Tie2在鼠急性肺損傷中的表達(dá)及意義

1、tie2在鼠急性肺損傷中的表達(dá)及意義【摘要】目的探討tie?2在急性肺損傷 (acutelunginjury, ali)中的表達(dá)及意義。方法24只 wistar大鼠隨機(jī)分為對照組與模型組，每組各12只，對照 組采用假手術(shù)處理，模型組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù) (cecalligationandpuncture, clp)制作 ali 模型，分別于假手術(shù)及clp術(shù)后12h處死全部大識(shí)，取右肺石蠟包埋， 行he染色，采用免疫組織化學(xué)法檢測tie?2在鼠肺組織中 的表達(dá)分布。結(jié)果對照組在支氣管上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞 及內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)tie?2。模型組在肺泡間隔及肺泡腔內(nèi)中 性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞均有強(qiáng)陽性的表達(dá)，在

2、tie?2陽性的 炎癥細(xì)胞附壁區(qū)域，內(nèi)皮細(xì)胞tie?2表達(dá)亦增強(qiáng)，支氣管 上皮細(xì)胞表達(dá)相對減弱，平滑肌細(xì)胞表達(dá)未見明顯差別。 結(jié)論ali模型鼠肺組織中中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表達(dá)tie?2, 同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞ti e?2表達(dá)增強(qiáng)?！娟P(guān)鍵詞】急性肺損傷；tie?2；盲腸結(jié)扎穿孔術(shù) 【a bstract】obj ectivetoexp loreexpres sionandsig ni ficanceo fan dtie?2r ecep torina ratmo delof acutel ungi njury. m eth odsthera tm odelofacu t elunginjur y(ali)w

3、asma debycecalli gationandp u ncture(cl p). wistarr ats weredev ided intoco ntrol group andmod elgr oup, and wer ekilledl 2h oursafter shamingorcl p. rightlung swereembedd edinexpres s ionanddis tr ibutiono fti e?2rece ptor sinlun gwaso bserv edbylm muno histoch emi stry. res ul tstie?2re c eptorswe

4、re expressedin bronchialep ithelialce 1 is, smooth mu sclecell san dendoth elia lcells incon trolw erehig here xpressi ons onneutro ph ilsandmac r ophagesinl ungintersti tialandalve olarspace. i nadhesion lo cationof tie ?2recep tors positi veinf lamma toryce 11s, therewa shi gherstai ni nginendot h

5、 elialcells , whereasthe rewererelat ivelydecre a sedexpres si onsonbro nch ialepit heli alcell s. therewer enodis tine tdiffer enc eonsmoot hm usclecell s betweentwo neutrophils andmacropha gesexpress t ie?2recep to rs, andme anw hileend othe lialce llsha vehig herexp ress ionsint hel ungofthe ra t

6、modelofa c utelunginj ury.keyw ords acute 1 unginjury , t ie?2, cec all igation andp unctur e急性肺損傷(acutelu ngl njury, al i)常是嚴(yán)重感染 中毒癥(severeseps is)的嚴(yán)重并發(fā)癥，病理上表現(xiàn)為肺部 大量炎性細(xì)胞的浸潤，肺水腫的形成。tie?2為血管生成素 (angio poi etin, an g)家族受體，研究發(fā)現(xiàn)tie?2在炎癥反應(yīng)中起重要作用，在鼠ali模型中存在ti e?2表達(dá)下降 及磷酸化受阻現(xiàn)象1，但其具體表達(dá)分布不明。本研究 通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（cec

7、alliga tionandpun c ture, clp） 誘導(dǎo)sepsis制作鼠al i模型，檢測t ie?2在ali鼠肺臟中 的表達(dá)分布并探討其在ali中的意義。1材料與方法實(shí)驗(yàn)主要試劑濃縮型t i e?2兔抗鼠多克隆抗體、sabc 試劑盒及d ab顯色試劑盒均購自中杉金橋生物技術(shù)有限公 司。實(shí)驗(yàn)分組健康清潔級成年雄性wi star大鼠24只（山 東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），隨機(jī)分為兩組，對照組12只 模型組12只。ali大鼠模型制備及標(biāo)本處理ali大鼠模型制備：術(shù)前大鼠禁食12h，禁水8h, 3% 水合氯醛行腹腔麻醉，75 %乙醇消毒腹部，沿腹白線中段作 一長cm的切口，剪開皮膚和肌層，

8、探查腹腔分離盲腸，在 距盲腸末端1 cm處用3?0絲線結(jié)扎盲腸，注意避免結(jié)扎盲 腸動(dòng)脈及引起腸梗阻，用1 6g穿刺針在盲腸游離面（腸系 膜對面）上貫穿3次，針孔間距約3mm，并擠出少許內(nèi)容 物，還納腸管。術(shù)畢逐層關(guān)腹，并于腹壁皮下注射林格液 3 ml/100 g抗休克處理。術(shù)后自由進(jìn)食飲水。對照組僅做無 菌開腹與盲腸翻動(dòng)。標(biāo)本處理：分別于假手術(shù)及clp術(shù)后12h處死全部大鼠，剪取右肺組織，常規(guī)石蠟包埋，he染色觀察肺部病理 變化，免疫組化sabc法觀察tie?2表達(dá)分布，具體步驟按 試劑盒說明操作。2結(jié)果2. 1肺組織病理學(xué)變化對照組大鼠肺臟光鏡下肺組織結(jié) 構(gòu)清楚，肺間質(zhì)有僅有少許炎性細(xì)胞，肺

