基因工程的基本操作程序ppt課件

1、基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1;.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.目的基因的獲取目的基因的獲取2.基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建3.將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞4.目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定3目前被較廣泛提取使用的目的基因有：目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。病基因等。基因操作的基本步驟基因操作的基本步驟一、提取目的基因一、提取目的基因?qū)⑿枰幕驈墓w生物將需要的基因從供

2、體生物的細胞內(nèi)提取出來。的細胞內(nèi)提取出來。供體生物細胞供體生物細胞取出取出DNADNA用限制酶剪去多用限制酶剪去多余部分余部分目的基因目的基因限制酶限制酶4獲得目的基因的方法獲得目的基因的方法1. 從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因什么是基因文庫？什么是基因文庫？什么是部分基因文庫？什么是部分基因文庫？怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？52.2.人工合成基因法人工合成基因法PCRPCR擴增技術(shù)擴增技術(shù)獲得目的基因的方法獲得目的基因的方法PCR (polymerase ch

3、ain reaction)聚合酶鏈式反應(yīng)聚合酶鏈式反應(yīng)是一項再生物體外復制特定是一項再生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。大量的目的基因。6PCR技術(shù)技術(shù)原理：原理：前提：前提：過程：過程：PCR擴增儀擴增儀DNA雙鏈復制的基本原理雙鏈復制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列目的基因目的基因DNA受熱變性，解鏈；受熱變性，解鏈；引物與單鏈互補結(jié)合；引物與單鏈互補結(jié)合；合成鏈在合成鏈在DNA聚合酶作用下進行延伸。聚合酶作用下進行延伸。7二、基因表達載體的構(gòu)建二、基因表達載體的構(gòu)建基因工程的

4、核心基因工程的核心基因操作的基本步驟基因操作的基本步驟目的：目的：所需物質(zhì)：所需物質(zhì)：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。它們各自的作用是什它們各自的作用是什么么?8用與提取目的基因相同的限制酶切割用與提取目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個切口，將目的基因質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的黏性末端插入切口處，讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補配對后，在與切口上的黏性末端互補配對后，在連接酶的作用下連接形成重組連接酶的作用

5、下連接形成重組DNA分分子。子。9三、將目的基因?qū)胧荏w細胞三、將目的基因?qū)胧荏w細胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化基因操作的基本步驟基因操作的基本步驟 基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細胞等。胞等。 用人工的方法使體外重組的用人工的方法使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞，主要是借鑒細菌或病毒侵染分子轉(zhuǎn)移到受體細胞，主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。細胞的途徑。 目的基因?qū)胧荏w細胞后，就可以隨著受體細胞的繁殖而復制，由于細菌繁殖的速度目的基因?qū)胧荏w細胞后，就可以隨著受體細胞的繁殖而復制，由于細菌

6、繁殖的速度非?？?，在很短的時間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。非?？?，在很短的時間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。 10將目的基因?qū)胧荏w細胞并使之擴增將目的基因?qū)胧荏w細胞并使之擴增導入導入擴增擴增11將目的基因?qū)敫黝惣毎姆椒▽⒛康幕驅(qū)敫黝惣毎姆椒▽⒛康幕驅(qū)胫参锛毎麑⒛康幕驅(qū)胫参锛毎麑⒛康幕驅(qū)雱游锛毎麑⒛康幕驅(qū)雱游锛毎麑⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎麑⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)感受態(tài)細胞吸收感受態(tài)細胞吸收DNA分子分子12農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法你能說說農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的大概過程嗎？你能說說農(nóng)桿

7、菌轉(zhuǎn)化法的大概過程嗎？根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？如果想將一個抗病基因?qū)雴巫尤~植物，理論上你認為該怎么做？如果想將一個抗病基因?qū)雴巫尤~植物，理論上你認為該怎么做？13顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)導入貯藏蛋白基因的超級羊和超級小鼠導入貯藏蛋白基因的超級羊和超級小鼠14將目的基因?qū)胛⑸锛毎麑⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎?利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素。若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素。若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？腸桿菌嗎？15四、目的基因的檢測與鑒定四、目的基因的檢測與鑒定 檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出