臨床檢驗中心PCR實驗室標準操作程序

1、*醫(yī)院臨床檢驗中心臨床基因擴增實驗室管理程序標準操作程序（SOP）起草人：批準人： 生效日期： 年 月 日目 錄臨床基因擴增實驗室的設置3臨床基因擴增實驗室內(nèi)部管理規(guī)章11臨床基因擴增實驗室人員管理、配置及培訓15臨床基因擴增實驗室的設施和環(huán)境18臨床基因擴增實驗室清潔制度規(guī)章19臨床基因擴增實驗室儀器設備管理規(guī)章21Roche 480II實時熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護方法、校準（SOP-1）未修改26Finnpipette 可調(diào)式移液器的使用與維護標準操作(SOP-2)35Finnpipette可調(diào)式移液器校準標準管理程序(SOP-3)39溫度計及濕溫度計的校正標準管理程序(SOP-4)

2、40離心機使用與維護標準操作程序(SOP-5)41超凈工作臺使用與維護標準操作程序(SOP-6)45恒溫水浴箱使用、維護與校正（SOP-7）46旋渦振蕩器使用與維護標準操作程序（SOP-8）49冰箱的使用與維護標準操作程序（SOP-9）50可移動紫外燈標準操作程序（SOP-10）52儀器故障時標記、放置標準操作程序（SOP-11）53儀器設備發(fā)生故障時的應急處理程序（SOP-12）54臨床標本的收集管理標準操作程序（SOP-13）57檢驗標本的驗收和保存標準操作程序（SOP-14）58樣本編號的標準操作程序(SOP-15)63PCR標本管理標準操作程序（SOP-16）65標本前處理標準操作程序

3、（SOP-17）67核酸擴增及產(chǎn)物分析檢測標準操作程序（SOP-18）68乙型肝炎病毒基因擴增檢測標準操作程序（SOP-19）70基因擴增檢測實驗結(jié)果分析標準操作程序(SOP-20)75實驗結(jié)果有效性判斷標準操作程序（SOP-21）78室內(nèi)質(zhì)量控制標準操作程序(SOP-22)79實驗室試劑耗材購買、驗收和貯存的標準操作程序（SOP-23）85試劑質(zhì)檢標準操作程序（SOP-24）91實驗室耗材質(zhì)檢標準操作程序（SOP-25）94手套使用及左右手分開的原則（SOP-26）97實驗室化學試劑貯存使用、廢棄物處理及生物防護（SOP-27）98抱怨的處理程序（SOP-28）101實驗室記錄管理規(guī)章標準操

4、作程序（SOP-29）105檢驗報告單管理標準操作程序（SOP-30）108實驗室臺面擺放順序程序（SOP-31）112實驗室常用溶液配置標準操作程序（SOP-32）113*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室設置標準操作程序 第 12 頁 共 119 頁臨床基因擴增實驗室的設置1目的：依照實驗室設置規(guī)范實現(xiàn)核酸擴增熒光檢測實驗室配置合理，以保證實驗工作健康有序及實驗結(jié)果的可靠性2 范圍：臨床基因擴增實驗室及相關(guān)工作人員，并明確各項規(guī)章制度3 操作人：* *4 實驗室設置規(guī)章： 4.1 依據(jù)：本實驗室按臨床

5、基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號）中臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準結(jié)合本實驗室的條件進行設置，并嚴格按照臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范（衛(wèi)檢字2002第8號）的要求開展臨床基因擴增工作(擬開展基因擴增檢驗項目見附表1)4.2 實驗室設置:4.2.1實驗室主要由試劑儲存和準備區(qū)（PCR-）、標本制備區(qū)（PCR-）、PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)(PCR-）三個工作室組成。這三區(qū)各自獨立，每個區(qū)設有緩沖間。其布局見實驗室平面圖（見附圖1）。4.2.2設立各區(qū)的門牌，分別是：“試劑儲存和準備區(qū)（PCR-）”、“標本制備區(qū)（PCR-）”、“PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)(PCR-）”，并在各區(qū)

6、門上貼有“非本室工作人員不得進入”標記。4.2.3建立實驗室內(nèi)務管理，并放在進入實驗室的明顯位置（如置于緩沖區(qū)的墻上；內(nèi)務管理應有進入實驗的工作流程、進入實驗室的要求、實驗前的準備及清潔等）。4.2.4三個工作區(qū)各配備專用的設備、儀器、輔助設施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標識：試劑準備區(qū)藍色，標本制備區(qū)紫色，PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)黑色。各區(qū)的實驗物品不得混用（實驗室主要設備一覽表見表3）。4.2.5進入各區(qū)的工作流程為：試劑儲存和準備區(qū)標本制備區(qū)PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。4.2.6進入實驗室必須更換有本室標識的工作服及清潔鞋套，工作人員離開某一工作區(qū)時，該區(qū)物品不得帶出

7、本區(qū)（包括工作服等）。4.3各區(qū)實驗設備及用品配置：4.3.1試劑儲存和準備區(qū)：冰箱（28和-15）、可調(diào)式移液器（覆蓋0.51000ul）、紫外消毒車、固定紫外線燈，混勻器，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離心管），專用實驗記錄本及記號筆等。4.3.2 標本制備區(qū)：冰箱（28和-15）、臺式高速離心機、水浴鍋、凈化工作臺、混勻器、可調(diào)式移液器（覆蓋11000ul）、紫外消毒車、固定紫外線燈，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離心管），專用實驗記錄本及記號筆等。4.3.3 PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)：Line-Gene全自動

