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1、pcr反應(yīng)原理及其操作反應(yīng)原理及其操作pcr原理及其操作(高中) pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中) 4 4種種dntpdntp混合物混合物 各各200umol/l200umol/l（datp,dgtp,dctp,dttp） 引物引物 各各1010100pmol100pmol 模板模板dna dna 0.10.12ug2ug taq dnataq dna聚合酶聚合酶 2.5u2.5u mgmg2+ 2+ 1.5mmol/l1.5mmol/lpcr原理及其操作(高中) 1. dna變性變性（90-96）：雙鏈）：雙鏈dna模板在熱作用模板在熱作用下，下， 氫鍵斷裂，形成單鏈氫鍵

2、斷裂，形成單鏈dna。2. 退火（復(fù)性）退火（復(fù)性）（25-65）：系統(tǒng)溫度降低，引物與）：系統(tǒng)溫度降低，引物與dna模板結(jié)合，形成局部雙鏈。模板結(jié)合，形成局部雙鏈。3. 延伸延伸（70-75）：在）：在taq酶（在酶（在72左右，左右，活性最佳）的作用下，以活性最佳）的作用下，以dntp為原料，為原料，從引物的從引物的5端端3端延伸，合成與模板互端延伸，合成與模板互補的補的dna鏈。鏈。pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中)pcr原理及其操作(高中) 在引物作在引物作用下，用下，taq酶酶從從引物引物3端端開開始延伸始延伸dna鏈，鏈，即即dna的合成的合成方向是從子鏈方向是從子鏈的的5端自端自3端端延伸的延伸的。實際。實際上就是在體外上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)模擬細(xì)胞內(nèi)dna的復(fù)制過的復(fù)制過程。程。dna的復(fù)的復(fù)制需要引物，制需要引物，其主要原因是其主要原因是dna聚合酶只聚合酶只能從能從3端延伸端延伸dna鏈。鏈。pcr原理及其操作(高中)pcr原理及

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