寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)及病毒檢測技術(shù)

1、寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)及病毒檢測技術(shù)的現(xiàn)狀和發(fā)展途徑探究聶峰杰1* 張麗1 宋玉霞1 張國輝2 詹紅3（1、寧夏農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點實驗室，寧夏銀川 750002；2、寧夏固原市農(nóng)科所，寧夏固原 750006；3、寧夏馬鈴薯脫毒種薯繁育中心，寧夏平吉堡 750024）摘 要：病毒病是馬鈴薯的重要病害，嚴重影響馬鈴薯產(chǎn)量和品質(zhì)，造成馬鈴薯種性退化。因馬鈴薯是無性繁殖作物，病毒病的防治無有效藥劑，通過培育脫毒種薯能夠有效解決由病毒積累引起的一系列問題。本文主要介紹了國內(nèi)外馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)、病毒檢測方法及其應(yīng)用、寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)和病毒檢測現(xiàn)狀；討論了不同病毒檢測方法的優(yōu)缺點和應(yīng)用前景，

2、為寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)及病毒檢測的發(fā)展提出了建議。 關(guān)鍵詞：馬鈴薯；脫毒種薯；病毒檢測中圖分類號：s-1 文獻標識碼：athe development way to explore and current situation of potatoes virus-free seed breeding and virus detection technology in ningxianie feng-jie1 zhang li1 song yu-xia1 zhang guo-hui2 zhan hong3(1、key lab of agricultural biotechnology of ni

3、ngxia, yinchuan , ningxia750002; 2、guyuan institute of agricultural sciences, guyuan, ningxia 756000;3、ningxia propagation center of virus-free seed potatoes, pingjipu , ningxia 750024)abstract: virus disease can cause declining of the quality and production and sex degradation of solanum tuberosum

4、l, which is one of the important disease of the s. tuberosum l .because of asexual reproduction, chemical control is invalid, the most effective way to control virus disease is virus-free seed breeding. this article mainly introduced the domestic and overseas key technology of potatoes virus-free se

5、ed production, the methods and applications of virus detection, the current situation of potatoes virus-free seed breeding and virus detection technology in ningxia; discussed 基金項目：寧夏農(nóng)林科學院創(chuàng)新先導項目nkyj-13-14第一作者、通訊作者：聶峰杰，女，1985年生，籍貫甘肅，職稱：研究實習員，學歷：研究生，學位：碩士，主要從事植物病害綜合治理研究。通信地址：寧夏銀川市黃河東路590號寧夏農(nóng)林科學院農(nóng)業(yè)生物技術(shù)

6、研究中心，郵編：750002，tel:email:niefengjie。收稿日期： 修回日期：the advantages and disadvantages of different methods of virus detection, prospected its application, put forward the suggestions for progress of potatoes virus-free seed production and virus detection in ningxia.key words: solanum tuberos

7、um l; potatoes virus-free seed; virus detection馬鈴薯( solanum tuberosum l.) 是世界上重要的農(nóng)作物之一，種植面積僅次于小麥、水稻、玉米和大麥，居世界第5 位。病毒病是馬鈴薯在生長期間的重要病害，植株感染病毒后表現(xiàn)出卷葉、花葉和束頂?shù)葞追N類型，具體表現(xiàn)出葉片失綠、頂部葉片變色、卷曲壞死、卷縮、植株矮小等癥狀，塊莖表現(xiàn)為龜裂、變小、變尖、內(nèi)部網(wǎng)狀壞死等癥狀，嚴重影響其種用價值，一般會引起減產(chǎn)20-30%，嚴重時減產(chǎn)80%以上，病情隨著病毒積累逐年加重，最后塊莖失去種用價值。我國發(fā)現(xiàn)的馬鈴薯病毒有7種：即x病毒（pvx）、y病毒（

8、pvy）、s病毒（pvs）、卷葉病毒（plrv）、a病毒（pva）、皺縮花葉病毒（pvm）、古巴花葉病毒（pamv），1種類病毒：紡錘形塊莖類病毒（pstvd）。由于馬鈴薯系無性繁殖，一旦感染病毒無有效藥劑防治，病毒在薯塊內(nèi)不斷地積累導致馬鈴薯品質(zhì)、產(chǎn)量下降。經(jīng)過脫毒處理的馬鈴薯可以恢復原品種的生物學特性，達到復壯的目的，因此，通過培育脫毒種薯來預防病毒病，解決由病毒造成的損失是目前最快速有效的方法。馬鈴薯是寧夏優(yōu)勢主導產(chǎn)業(yè)， 2011年種植面積達15萬hm2，其中脫毒種薯種植面積占65%，是寧夏種植面積第一大作物?！笆濉逼陂g，寧夏將把中部干旱帶和南部山區(qū)建成國家重要馬鈴薯種薯基地，實現(xiàn)種