8、熒光定量PCR核酸擴增儀、紫外消毒車、固定紫外線燈，專用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水紙等），專用實驗記錄本及記號筆等。4.4實驗室人員設置：實驗室人員配置：我院PCR實驗室配備有3名工作人員，其中1人具檢驗師職稱，2人具主管檢驗師職稱。已全部經(jīng)過安徽省臨床檢驗中心培訓，并取得培訓合格證（實驗室工作人員一覽表見表2）。起 草 人批 準 人生 效 日 期年 月 日附表1 擬開展臨床基因擴增檢驗項目一覽表項 目方 法備 注HBV DNAPCR熒光實時擴增Line-Gene擴增儀表2 臨床基因擴增檢驗實驗室工作人員一覽表序號姓名性別年齡學歷職務職稱所學專業(yè)畢業(yè)時間從事本專業(yè)時間培訓合格證號備注

9、1×××中專主管檢驗827422002000*2×××中專主管檢驗817442003000*3×××中專檢驗師檢驗957312003000*表3 臨床基因擴增檢驗實驗室儀器設備一覽表序號儀器設備名稱生產(chǎn)廠家儀器型號儀器序號接收日期接收狀態(tài)啟用日期放置地點接受人簽字備注1紫外線消毒車江陰市光電儀器有限公司ZXC類B型2003-4-18全新2002-5-9試劑準備區(qū)2美菱電冰箱××美菱股份有限公司BCD-109624172003-4-19全新2003-4-19試劑準備區(qū)3可調(diào)式移液器上海雷

10、勃分析儀器有限公司4500120Y557772003-4-19全新2003-5-9試劑準備區(qū)4可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500020Y500412003-4-19全新2003-5-9試劑準備區(qū)5可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500100Y458492003-4-19全新2003-5-9試劑準備區(qū)6可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500090Y567342003-4-19全新2003-5-9試劑準備區(qū)7光學讀數(shù)分析天平湘儀天平儀器廠TG3282003-5-8調(diào)撥2003-5-8試劑準備區(qū)8無菌凈化工作臺浙江大學凈化設備廠GEM-SHGEM-SH-012003-4-16全

11、新2003-5-9樣本準備區(qū)9紫外線消毒車江陰市光電儀器有限公司械廠ZXC類B型2003-4-18全新2003-5-9樣本準備區(qū)10高速離心機上海安亭科學儀器廠TGL-16B172003-3-1全新2003-3-19樣本準備區(qū)11美菱電冰箱××美菱股份有限公司BCD-109624222003-4-19全新2003-4-19樣本準備區(qū)12三用電熱恒溫水浴箱上海躍進醫(yī)療器械廠S.HH.W21.420010062003-2-15全新2003-3-30樣本準備區(qū)13微型混勻器上海醫(yī)科大學儀器廠XW-80AQ/DAALC2-20002003-2-15全新2003-3-30樣本準備區(qū)1

12、4可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500020Y500402003-4-19全新2003-5-9樣本準備區(qū)15可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500100Y458502003-4-19全新2003-5-9樣本準備區(qū)16可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500090Y567332003-4-19全新2003-5-9樣本準備區(qū)17可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司4500050F599682003-4-19全新2003-5-9樣本準備區(qū)18Line-Gene擴增儀杭州DaheThermo-Magnetic有限公司FGD-33ABYQ6079-2442003-4-16全新2003-

13、5-9PCR擴增區(qū)19紫外線消毒車江陰市光電儀器有限公司械廠ZXC類B型2003-4-19全新2003-5-9PCR擴增區(qū)圖1 基 因 擴 增 實 驗 室 平 面 圖*醫(yī)院臨床基因擴增實驗室*醫(yī)院臨床基因擴增實驗室- 119 -*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室內(nèi)部管理規(guī)章標準操作程序 第 16 頁 共 119 頁臨床基因擴增實驗室內(nèi)部管理規(guī)章1目的：依照實驗室管理規(guī)范實現(xiàn)全面質(zhì)量管理，實現(xiàn)核酸擴增熒光檢測實驗室有專人負責，以保證實驗工作健康有序及實驗結(jié)果的可靠性2 范圍：臨床基因擴增實驗室及相關(guān)工作人

14、員，并明確了各項規(guī)章制度3 操作人：*4 規(guī)章：4.1實驗室內(nèi)務管理規(guī)章：4.1.1標本的接收設在三個區(qū)以外的區(qū)域（與生化專用標本接收區(qū)合用），在標本接收時同時進行以下記錄：在標本與化驗單上同時進行標本的唯一性編號，在標本接收登記本上記錄患者的姓名、年齡，標本接收日期，標本的特性、狀態(tài)，接收者簽名。經(jīng)驗收合格后接收的標本直接運送至標本制備區(qū)。4.1.2實驗過程中須嚴格遵守實驗的工作流程：試劑準備區(qū)標本制備區(qū)擴增及產(chǎn)物分析區(qū)的唯一流向制度。4.1.3開啟實驗區(qū)前逐一打開設在緩沖區(qū)外墻上的紫外線燈開關(guān)（控制實驗區(qū)的固定紫外燈），照射30分鐘。4.1.4工作開始前，在緩沖區(qū)換好本實驗區(qū)工作衣，戴上一

