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文檔簡介

1、1 對流免疫電泳對流免疫電泳2一、基本原理在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負電荷，而且它分子又較大，所以泳動慢，受電滲作用的影響也大，往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時，反而向負極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強的負電荷，分子又較小，所以泳動快，雖然由于電滲作用泳動速度減慢，但仍能向正極泳動。如將抗原置陰極，抗體置陽極，電泳時，兩種成分相對泳動，一定時間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在比例適當?shù)牡胤叫纬扇庋劭梢姷某恋砭€。這樣由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動，因而加速了反應的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴散時，抗原抗體向四周自由擴散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴散法的靈敏

2、度要高1016倍，而且反應時間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測定。34三、操作方法1制瓊脂板 以pH8.6離子強度0.05巴比妥緩沖液配成1%1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm3mm。2打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm0.6cm，孔距0.4cm1.0cm。挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。3加樣 一對孔中，一孔加抗原，另一孔加抗體。4電泳 將抗原孔置于負極端。電流強度3mA/cm6mA/cm，電泳時間30min90min。56四、結(jié)果觀察斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37數(shù)小時或置電泳槽過夜再觀察。78五、注意事項1抗原抗體濃度的比例 當抗原抗體比例不適合時，均不能出現(xiàn)明顯可見的沉淀線。2適當?shù)碾姖B作用在對流免疫電泳中是必要的。當瓊脂質(zhì)量差時，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負極，造成非特異性反應。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對流免疫電泳。4當抗原抗體在同一介質(zhì)中帶

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