9、薯脫毒化率達90%，種植標準化率達到75%?，F(xiàn)已建成農(nóng)墾良種繁育中心、西吉縣、海原縣、固原市馬鈴薯改良分中心等5個脫毒快繁中心，共建設(shè)原種基地600多hm2，生產(chǎn)原種2萬噸；建設(shè)一級種基地1萬多hm2，生產(chǎn)一級種25萬噸，馬鈴薯脫毒原種生產(chǎn)能力達到1億粒/年。寧夏脫毒種薯生產(chǎn)量雖然達到一定規(guī)模，但是與國內(nèi)外相比，馬鈴薯脫毒種薯繁育體系起步晚、底子薄、基礎(chǔ)弱，生產(chǎn)中忽視了脫毒種薯的質(zhì)量監(jiān)測，致使種薯脫毒率低，單產(chǎn)水平不高，嚴重影響寧夏馬鈴薯種薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，進一步加強和引進高效準確的脫毒種薯繁育技術(shù)和病毒檢測技術(shù)，從源頭控制脫毒種薯生產(chǎn)質(zhì)量、提高生產(chǎn)效益是寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)中亟待解決的問

10、題。1馬鈴薯脫毒種薯繁育的關(guān)鍵技術(shù)培育脫毒馬鈴薯是解決由病毒引起馬鈴薯種性退化的主要手段。由于植物莖尖分生區(qū)細胞增殖速度比病毒向上運輸?shù)乃俣瓤?，寄主體內(nèi)的病毒分布不均勻，生長點附近的病毒含量很低，分生組織內(nèi)甚至不含病毒1。因此，剝?nèi)〔缓《镜那o尖分生組織，進一步培育可以獲得無病毒植株。莖尖脫毒技術(shù)是目前應(yīng)用最廣泛的脫毒方法，已經(jīng)在馬鈴薯、甘蔗、甘薯等30多種作物上廣泛應(yīng)用。1.1馬鈴薯莖尖脫毒培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)選擇田間生長健壯、品種特性典型一致的馬鈴薯植株塊莖，自然度過休眠期或人工打破休眠后，將薯塊在室內(nèi)催芽、消毒；在無菌條件下，剝離莖尖分生組織，接種培養(yǎng)約4個月后，長成試管苗；試管苗經(jīng)過病毒檢測，

11、鑒定出確實不帶病毒的脫毒苗，經(jīng)過切段快繁生產(chǎn)脫毒試管苗。經(jīng)過脫毒的馬鈴薯既恢復了原品種的特性，達到了復壯的目的，同時也將真菌和細菌等病原物一并脫除，在一定時期內(nèi)，沒有病毒、細菌和真菌病害，生活力特別旺盛。1.1.1影響莖尖脫毒的因素1.1.1.1 莖尖大小由于病毒僅存在于維管系統(tǒng)組織中，只有無維管束的分生組織內(nèi)無病毒，因此，在莖尖培養(yǎng)中，剝?nèi)〉那o尖越小，帶毒可能性越小，但是莖尖的培養(yǎng)成活率變低，一般要求莖尖長度小于1mm。mellor等2的研究結(jié)果表明，pvx病毒的脫除與莖尖大小相關(guān)，莖尖越小，病毒含量越少，脫毒率就越高，但小的莖尖在培養(yǎng)過程中不易成苗，影響了脫毒苗的成活率。1.1.1.2高溫

12、處理高溫處理的原理是病毒衣殼蛋白受熱變性后病毒失去活性，由于不同病毒的衣殼蛋白分子結(jié)構(gòu)不同，在寄主體內(nèi)正常蛋白的含量、病毒濃度、高溫處理時間等外部因素的影響下，不同病毒的抗熱能力不同。kassanis3研究發(fā)現(xiàn)，將馬鈴薯塊莖經(jīng)過37.5高溫處理20d后，部分卷葉病毒自然消失，產(chǎn)生了無卷葉癥狀的植株。部分通過單一莖尖剝離難以脫除的病毒，如pvx和pvs，經(jīng)過高溫處理可顯著提高脫毒率。morel等4研究發(fā)現(xiàn)，單一的莖尖組織培養(yǎng)對pvy和pva的脫毒率達85%90%，但對pvx和pvs的脫毒率卻小于1%，當經(jīng)過熱處理后，莖尖培養(yǎng)pvs的脫毒率提高至11.4%。由此證明了熱處理能使病毒失活，如在莖尖培