15、次性口罩、帽子，套上一次鞋套，關(guān)閉紫外燈。打開緩沖的排風裝置，開啟實驗區(qū)門鎖，工作時反鎖隔離門。4.1.5進行測定前的準備和工作記錄（實驗前的準備和工作記錄見表4）：a)記錄冰箱溫度、紫外線消毒時間；b)消毒液、清潔液、75%酒精配制；c)查看加樣器、擴增儀、離心機、滅菌的吸頭等是否在有效期限內(nèi)；d)校正水浴鍋溫度；e)試劑準備：試劑是否在有效期范圍內(nèi)，根據(jù)標本量確定準備模板的數(shù)量及陰陽性對照數(shù)量；4.1.6實驗過程的記錄（見SOP文件）。4.1.7檢測結(jié)果的記錄（見SOP文件）。4.1.8實驗完成后實驗室清潔消毒處理及記錄：實驗臺面、加樣器、離心機、超凈工作臺、振蕩器、擴增儀、實驗室空間、實

16、驗室地面等（詳見實驗室清潔制度）。4.1.9工作結(jié)束，內(nèi)務整理完畢，關(guān)閉排風裝置及實驗區(qū)，加鎖。4.1.10唯一流向制度同樣運用于實驗室物流管理及內(nèi)務管理。4.2質(zhì)量控制規(guī)章：4.2.1制定各種SOP文件并嚴格執(zhí)行。4.2.2參加室間質(zhì)評。4.2.3開展室內(nèi)質(zhì)控工作。4.3人員行為規(guī)章：4.3.1要有強烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、早退。4.3.2實驗室人員須保持儀表整潔。4.3.3嚴格遵守實驗操作規(guī)范，不得隨意更改操作步驟。4.3.4實驗室技術(shù)人員必須嚴格按照PCR實驗室操作程序進行，包括實驗室擦洗、臺面消毒，離心管、吸頭的無菌滅活準備，儀器使用和廢棄物的處理等。4.3.5進入實驗室工作

17、人員必須遵守實驗室唯一流向制度，無必要盡量減少進入實驗室的次數(shù)。4.3.6 實驗室內(nèi)嚴禁飲食、吸煙。4.3.7非本室工作人員未經(jīng)允許不得進入實驗室。4.3.8語言有禮貌、舉止講文明，對待來訪病人或電話應和藹禮貌，解釋明確耐心，不得推脫或生硬回絕。4.3.9晚上下班要關(guān)門、窗，檢查空調(diào)和儀器的電源是否關(guān)閉。4.4儀器管理規(guī)章：4.4.1實驗人員必須熟悉儀器性能方允許操作，嚴格遵守操作規(guī)程。4.4.2所有儀器（如PCR擴增儀）須有專人負責，有使用維修記錄。4.4.3儀器使用前必須檢查是否完好，一旦發(fā)現(xiàn)問題，及時向負責人反映，不得擅自拆裝。4.4.4注意保持儀器衛(wèi)生整潔，嚴禁在室內(nèi)抽煙，吃零食，非儀

18、器操作員應盡量少入。4.4.5每天了解儀器運轉(zhuǎn)情況，負責儀器的整潔，安全，檢查電源，水龍頭。4.4.6定期校正和維護PCR儀、離心機、水浴箱、冰箱等儀器、設備，并建立儀器質(zhì)量認證檔案。4.5試劑管理規(guī)章：4.5.1實驗室根據(jù)需要，定期提交試劑申購單，并做到及時盤存清點，入庫做到心中有數(shù)。4.5.2所購試劑一律按試劑和耗材的SOP進行，并做到來源渠道正規(guī)，質(zhì)量保證。4.5.3實驗室對試劑庫存定期檢查，不使用過期變質(zhì)的試劑。4.5.4自配試劑須經(jīng)嚴格校正后方可使用。4.5.5試劑的保存應嚴格按照規(guī)定存放，確保有效期內(nèi)能有效使用，杜絕浪費現(xiàn)象。4.5.6易燃易爆試劑應分開存放，遠離火源和電源。4.5

19、.7試劑外借一律須經(jīng)負責人同意方可。5本制度的變動程序：本制度的變動，可由任一使用該文件的工作人員向主管負責人提出，主管負責人則召集與本制度相關(guān)的所有人員進行討論，根據(jù)討論結(jié)果是否通過，如通過則公布實施。起 草 人批 準 人生 效 日 期 年 月 日表4 實驗前的準備及工作記錄日期： 年 月 日條 目工 作 記 錄責任人（簽名）緩沖區(qū)處在排風狀態(tài)冰箱溫度記錄實驗室紫外線照射30分鐘更換新配制的消毒液清潔液配制實驗臺面的消毒 10%84液擦洗 75%乙醇清潔加樣器 在有效期內(nèi)擴增儀 在有效期內(nèi)離心機 在有效期內(nèi)滅菌的吸頭 在有效期內(nèi)水浴鍋溫度校正 在有效期內(nèi)試劑： 在有效期內(nèi) 所用模板數(shù)量 所用

