們處理過程告訴你， 希望對(duì)你有 幫助：首先消毒培養(yǎng)箱， 如果你們有兩個(gè)或以上培養(yǎng)箱就好辦了， 如果只有一個(gè)且還有 很多其他細(xì)胞就麻煩點(diǎn)。 只能暫時(shí)的放在超凈臺(tái)上。 具體如下， 中午將空調(diào)溫度 打到最高（也只有 31 度），超凈臺(tái)開紫外。下午早點(diǎn)來關(guān)紫外，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶 蓋蓋緊，轉(zhuǎn)到超凈臺(tái)內(nèi)，用 75酒精擦洗培養(yǎng)箱，再用無臭氧型可移動(dòng)的紫外 等照射半小時(shí)，然后

7、將細(xì)胞放回，松開蓋口即可（切記C02瓶子閥門要關(guān)緊啊，不然氣全跑光了）。一般實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)了霉菌的話，肯定要全部消毒。再消毒實(shí)驗(yàn)室， 先把室內(nèi)空調(diào)和消毒柜過濾網(wǎng)都拆下清洗， 在錐形瓶?jī)?nèi)加點(diǎn)高錳 酸鉀，放在實(shí)驗(yàn)室地上，然后倒入甲醛，立馬關(guān)門走人就可以了。2天后再開門裝好東西，和往常一樣開始工作了。由于 2天不能做事，個(gè)人細(xì)胞 要先計(jì)劃好，大家都可以休息兩天。18. 我們實(shí)驗(yàn)室是將細(xì)胞全部取出，酒精擦洗培養(yǎng)相，然后用紫外線照射 4 小時(shí)以上，污染細(xì)胞全部丟掉。還有就是培養(yǎng)室也采用紫外線消毒19. 我也碰過這個(gè)情況， 是自己的基礎(chǔ)培養(yǎng)基污染了， 光鏡下面可以看見瓶 底有細(xì)細(xì)的黑色小顆粒，但具體原因不詳。處

8、理方法：1、被污染的細(xì)胞全部照過紫外線 2小時(shí)以上后扔掉；2、同一批的培養(yǎng)基、使用的細(xì)胞清洗液等等全部重新濾過消毒（有點(diǎn)舍不得全 部扔掉，就嘗試了一下，結(jié)果證明是可以的）；3、打開培養(yǎng)箱，用 75%酒精擦洗，然后用新潔爾滅擦洗（此步驟我們重復(fù)了 2 次，隔天），用紫外照射 4 小時(shí)以上；4、清掃培養(yǎng)室，紫外照 4 小時(shí)以上，重復(fù)一次； 后來就沒有啦。：）如果污染嚴(yán)重的話，那就要重復(fù)重復(fù)再重復(fù)了。20. 偶也在年前遇到兩次大爆發(fā)， 先是真菌后是細(xì)菌。 搞得我對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)都 快失去信心了， 我養(yǎng)細(xì)胞都一年半了， 平時(shí)細(xì)胞沒什么， 感覺養(yǎng)細(xì)胞是很簡(jiǎn)單的 事，可是當(dāng)污染大爆發(fā)時(shí)真的有招架不住的感覺。 記

9、得當(dāng)時(shí)丟掉了幾乎所有的細(xì) 胞，近一百瓶，就只剩下保種的三兩瓶，寒！至于處理方法，也就是乳酸熏 蒸（記得把培養(yǎng)箱及超凈臺(tái)打開）之后一周關(guān)門關(guān)窗，不再進(jìn)培養(yǎng)室，一周后 75%酒精做徹底滅菌，也就是用酒精搽培養(yǎng)箱及培養(yǎng)室里的所有平面，甚至包括 地面。到現(xiàn)在有四個(gè)月了，偶的細(xì)胞一直很好。建議不要驚慌，所謂兵來將擋， 水來土掩。呵呵呵，一切會(huì)好起來的。21. 看來你要大動(dòng)干戈了。 首先考慮培養(yǎng)基的問題。 可以單獨(dú)放置一瓶培養(yǎng) 基到其他的培養(yǎng)箱里培養(yǎng) 24 小時(shí)看看是不是培養(yǎng)基污染。不過建議還是全部扔 掉重新配置比較好。 其次考慮培養(yǎng)箱和培養(yǎng)室的問題。 基本上應(yīng)該每一個(gè)月將培 養(yǎng)箱徹底消毒一次的。首先用