13、養(yǎng)之前對取材進行熱處理，可更加提高脫毒的效果。1.1.1.3培養(yǎng)基成分馬鈴薯莖尖培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基，適當提高其中的銨鹽和鉀鹽的濃度有助于提高莖尖的成活率5。因植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度直接影響莖尖的生長，加之馬鈴薯不同品種對激素反應(yīng)不同，所使用的激素種類和濃度要做相應(yīng)的調(diào)整。此外，張輔達6的研究結(jié)果表明，在適宜的培養(yǎng)條件，要根據(jù)馬鈴薯莖尖組織在培養(yǎng)過程中的不同生長發(fā)育類型改變生長調(diào)節(jié)劑的濃度及處理時間才能提高莖尖成活率。培養(yǎng)基中加入病毒抑制劑同樣可提高莖尖培養(yǎng)的脫毒率，wambugu f.m.等發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中加入20 mg/l病毒唑后，89%的馬鈴薯莖尖再生植株排除了pvy，90%

14、的再生植株排除了pvx。klein r.e等7的研究也發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中加入10 mg/l病毒唑后，80%的馬鈴薯莖尖再生植株除去了pvx。1.1.1.4培養(yǎng)條件剝離出的莖尖接種到培養(yǎng)基后在適宜的溫度和光照下才能正常生長，通常溫度控制在20-25最為適宜，最適光照強度為2000-3000lx，光照時間為12h/d，自然散射光照射下培養(yǎng)的脫毒試管苗生長更加健壯。1.1.2馬鈴薯病毒的脫毒難易程度馬鈴薯不同病毒的脫除難易程度不同，同樣大小的莖尖，類病毒pstvd最難脫除，在各種病毒中以pvx和pvs最難脫除，常見病毒脫除的難易順序為pstvd 、pvs 、pvx、pvm 、pamv 、pvy 、pva

15、 、plrv。1.2 寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)現(xiàn)狀寧夏的脫毒種薯繁育主要采取單一的莖尖剝離、組織培養(yǎng)的方法誘導出試管苗，脫毒試管苗在無菌條件下，采用固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合的方法擴繁基礎(chǔ)苗，在防蟲網(wǎng)室栽植或封閉溫室扦插，生產(chǎn)出原原種（脫毒小薯）。用原原種在自然隔離室網(wǎng)室隔離條件下生產(chǎn)原種，用原種以后逐級生產(chǎn)一級種和二級種。2 馬鈴薯脫毒種薯的病毒檢測技術(shù)因脫毒培養(yǎng)各個環(huán)節(jié)存在誤差，經(jīng)過脫毒的馬鈴薯植株必須經(jīng)過嚴格的病毒學檢測，確定不帶病毒后才能進一步擴繁。因此，在馬鈴薯病脫毒種薯培育過程中，準確可靠的病毒檢測方法與高效的脫毒方法同等重要。隨著植物病毒分類體系趨于完善，各種病毒鑒定技術(shù)不斷發(fā)展，病毒

16、檢測先后經(jīng)歷了生物學檢測技術(shù)、免疫學檢測技術(shù)和分子生物學檢測技術(shù)三個階段。2.1 國內(nèi)外常用的病毒檢測方法2.1.1生物學檢測技術(shù)生物學檢測技術(shù)主要通過寄主植物和病毒的傳播方式、寄主表現(xiàn)出的病癥對植物病毒病進行診斷，通過測定病毒寄主范圍、觀察鑒別寄主反應(yīng)，對病毒的稀釋限點、鈍化溫度、體外存活期等離體性狀和傳播途徑的測定來進行病毒種類鑒定。指示植物法是利用各個病毒不同的癥狀和傳播方式，通過媒介昆蟲或摩擦將待測植株的汁液接種在對病毒敏感的指示植物上，觀察指示植物癥狀確定待測植株內(nèi)有無病毒以及帶何種病毒。吳凌娟8等將病毒接種指示植物，經(jīng)過培養(yǎng)對馬鈴薯pvx的寄主范圍、癥狀表現(xiàn)從形態(tài)學角度進行了研究。