20、陽性對照 所用陰性對照表4 實驗前的準備及工作記錄日期： 年 月 日條 目工 作 記 錄責任人（簽名）緩沖區(qū)處在排風狀態(tài)冰箱溫度記錄實驗室紫外線照射30分鐘更換新配制的消毒液清潔液配制實驗臺面的消毒 10%84液擦洗 75%乙醇清潔加樣器 在有效期內(nèi)擴增儀 在有效期內(nèi)離心機 在有效期內(nèi)滅菌的吸頭 在有效期內(nèi)水浴鍋溫度校正 在有效期內(nèi)試劑： 在有效期內(nèi) 所用模板數(shù)量 所用陽性對照 所用陰性對照*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室人員管理、配置及培訓標準操作程序 第 20 頁 共 119 頁臨床基因擴增實驗室

21、人員管理、配置及培訓1目的：保證實驗室具備開展該項實驗的能力。2適用范圍：臨床核酸擴增熒光檢測實驗人員。3負責人：*4內(nèi)容：4.1人員要求：4.1.1由于PCR檢測干擾因素較多，結(jié)果分析復雜。因此，PCR實驗室工作人員應具備掌握相關(guān)學科知識及應用能力（實驗技能、分析能力、溝通能力等）；應具備較廣泛的分子生物知識。4.1.2 PCR實驗室工作人員應取得上崗培訓合格證書，臨床PCR檢驗過程須在具培訓合格證書的技術(shù)人員監(jiān)督指導下完成，檢驗報告須由具培訓合格證書的技術(shù)人員審核簽。4.1.3 工作人員上崗前必須學習掌握PCR實驗管理文件及要求，并由實驗室主任核查。4.2人員配置：4.2.1根據(jù)衛(wèi)生部臨檢

22、中心對實驗室人員的在求選擇人員；4.2.2我科PCR實驗室配備3名工作人員（PCR實驗室工作人員一覽見表2）；4.2.3實驗室主任負責實驗室全面管理、解決技術(shù)疑難及與臨床溝通、組織人員參加培訓，室主任不在崗時，應指定代理人負責。4.2.3資深檢驗技師及青年技師負責實驗室技術(shù)管理及臨床標本的檢驗。4.3人員管理：a) 嚴格遵守實驗室內(nèi)務規(guī)章制度；b) 嚴格執(zhí)行年度考核制度：1)日常工作質(zhì)量的評價；2)室內(nèi)質(zhì)控的評測；3)室間質(zhì)控的評測；4)年度考試；5)在日常抱怨工作中的應變能力。c) 科年度獎勵制度：1)參加室間質(zhì)評優(yōu)秀；2)年度在CN級刊物上在論文發(fā)表；3)在本地刊物有多篇論文發(fā)表；4)考試

23、成績優(yōu)秀；5)受到有關(guān)部門或群眾特別嘉獎。d) 科主任建立實驗室工作人員業(yè)績檔案。4.4人員培訓計劃：4.4.1本室現(xiàn)有人員已參加安徽省臨床檢驗中心基因擴增實驗室人員培訓班，并取得上崗證。見附件14.4.2自學及考核：室主任督促指導實驗室人員通過繼續(xù)教育或自學提高業(yè)務素質(zhì)。工作人員根據(jù)自身情況，每年完成一篇學術(shù)論文、綜述或經(jīng)驗總結(jié)提交室主任，室主任以此作為年度考核技術(shù)人員的一項依據(jù)。4.4.3室主任每年必須參加臨床檢驗中心的PCR質(zhì)控總結(jié)會議。4.4.4室成員每年至少有一個月脫產(chǎn)的理論和技能的學習。4.4.5經(jīng)常同其它PCR室的同道進行理論和技術(shù)交流。4.4.6訂閱與分子生物學及PCR技術(shù)有關(guān)

24、的文獻、雜志。4.4.7每年底對下一年的人員培訓做出具體安排。4.4.8實驗室主任對技術(shù)人員的技術(shù)檔案每兩年修正補充一次。5.該程序的變動程序：本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：檢驗科主任、室技術(shù)負責人注:所引用表格:1. 實驗室工作人員一覽表見表22. 實驗室工作人員檔案記錄見表5起 草 人批 準 人生 效 日 期年 月 日表5 臨床基因擴增檢驗實驗室工作人員檔案記錄表姓 名性別年齡學歷職務職稱畢業(yè)學校及所學專業(yè)畢業(yè)時間從事本專業(yè)時間培訓合格證號工作業(yè)績（技能、經(jīng)歷、發(fā)表論文及科研成果）：*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號：

25、版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室設施和環(huán)境標準操作程序 第 22 頁 共 119 頁臨床基因擴增實驗室的設施和環(huán)境1目的 保證環(huán)境良好，工作有序，結(jié)果可靠2范圍 PCR實驗室及相關(guān)工作人員3操作人 * *4規(guī)章：4.1實驗室分三個區(qū)：試劑儲存和準備區(qū)（PCR-）、標本制備區(qū)（PCR-）、PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCR-）。進入各區(qū)按照單一方向進行，即試劑儲存和準備區(qū)（PCR-）標本制備區(qū)（PCR-）PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCR-）。各區(qū)及設備、物品有明確標識，嚴禁混用。4.2每個實驗區(qū)的門上有本區(qū)的標識及非本室人員不得進入字樣。4.3每個實驗區(qū)配有溫度調(diào)