10、75酒精擦洗，一般的培養(yǎng)箱都是可以拆卸的， 將能拆卸的部分拆開擦洗后放到烤箱里烘烤（ 180度 5個(gè)小時(shí)）。剩下的培養(yǎng)箱 里用戊二醛擦洗后用紫外燈反復(fù)照射。 然后在要用培養(yǎng)箱培養(yǎng)室之前再用紫外燈 照射消毒 2 小時(shí)。你的照片里顯示的應(yīng)該是細(xì)菌污染，咳比較好對(duì)付。22. 設(shè)置 5，卻顯示 5.1 （當(dāng)然這點(diǎn)差距實(shí)在不算太大，至于顯示 HIGHC02那是可以自己設(shè)定的，你可以自己設(shè)定二氧化碳濃度達(dá)到多少時(shí)報(bào)警（也 即顯示HIGHC02同時(shí)可能發(fā)出警鳴音，如果你沒有按MUTE按鈕或同等設(shè)置）， 同樣地，你可以設(shè)置下限，還有溫度的上下限），培養(yǎng)箱溫度升高時(shí)C02濃度會(huì)增加，反之亦然。檢查一下你的 C0

11、2減壓閥上面顯示的壓力指示是否超過 0.08MPa,長(zhǎng)期過高的C02壓力容易損壞培養(yǎng)箱內(nèi)C02壓力調(diào)節(jié)模塊，那樣需要 很多銀子修理的。如果情況進(jìn)一步惡化，建議聯(lián)系售后服務(wù)。23. 手提式紫外燈24. 1）一個(gè)大原則是： 細(xì)菌和細(xì)胞體系是完全不同的， 絕不可以放在一起，一般實(shí)驗(yàn)室均設(shè)置細(xì)菌間、細(xì)胞間，嚴(yán)格的分開是成功培養(yǎng)細(xì)胞的保證。2）關(guān)于CO2培養(yǎng)箱的清潔工作，應(yīng)該說不難。由于為不銹鋼材，你用 0.1%新潔 爾滅擦洗干凈后，在用2%勺CuSO4青洗（清霉菌，在CO2條件下霉菌很易生/）， 最好用70%L醇噴霧消毒箱內(nèi)空氣。再?zèng)龈珊螅俚撞吭偌?2%CuSO4水稍出現(xiàn) 蘭色即可） 的滅菌水進(jìn)行穩(wěn)

12、定培養(yǎng)箱， 待培養(yǎng)箱溫度和濕度穩(wěn)定后， 再用一瓶細(xì) 胞預(yù)實(shí)驗(yàn)一下，培養(yǎng) 2-3 天，沒有問題再進(jìn)行培養(yǎng)。25. 有的培養(yǎng)箱可以直接高溫干烤滅菌的，或者有的金屬架可以干烤26. 底部水盤加入蒸餾水后見到一片一片的東西，很可能是細(xì)菌群落的生 長(zhǎng)！個(gè)人經(jīng)驗(yàn)是，必須清洗，而且是徹底清洗干凈！拆開支架和每層的托盤，包 括水盤（注意拆卸最好先向技術(shù)員了解內(nèi)部結(jié)構(gòu)，以防誤拆損壞），用碘伏棉球 將培養(yǎng)箱里里外外和拆出來的部件拭擦 2次，然后再用酒精將殘留碘伏拭去。 下 一步是，打開培養(yǎng)箱的門，開紫外照射過夜，這樣就可放心了。我剛回來就是如 此弄的，培養(yǎng)的細(xì)胞并沒有感染跡象，活力甚佳，供參考！祝你好運(yùn)！27.