17、生物學檢測技術(shù)不僅可以檢測病毒，還可提供病毒形態(tài)學上的毒力指標是早期重要的檢測方法，具有準確、直觀的特點，但是某些特定鑒別寄主不易得到，樣品量大時需要大面積的溫室，鑒定過程操作繁冗，所需周期長，幾種病毒復合感染后會表現(xiàn)不同的癥狀，環(huán)境不同指示植物也會表現(xiàn)不同的癥狀。因此，不能作為最終鑒定結(jié)果，也無法適應(yīng)生產(chǎn)上快速檢測的需要。2.1.2免疫學檢測技術(shù)植物病毒的核蛋白是由蛋白質(zhì)和核酸組成的一種很好的抗原，抗原與特異性的抗體結(jié)合后失去活性的過程叫做免疫反應(yīng)，也叫做血清反應(yīng)。由于不同病毒產(chǎn)生的抗血清特性不同，根據(jù)血清學原理研究出了許多病毒鑒定檢測的方法，目前應(yīng)用最廣泛的免疫學檢測法是酶聯(lián)免疫吸附法（e

18、nzyme-linked immunosorbent assay，elisa）。膠體金免疫層析檢測法（gold immuno chromatography assay，gica）是近年來發(fā)展起來的一種將金標記代替了elisa中的酶標記的一種快速檢測方法，有著廣闊的應(yīng)用前景。2.1.2.1酶聯(lián)免疫吸附法（elisa）20世紀70年代初clark等9報道了elisa檢測植物病毒的基本方法，該方法非常靈敏，病毒檢出濃度為10-100ng/ml，自此elisa被廣泛應(yīng)用于植物病毒檢測中。其主要原理是免疫酶法與固相吸附技術(shù)相結(jié)合，使酶分子和免疫球蛋白分子在不影響其活性和反應(yīng)條件下，共價結(jié)合形成酶標記抗體

19、。酶標記抗體可直接或通過免疫橋與包被在固相支持物上待測定的抗原或抗體特異性結(jié)合，再通過酶底物作用產(chǎn)生有顏色或電子密度高的可溶性產(chǎn)物，借以顯示出抗體的性質(zhì)和數(shù)量10。近年來，在原基礎(chǔ)上改進衍生出了一些新的檢測方法，如斑點免疫吸附、伏安酶免疫分析、快速elisa等。白艷菊等11分別用快速das-elisa法和常規(guī)das-elisa法檢測了pvx、pvy、pvs、pvm、plrv等五種病毒，比較了兩種方法的實用性和準確度。劉衛(wèi)平等12采用快速elisa法檢測了馬鈴薯pvx、pvy病毒。elisa靈敏度高、特異強、經(jīng)濟簡便、易于觀察適合于大量樣品的檢測。elisa的缺點是：抗體的制備過程復雜耗時；一次

20、只能檢測一種病毒，檢測多種病毒時靈敏度和準確率降低；檢測病毒時會出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，準確性降低；病毒濃度低當年不顯癥時，無法檢測；無法檢測類病毒。 2.1.2.2免疫膠體金技術(shù)（gica）免疫膠體金技術(shù)（gica）利用抗原抗體結(jié)合的免疫學原理，以膠體金為示蹤標志物，有效地檢測病毒抗體，是一種快速、簡便、結(jié)果容易判定的新型免疫標記技術(shù)，已經(jīng)在馬鈴薯病毒檢測中得到了應(yīng)用。魏梅生等13研制了馬鈴薯pvx和pvy的膠體金免疫層試紙條，10min內(nèi)可檢測出病毒，與elisa驗證結(jié)果吻合。朱云芬等14利用免疫試紙條快速檢測了馬鈴薯pvy，并用rt-pcr方法驗證了試紙條的準確性。利用gica技術(shù)制成的膠體金試