26、控設備、溫濕度計，可移動及固定紫外燈。4.4PCR擴增儀配有UPS多功能穩(wěn)壓電源。4.5工作人員在操作過程中嚴格遵守實驗室內(nèi)務管理，嚴格執(zhí)行操作程序。4.6實驗室人員進入本工作區(qū)時須穿該區(qū)具有標識專用工作服，同時配備其它保護性裝備如手套、口罩、帽子、鞋套并遵守實驗室的唯一流向制度。4.7嚴禁將本區(qū)的物品和工作服帶離本區(qū)，以防擴增產(chǎn)物污染擴增前區(qū)。4.8在實驗過程中使用過的廢棄槍頭等材料應立即浸泡于裝有84消毒液的容器中，過夜后再作為有污染的物品由專人統(tǒng)一處理。4.9標本蓋子的開閉及移取應在超凈臺內(nèi)進行，操作時應，關(guān)閉抽風機，操作時小心謹慎，防止液體外濺。4.10每天實驗開始前，打開紫外燈及紫外

27、消毒車照射30分鐘。4.11工作結(jié)束后，對該區(qū)的工作臺用84消毒液消毒30分鐘后，再用該區(qū)專用的清潔干凈的抹布用自來水擦拭兩遍。對地面用該區(qū)專用的拖把用84消毒液消毒30分鐘后，再用該區(qū)專用的拖把用自來水拖擦兩遍。用紫外消毒車距實驗臺面和實驗儀器30cm照射1小時，同時打開該區(qū)紫外消毒燈消毒1小時。起 草 人批 準 人生 效 日 期年 月 日*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室清潔規(guī)章制度標準操作程序 第 24 頁 共 119 頁臨床基因擴增實驗室清潔制度規(guī)章1目的 保證實驗室日常內(nèi)務管理及清潔工作順利進

28、行2范圍 PCR實驗室臺面、地面及儀器、設備等3操作人 * *4規(guī)章：4.1實驗室臺面和地面清潔4.1.1每次實驗結(jié)束后由專人負責并記錄，各區(qū)的清潔工具不得混用。4.1.2實驗臺面選用10%的84液擦拭;擴增區(qū)實驗臺面用75%的酒精清潔;實驗室地面用先用10%的84液清潔，再用自來水清潔。4.1.3清潔完成后,按各區(qū)要求紫外線照射消毒。同時可移動擴增區(qū)紫外線燈照實驗臺30-60分鐘。4.1.4實驗操作過程中出現(xiàn)血液/痰液等不慎泄露至實驗臺面，應立即停止實驗，用10%84液浸住污染區(qū)域，再用濾紙片覆蓋可繼續(xù)實驗，30分鐘左右后可用軟布蘸10%84液溶液反復清洗，再用75%酒精擦拭；實驗結(jié)束后用紫

29、外線燈照30-60分鐘。4.2高速離心機清潔 4.2.1每次實驗開始前，用75%的酒精擦拭離心的心機外表。4.2.2每次實驗完畢后，先用10%84消毒液浸過的軟布擦洗離心機的轉(zhuǎn)頭及內(nèi)壁,再用潔凈的濕布擦洗,待干后蓋上機蓋。4.2.3如果離心時及時發(fā)現(xiàn)離心管破裂，必須先停止實驗，將有破裂管的離心管放入盛有10%84消毒液缸內(nèi)，取備用離心管繼續(xù)下一步操作。4.3超凈工作臺清潔4.3.1每次使用后用10%84消毒液擦拭工作臺面，再用潔凈的濕布擦洗。75%酒精棉球擦拭紫外燈；4.3.2每星期清潔凈化工作臺的周圍環(huán)境，去除塵埃。4.3.3如果操作過程中出現(xiàn)液體不慎泄露，應立即停止實驗，用10%84液浸住

30、污染區(qū)域，再用濾紙片覆蓋可繼續(xù)實驗，30分鐘左右后用軟布蘸10%84消毒液溶液反復清洗，再用潔凈的濕布擦洗，然后用75%酒精擦拭。 4.4加樣器清潔4.4.1每次實驗結(jié)束后用75%的酒精擦拭。4.4.2當懷疑加樣器有可能污染時在1210C及1巴壓力下消毒20分鐘。各區(qū)的加樣器歸各區(qū)專用（有標識），清潔的消毒時分別處理。4.5工作服清潔4.5.1每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔天洗滌。4.5.2如在實驗過程中疑有污染，立即用10%84液浸泡消毒。4.6擴增儀的清潔：見儀器的維護。4.7實驗室空間消毒：實驗結(jié)束及后續(xù)工作（如地面及儀器清潔）完成后，將固定紫外燈打開照射60分鐘。

31、5.本制度的變動程序：本制度的變動，可由任一使用該文件的工作人員向主管負責人提出，主管負責人則召集與本制度相關(guān)的所有人員進行討論，根據(jù)討論結(jié)果是否通過，如通過則公布實施。（注：實驗室清潔消毒見表6）起 草 人批 準 人生 效 日 期年 月 日*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室儀器設備管理規(guī)章標準操作程序 第 29 頁 共 119 頁臨床基因擴增實驗室儀器設備管理規(guī)章1目的 保證PCR實驗室的儀器設備得到妥善管理，控制在用儀器設備的工作狀態(tài)2范圍 PCR實驗室所有的儀器、設備3操作人 * *4操作：4.1