13、我使用的方法是：1 取下培養(yǎng)箱內(nèi)的隔板及掛鉤，用清水清洗干凈后，75%酒精徹底擦洗消毒，然后 120 度烤箱，考 1 小時(shí)。2，培養(yǎng)箱用清水擦洗干凈后用 75%酒精徹底擦洗消毒3，帶無菌手套，安裝好培養(yǎng)箱內(nèi)的隔板及掛鉤4，打開培養(yǎng)箱紫外燈照射 30分鐘5，高壓蒸餾水后加入 我們一直就是這樣做的，效果很好，可以試試看啊。28. 補(bǔ)充一個(gè)水盤消毒的法子：清水清洗干凈，75%酉精徹底擦洗消毒后,多弄些酒精上去，點(diǎn)火燒一下效果杠杠的！29. 把平皿高壓滅菌后 , 在無菌操作臺(tái)內(nèi)加入適量的滅菌雙蒸水或者生理鹽 水. 再加少量新潔爾滅 , 濃度沒關(guān)系30. 水套式，氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱。31. 細(xì)胞生長(zhǎng)的

14、環(huán)境要求有一定濕度，必須加水！我的小經(jīng)驗(yàn)是： 1 、雙蒸 水裝在 5L 瓶中，2、高溫滅菌， 3、移進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室， 在紫外照射下冷卻， 4、 6 小時(shí)后，在加入培養(yǎng)箱中使用。如果發(fā)現(xiàn)托盤中的說有白色漂浮物存在是， 盡量吸干?。ù宋锟紤]是霉菌污染） ; 還有如果有條件，就是定期 75酒精大清潔！我一般 2 個(gè)月清潔一次?。ò?細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室）這樣在無菌操作下，基本保證你免除污染！32. 培養(yǎng)箱內(nèi)不加水是不正規(guī)的，因?yàn)榧?xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境要求有一定濕度。 我們培養(yǎng)細(xì)胞不僅經(jīng)常保持有水， 而且培養(yǎng)液中不加任何抗生素。 只要無菌操作 過關(guān)，不會(huì)發(fā)生細(xì)菌污染。33. 我們實(shí)驗(yàn)室平常培養(yǎng)箱的消毒方法：（清

15、潔前最好開紫外 30 分鐘） 1、隔板的清潔：先將隔板卸下，用干凈紗布沾新潔而滅擦兩遍； 2、箱內(nèi)壁用新潔而滅擦拭后再噴 75酒精，關(guān)門熏蒸 15 分鐘；3、盛蒸餾水的盤子：把盤里的水倒掉，用新潔而滅擦拭，干后倒入三蒸水；4、裝好板后，再噴 75酒精關(guān)門熏蒸 30 分鐘。5、培養(yǎng)室開紫外照 30 分鐘以上。34. 我們實(shí)驗(yàn)室是將全部隔板卸下， 新潔而滅擦拭， 放在超凈工作臺(tái)內(nèi)紫外 殺菌，C02孵箱內(nèi)用紫外燈照射12h以上。35. 推薦方法：拆卸隔板，新潔兒滅搽 3 次，然后酒精搽 3次，紫外下面照2 小時(shí)，然后裝上隔板，箱壁同樣處理，打開箱子，用小紫外燈或房間紫外燈照2 小時(shí)。注意要搽頂部的螺旋槳。裝好后，噴酒精即可。另外，還是用用硫酸銅 比較好，飽和溶液放置在箱子底部。屢試屢爽，大約可以管 3-4 個(gè)月沒有問題。 如有效，請(qǐng)斑竹加分，謝謝！37.36. 加硫酸銅的目的是為了防止真菌的生長(zhǎng) , 但硫酸銅容易改變孵箱 pH 值, 所以建議不加硫酸銅 ,直接加蒸餾水即可 ,保持孵箱濕度 .前一段時(shí)間培養(yǎng)箱里老是有散在的細(xì)胞霉菌污染。培養(yǎng)箱高溫消毒后， 現(xiàn)在打開， 發(fā)現(xiàn)里面那扇玻璃門和墊圈會(huì)有大量水汽， 培養(yǎng)瓶外壁也有。 請(qǐng)問是 怎么回事？細(xì)胞還能養(yǎng)嗎