21、紙條具有以下優(yōu)點：試劑和樣本用量極小，可低至12µl，且樣品無需特殊處理；操作簡單，不需儀器，適用于肉眼水平的免疫檢測，適于現(xiàn)場檢測應(yīng)用；敏感性和特異性高，抗原和抗體都可以檢測；檢測速度快，幾分鐘之內(nèi)就可以得出檢測結(jié)果；實驗結(jié)果可以長期保存，這使其在馬鈴薯脫毒種薯的病毒檢測上有很大的應(yīng)用潛力。2.1.3分子生物學檢測技術(shù)由于免疫學檢測技術(shù)的檢測目標是蛋白，僅檢測到蛋白不能肯定病毒有無生物活性，而分子生物學檢測目標是具有侵染性的核酸，因此檢測結(jié)果較免疫學檢測技術(shù)更為可靠。近年來，隨著分子生物學技術(shù)的快速發(fā)展，很多日趨成熟的檢測技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于馬鈴薯病毒檢測中。有專為檢測類病毒設(shè)計出的聚丙

22、烯酰胺凝膠電泳法（polyacrylamide gel electrophoresis, page）、核酸雜交(nucleic acid hybridization，nash)技術(shù)、醫(yī)學上病毒檢測常用的指示分子-核酸序列擴增(molecular beacon-nucleic acid sequence based amplification，nasba)技術(shù)以及目前應(yīng)用最廣泛的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)技術(shù)等。2.1.3.1聚丙烯酰胺凝膠電泳法（page）聚丙烯酰胺凝膠電泳法是檢測類病毒

23、的重要手段，其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有分子篩的效應(yīng)，在電泳過程中可以保持蛋白質(zhì)的完整狀態(tài)，根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、形狀、附帶的電荷呈梯度分開。 morris和pfannenstiel為了篩選馬鈴薯核心種薯建立了檢測類病毒的聚丙烯酰胺凝膠電泳法。1986年，schumacher建立了雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳法（r-page），利用了類病毒核酸在高溫條件下遷移、變性變慢的特點，提高了鑒定準確性。singh15、16利用r-page法檢測區(qū)分了休眠薯塊中pstvd的弱系、中間系和強系，利用該方法檢測pstvd弱株系靈敏度達到了核算雜交技術(shù)反應(yīng)的水平。page可檢測到800ng的類病毒，靈敏度較高，在一般試驗條件下，

24、只需一套電泳設(shè)備，操作簡便，并可以區(qū)分類病毒的強系和弱系，但是一次只能檢測十幾個樣品，不適合大量樣品的檢測。2.1.3.1 核酸雜交檢測技術(shù)（nash）由于類病毒不具有外殼蛋白，用免疫學方法無法檢測，owens和diener171981年設(shè)計了核酸雜交檢測技術(shù)用于類病毒pstvd的檢測。該方法將一段病毒核酸單鏈以某種方式加以標記制成探針，與互補的待測樣品核酸雜交，根據(jù)互補的核酸單鏈可以相互結(jié)合的原理，帶有探針的雜交核酸能指示病原的存在。querci18用該方法成功的檢測了pvx 不同分離株系。研究發(fā)現(xiàn)核酸雜交檢測技術(shù)中所用探針越大，靈敏度越高19。yamashita等20研究表明nash靈敏度

25、可以達到3.25kb的探針檢測到5pgrna，比elisa更靈敏，檢測結(jié)果更可靠。nash較之elisa更靈敏，更可靠，更適宜于檢測大量樣品，在檢測類病毒時靈敏度和精確性高于page法，但是對探針的分離比較困難且檢測過程中采用的同位素標記有放射性污染和安全問題。nash不易檢出休眠種薯中的病毒，尤其是檢測休眠種薯中的pvy 和plrv兩種病毒時靈敏度不高21。2.1.3.2 指示分子nasba技術(shù)nasba技術(shù)是醫(yī)學上檢測rna病毒的主要方法，適宜于馬鈴薯病毒的常規(guī)檢測，其原理是以rna轉(zhuǎn)錄為基礎(chǔ)的等溫擴增方法，適用于rna分子擴增，在有雙鏈dna存在的情況下也可實現(xiàn)對單鏈rna的特異擴增，一

26、般可通過分子雜交判斷擴增結(jié)果，具有高度的特異性。klerks等22利用nasba技術(shù)檢測馬鈴薯塊莖上pvy和plry病毒，最低檢出量為10µg。nasba檢測技術(shù)不但可以實現(xiàn)病毒的檢測，還可以對樣品中病毒濃度進行分析，可同時對不同病毒和同種病毒的不同株系進行檢測23，具有檢測效率高，特異性好的特點。2.1.3.3 rt-pcr檢測技術(shù)rt-pcr技術(shù)基于大部分植物病毒、類病毒的遺傳物質(zhì)是rna，以待檢測病毒rna的全部或部分序列為基礎(chǔ)，設(shè)計合成一對特異性引物(也可用隨機引物)，將待測rna反轉(zhuǎn)錄成cdna再進行pcr擴增的反應(yīng)。該方法可以用于檢測不同植物感染的各種病原物，包括真菌、細