32、儀器設備的管理，維護，保養(yǎng)等的具體事項由實驗室設備管理人員負責執(zhí)行；4.2由PCR實驗室負責人負責組織執(zhí)行和監(jiān)督管理；5 內(nèi)容：5.1建檔管理：儀器設備的檔案管理應包括以下內(nèi)容（實驗室主要儀器設備相關(guān)文件一覽表見表6）：5.1.1儀器設備的一般情況：a) 名稱b) 制造商，型號，序號c) 接受日期，接收狀態(tài)（全新，改裝，原件調(diào)撥等），啟用日期d) 目前存放地點，接受人員簽字等。e) 校準和檢定的日期、結(jié)果及下次校準和檢定的日期、結(jié)果。f) 迄今為止所進行的維護及今后維護計劃。5.1.2儀器設備的相關(guān)文件： 儀器設備的說明書，操作手冊等，有關(guān)文件（或復印件）的文件序號，名稱，保存方式，管理負責人

33、等。5.1.3儀器設備的損壞，故障，修理須作如下記錄 (相關(guān)表格見表7) ： 日期，設備名稱，設備標記號，維修內(nèi)容（損壞或故障的表現(xiàn)、損壞故障的原因、修理人員及單位、修理的結(jié)果、記錄人員簽名、質(zhì)量負責人簽名等）。5.1.4正常運轉(zhuǎn)的儀器設備貼上綠色正常使用標識牌。有問題的儀器設備加貼明顯的紅色停用標識，標識上應有停用日期及原因；可搬動的儀器移至設備處報修，不可移動的設備原地使用布罩封存待修，直至修復校驗后重新標識正常使用。5.1.5儀器設備的報廢處理（報廢申請表見表8）： 因使用壽命，損壞，故障導致儀器設備不能滿足檢測需要時，該設備即行報廢。由管理人員填寫報廢申請，科質(zhì)量負責人核實，設備科批準

34、后由質(zhì)量負責人在設備檔案中簽名注銷。5.2儀器設備實行嚴格的分區(qū)專用。5.3使用的儀器設備應進行校準和檢定，具體見SOP文件。5.4為保持儀器設備工作狀態(tài)的穩(wěn)定，應對其進行定期的、必要的維護和保養(yǎng)，具體見SOP文件。5.5為了使擴增儀處于穩(wěn)定的工作狀態(tài)，在該電腦上不得使用非本室的外來軟盤， 不能在電腦內(nèi)加載其它程序和軟件；在使用本室軟盤進行資料備份時，需在報告系統(tǒng)電腦上預先殺毒方可使用。5.6非本室工作人員不得使用儀器。6 該程序的變動程序：本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：檢驗科主任、室技術(shù)負責人起 草 人批 準 人生 效 日 期年 月 日表7

35、 臨床基因擴增檢驗實驗室主要儀器設備相關(guān)文件一覽表序號儀器名稱廠家放置地點使用說明書產(chǎn)品合格證保修卡文件保存方式文件負責人備注1美菱電冰箱××美菱股份有限公司試劑準備區(qū)原件2可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準備區(qū)原件3可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準備區(qū)原件4可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準備區(qū)原件5可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司試劑準備區(qū)原件6紫外線消毒車江陰市光學儀有限公司試劑準備區(qū)原件7美菱電冰箱××美菱股份有限公司樣本準備區(qū)原件8紫外線消毒車江陰市光學儀有限公司樣本準備區(qū)原件9高速臺式離心機上海安亭科學儀器廠樣本

36、準備區(qū)原件10三用電熱恒溫水浴箱上海躍進醫(yī)療器械廠樣本準備區(qū)原件11無菌凈化工作臺浙江大學凈化設備廠樣本準備區(qū)原件12可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準備區(qū)原件13可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準備區(qū)原件14可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準備區(qū)原件15可調(diào)式移液器上海雷勃分析儀器有限公司樣本準備區(qū)原件16Line-Gene擴增儀杭州大和公司PCR擴增區(qū)原件17紫外線消毒車江陰市光學儀有限公司PCR擴增區(qū)原件表8 臨床基因擴增檢驗實驗室儀器設備損壞、故障 、修理記錄日期儀器名稱放置地點儀器標識損壞或故障的表現(xiàn)損壞或故障的原因修理單位修理人修理結(jié)果記錄人簽名質(zhì)量負責人簽

37、名表9 臨床基因擴增檢驗實驗室儀器設備的報廢申請表日期儀器名稱放置地點儀器標識報廢原因質(zhì)量負責人核實簽名設備處批準備注*醫(yī)院臨床檢驗中心SOP文件實驗室操作規(guī)程 文件編號： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01臨床基因擴增實驗室Roche 480II實時熒光定量PCR儀標準操作程序 第 38 頁 共 119 頁Roche 480II實時熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護方法、校準（SOP-1）未修改1 目的：確保Line-Gene型核酸擴增熒光檢測儀正確及正常使用。2 適用范圍：Line-Gene型核酸擴增熒光檢測儀。3操作人 * *4標準操作方法：4.1在打開電源以前，先確認以下

38、內(nèi)容：4.1.1確認電源線插頭已插入電源插座中。4.1.2 Line-Gene與計算機及電源的連接是否可靠。4.2核酸擴增儀操作方法：4.2.1依次打開電腦顯示器和電腦主機的電源開關(guān),進入“熒光定量PCR檢測系統(tǒng)”界面；4.2.2模板制好后，按模擬模板反應孔的樣式放入擴增儀反應槽，注意陰陽性、陽性標準品、質(zhì)控品位置，標本不夠用空白管填補；4.2.3打開PCR儀電源開關(guān),預熱5分鐘；4.2.4點擊“運行”鍵，打開“運行”文件中“達安”試劑程序；4.2.3點擊工具欄中的“樣本資料”按鈕，輸入樣本資料，并清空缺省樣本號；點擊“確認”保存樣本資料信息，保存的文件名為：年月日+批次（批次用a、b、c表示

39、）如20030516a 文件自動形成后綴名為*.flr4.2.4點擊儀器運行的紅色按鈕“！”，儀器進入運行狀態(tài)。4.2.5檢測結(jié)果分析：a.程序運行結(jié)束后，系統(tǒng)自動進入分析界面并將檢測結(jié)果自動保存，在熒光定量PCR檢測系統(tǒng)界面單擊“數(shù)據(jù)分析”鍵，進入結(jié)果分析界面。b.定量分析：1） 單擊“分析模式”菜單中的“定量分析”命令，在分析方法選擇中可選擇樣點擬合法。2） 樣點數(shù)選擇：樣點為循環(huán)數(shù)/熒光強度對數(shù)曲線中基線以上各循環(huán)的點，系統(tǒng)根據(jù)選擇的樣點數(shù)，將被選中的樣點擬合成直線，該直線與域值的交叉點即為CT值（僅適合于樣點擬合）。3） 擊“零點調(diào)整”，在彈出零點調(diào)整對話框進行設置手動調(diào)整：以設置的起

40、始循環(huán)至終止循環(huán)熒光強度的平均值為零點設置時盡可能選擇樣本熒光強度穩(wěn)定（用“達安”試劑在Line-Gene熒光定量擴增儀對標本及控制品4） 檢測，通常起始及終止為5-15，結(jié)果較理想）。5） 單擊“噪聲容限”，在基線和域值設置對話中設置基線位置?；€應設置在各樣本噪聲的上方并盡可能的底，對同一種試劑在各個實驗的結(jié)果分析時基線設置盡可能相同。同一實驗結(jié)果分析，基線設置不同CT值不同。6） 單擊“定量分析”，在基線和域值設置對話框中設置域值位置。本批試劑的截距控制在42±2、斜率控制在-2.7±0.2、相關(guān)系數(shù)小于-0.98。設置完成后界面顯示分析結(jié)果。（在每進一批試劑的時候，

41、用本批試劑測定上一批穩(wěn)定的試劑已測定過的控制品及陰陽對照，根據(jù)上批試劑測定的結(jié)果求出本批試劑在這種結(jié)果下的“截距”、“斜率”、“相關(guān)系數(shù)”范圍；在用“本批試劑”進行實驗時，本室其它人員判斷結(jié)果，這些參數(shù)必須控制在此范圍，這樣結(jié)果判斷在本室才具一致性。每進購一批試劑后，在SOP文件中，這些參數(shù)也需調(diào)整。）4.3分析結(jié)果打印。4.4Line-Gene 基因擴增儀使用過后要及時記錄（Line-Gene 基因擴增儀的使用記錄見表9）5維護方法及注意事項：5.1 PCR儀屬于精密電子儀器，應放在水平臺上，PCR儀在運行的時候，室溫應當控制在15至25之間，溫度過高或過低均會引起內(nèi)部的程控芯片或其它電子元

42、件的不正常工作。5.2 PCR儀配有單獨使用的ups穩(wěn)壓電源。PCR儀不能靠近水池、火爐、腐蝕性物質(zhì)、強磁場等，均會影響儀器正常工作。5.3每次實驗時，最好能將擴增儀的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時可用空的樣品管代替，以保證實驗田的一致性和重復性。5.4實驗結(jié)束后應及時擦干孔內(nèi)存在的水份，蓋上機蓋。5.5本儀器表面如有污跡，可用軟布沾清潔膏擦拭干凈。5.6每周五清洗樣品槽一次。方法是用棉棒沾75%的乙醇清洗若干次，以有灰塵或其它殘留物影響擴增效果。5.7每月末清潔熱蓋和反應孔。具體方法是：正常關(guān)機后，將反應槽取出，將熱蓋翻開，用浸透95%酒精棉棒擦拭反應孔和熱蓋，待乙醇揮發(fā)后再將熱蓋和反應槽

43、安裝好，熱蓋恢復原位。5.8熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件的維護：5.8.1安裝熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件計算機進入Window98/2000/XP系統(tǒng)后，將熒光定量PCR檢測系統(tǒng)安裝光盤放入光驅(qū),找到光盤根目錄下的SETUP.EXE雙擊它，進入設置程序熒光定量PCR檢測系統(tǒng)。據(jù)屏幕提示進行操作即可完成熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件的安裝。5.8.2卸載熒光定量PCR檢測系統(tǒng)軟件：在【開始】/【設置】/【控置面板】菜單中單擊“添加刪除程序”項，選擇“熒光定量PCR檢測系統(tǒng)”，單擊刪除即可完成卸載熒光定量PCR檢測系統(tǒng).5.9Line-Gene 基因擴增儀的維護保養(yǎng)后要及時記錄（Line-Gene 基因