27、菌、病毒、類病毒、植原體、線蟲等，是目前應(yīng)用最廣泛的、最有發(fā)展前景的病毒檢測技術(shù)。自二十世紀九十年代起，國內(nèi)外相繼用rt-pcr方法檢測了多種馬鈴薯病毒（類病毒）24-26。多重rt-pcr技術(shù)體系的建立，實現(xiàn)了多種病毒同時檢測，提高了檢測效率的同時，降低了檢測成本。王中康27根據(jù)馬鈴薯病毒cp 和p1基因序列設(shè)計了特異性引物對，建立了可以同時檢測pvx、pvs、pvy、plrv和pva的多重rt-pcr快速檢測體系，靈敏度比elisa提高至少100倍。董代幸28根據(jù)pvx、pvy、pva、plrv的cp基因序列設(shè)計了4對特異性引物，建立了能夠同時檢測這四種病毒的一步多重rt-pcr檢測方法。

28、rt-pcr檢測技術(shù)靈敏度高，特異性強，在基因水平上僅用微量植物感病組織液即檢測出含量極低的病毒rna。同時作為病毒鑒定的重要依據(jù)，該方法可以結(jié)合核酸序列分析基因序列中的分子變異，檢測不同病毒株系間的序列同源性，比較其親緣關(guān)系。多重rt-pcr分子檢測技術(shù)的建立，可以同時檢測多種病毒，降低檢測成本，簡化操作程序，進一步推進了該方法的廣泛應(yīng)用。2.2 寧夏馬鈴薯脫毒種薯病毒檢測現(xiàn)狀寧夏馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)中的病毒檢測主要采用生物學檢測技術(shù)中的指示植物鑒定、免疫學檢測技術(shù)中的酶聯(lián)免疫吸附試驗法（elisa）、分子生物學檢測技術(shù)中的雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳方法鑒定馬鈴薯多種病毒及類病毒，經(jīng)鑒定無主要病毒

29、及類病毒的試管苗可定為脫毒試管苗。3結(jié)語脫毒種薯的推廣種植可有效地提高馬鈴薯的產(chǎn)量和品質(zhì)。莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒試管苗在馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)中已經(jīng)取得了長足的發(fā)展，但是寧夏的馬鈴薯脫毒生產(chǎn)在實際操作中人工剝離莖尖存在一定誤差，這為種薯產(chǎn)業(yè)化種植留下一定的隱患，有必要在脫毒過程中結(jié)合其他方法探尋更加快速，有效，便于大規(guī)模生產(chǎn)的脫毒方法。本文總結(jié)歸納了國內(nèi)外馬鈴薯病毒檢測的常用方法，每種方法根據(jù)原理和檢測目標不同，都有其各自的優(yōu)缺點。其中，rt-pcr法特異性強，準確率高，隨著相關(guān)技術(shù)、儀器的普及推廣，其應(yīng)用范圍必將越來越廣泛。gica法操作簡便，快速準確，適宜于現(xiàn)場快速檢測，具有很好的應(yīng)用前景。寧夏

30、目前采用的病毒檢測方法在實際操作過程中存在靈敏度低、所需時間長，費時費力、不經(jīng)濟實用等弊端，而一些快速高效的檢測方法還未在我區(qū)的脫毒馬鈴薯檢測工作中開展。因此有必要根據(jù)寧夏馬鈴薯脫毒生產(chǎn)中待測病毒類型、技術(shù)掌握程度、設(shè)備條件、檢測目的和要求，將傳統(tǒng)生物學技術(shù)、免疫學檢測技術(shù)和分子生物學技術(shù)因地適宜地、有機地結(jié)合起來，形成一套完善的高精度、高標準、規(guī)范化的脫毒種薯質(zhì)量檢測體系，為指導寧夏馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的快速、健康發(fā)展提供技術(shù)支撐。參考文獻：1 胡琳.植物脫毒技術(shù)m.北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社,2000,1-2.2 mellor f.c., stace -smith. applied and funda

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