44、擴增儀的維護保養(yǎng)記錄見表10）。6校準：Line-Gene 基因擴增儀校準工作需由專業(yè)工程師進行。除與儀器廠家達成協(xié)議以外，以實驗判斷儀器校準狀態(tài)也可為何時進行儀器校準提供信息。通過對室內(nèi)質(zhì)控圖的分析，及時發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差的出現(xiàn)。經(jīng)過分析排除了試劑和人員誤差后，應進行儀器狀態(tài)校驗實驗：6.1使用標準化試劑作為校驗試劑。6.2在儀器處于校準狀態(tài)下，由固定人員用標準化試劑對102、103、104、106、標準品進行擴增實驗。該實驗在兩個月應進行20次。分別計算標準曲線的斜率、截距、相關(guān)性的控制限。6.3每年6月、12月由固定人員進行上述實驗，觀察標準曲線的三個參數(shù)是否處在控制范圍和102 標準品是否檢

45、出。6.4當102 標準品未檢出、標準曲線的三個參數(shù)控制超出控制范圍或僅出現(xiàn)后者時，先排除實驗人員、試劑因素，再重復實驗。如結(jié)果依然，聯(lián)系廠家立即進行儀器校準。6.5當僅有102 標準品未檢出時，檢查實驗全過程。再次上機檢測102 標準品兩枚。如仍未檢出，則聯(lián)系廠家進行儀器校準。6.6儀器經(jīng)過校準后，重復該實驗。結(jié)果歸入儀器檔案。6.7本程序的變動程序：本程序的變動，可由任一使用該文件的工作人員向主管負責人提出，主管負責人則召集與本制度相關(guān)的所有人員進行討論，根據(jù)討論結(jié)果是否通過，如通過則公布實施。附：Line-GenePCR擴增儀文件的創(chuàng)建：1.檢測文件的創(chuàng)建：1.1在熒光定量PCR檢測系統(tǒng)

46、界面單擊“運行”鍵，進入程序設置界面。單擊“文件”菜單中的“新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。1.2單擊“編輯”菜單中“用戶信息”命令，（或單擊工具欄中的“用戶信息” 按扭），輸入用戶信息。1.3樣本信息輸入：1）“編輯”菜單中的“樣本資料”命令或單擊工具欄中的“樣本資料”按扭。2）“屬性”、“性別”欄的輸入：選中該欄中某行后單擊該行，在彈出的下拉框內(nèi)選擇屬性或性別。3）標準樣本在濃度欄設置濃度值，同濃度值的標準只能設置一個?！皾舛葐挝弧睓谳斎耄簡螕魸舛葐挝坏南吕I在下拉框內(nèi)選擇濃度單位，缺省項為“copyies/ml”。4）“名稱” 欄的輸入：選中該欄中某輸入內(nèi)容，單擊“缺省樣本

47、列表”鍵，名稱欄自動按1、2、333名稱設置，其余欄全部清空。5）“樣本編號”、“編號”欄的輸入：選中該欄中某行輸入號碼，點擊下一行，該行自動形成比上一行大一個值的號碼，也可修改。6)“類型”、“臨床診斷”欄的輸入：選中該欄中某行輸入內(nèi)容，點擊下一行的內(nèi)容，也可修改。7）“臨床醫(yī)師”、“送檢科室”欄的輸入：選中該欄中某行后單擊該行，在彈出的下拉框內(nèi)選擇臨床醫(yī)師或送檢科室。點擊下一行（無輸入內(nèi)容時），該行自動形成上一行的內(nèi)容，也可單擊該行重新選擇。8)“送檢日期”，“采樣時間”欄的輸入：雙擊該欄中某行，在彈出的對話框顯示當天日期，按Enter鍵輸入該日期，或點擊對話框左邊的下拉鍵彈出日歷界面，選

48、擇需輸入的日期按Enter鍵輸入，點擊下一行（無輸入內(nèi)空時），該行自動形成上一行的內(nèi)容，也可雙擊該行在日歷界面重新選擇。9）樣本信息內(nèi)容在打印報表時將會打?。ù蛴r類型、樣本編號、編號、姓名、年齡、性別、住院號、門診號、病歷號、臨床醫(yī)師、送檢科室、臨床診斷、采樣時間最多可選取10項打?。?，樣本信息內(nèi)容未輸入，打印報表以缺省打印。1.4樣本輸入模板：單擊“編輯”菜單中的“樣本輸入模板”命令。在樣本輸入模板中添加送檢科室、臨床醫(yī)生內(nèi)容。在樣本信息輸入時，送檢科室、臨床醫(yī)師項的輸入可選擇樣本輸入模板中已添加的送檢科室、臨床醫(yī)師內(nèi)容。1.5設置檢測通道、熒光強度增益：選擇1通道，增益值須根據(jù)不同的試劑進行設置，定量分析，熒光強度初試