9、泡壁結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)未見水腫液及肺泡萎陷模型組光鏡下見肺泡間隔增厚，肺間質(zhì)充血水腫，大量中性粒細(xì)胞及少量巨 噬細(xì)胞浸潤，部分肺泡萎縮塌陷（圖2）。免疫組化病理結(jié)果分析對照組tie?2主要表達(dá)于支氣管 上皮細(xì)胞（圖3 ）、內(nèi)皮細(xì)胞（圖4），在支氣管及血管平 滑肌細(xì)胞亦有較弱的表達(dá)，肺泡腔未見有明顯陽性表達(dá)細(xì) 胞（圖5）。模型組支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)相對減弱（圖6），在tie?2陽性的炎癥細(xì)胞附壁區(qū)域，內(nèi)皮細(xì)胞tie?2表達(dá)增 強(qiáng)（圖7），在肺泡間隔及肺泡腔內(nèi)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞 均有強(qiáng)陽性的表達(dá)（圖8），平滑肌細(xì)胞表達(dá)未見明顯差別。 3討論眾多肺內(nèi)外因素均可引起ali，其中sepsis是重要的 肺外

10、因素。cl p術(shù)由腸源性感染誘導(dǎo)sepsi s致ali，能較 好的模擬疾病的自然病理生理過程。本實(shí)驗(yàn)大鼠在clp術(shù)后12h肺臟病理變化以肺泡中隔變化為主，表現(xiàn)肺間質(zhì)充血 水腫，大量中性粒細(xì)胞及少量巨噬細(xì)胞浸潤，肺泡結(jié)構(gòu)破 壞，與國外的模型報(bào)道相符2。tie?2廣泛表達(dá)于成人脈 管系統(tǒng)中3 ，對維持正常血管完整性有重要作用。tie?2 配體包括ang?l、ang ?2、ang?4 ,其中ang?l可以激動(dòng) tie?2,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，拮抗凋亡，募集血管周圍支持 細(xì)胞，穩(wěn)定血管，防止?jié)B漏，a n g?2作用較復(fù)雜，通常認(rèn) 為可以抑制ti e?2，對血管起去穩(wěn)定作用，但在體外實(shí)驗(yàn) 中高濃度或長時(shí)間

11、刺激tie?2時(shí)也可激動(dòng)受體4, 5， an g?4可以激動(dòng)t ie ?2，但研究較少。最新的研究表 明，ang /tie?2系統(tǒng)在炎癥反應(yīng)內(nèi)皮細(xì)胞活化中起重要作用 6。lemieux等7 通過rt?pcr、免疫組化及共聚焦顯微 鏡首次發(fā)現(xiàn)tie?2表達(dá)于中性粒細(xì)胞，且ang?2可以較弱的 激動(dòng)中性粒細(xì)胞t ie ?2。在內(nèi)皮細(xì)胞t i e?2的活化可誘導(dǎo) p選擇素的定位，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞粘附能力的增加，而中性 粒細(xì)胞tie?2活化可以進(jìn)一步增強(qiáng)其粘附能力。本研究亦 發(fā)現(xiàn)在tie?2陽性的中性粒細(xì)胞附壁區(qū)域，內(nèi)皮細(xì)胞tie?2 亦染色增強(qiáng)，提示兩者tie?2可能同時(shí)存在活化現(xiàn)象。mu rd oc

12、h等8通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低氧血癥能上調(diào)單核 細(xì)胞？巨噬細(xì)胞較強(qiáng)強(qiáng)度表達(dá)tie ?2，其中組織巨噬細(xì)胞有 著最強(qiáng)的表達(dá)，推斷a ng?2可能趨化tie ?2陽性單核細(xì)胞的游走至炎癥區(qū)或腫瘤組織，易化血管新生。本研究亦發(fā) 現(xiàn)肺泡巨噬細(xì)胞高強(qiáng)度的表達(dá)t ie?2,在大血管及支氣管 粘膜下層亦有陽性表達(dá)tie?2的巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞作用 仍不清楚，是否與ali損傷后組織修復(fù)有關(guān)有待進(jìn)一步研 究。綜上所述，本研究表明a li時(shí)肺組織中性粒細(xì)胞及巨 噬細(xì)胞表達(dá)ti e?2,同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞tie?2表達(dá)增強(qiáng)，tie?2 參與了ali的病變過程?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 ma hroom, tham i rn,salm

13、an q, etofangi opo ietinex pres sionby bacte riall ipopol ysac charidej . amjphys io llungcell m olphysiol,2017,294(5) : l955?963.2 oztur ke ,demirbi lek s,begez ,etl efluno midea ttenu atethe seps is?indu ced acutelun gi njuryj p ediatrsurg int, 2017, 24 :899?905.3 wongal，h aroonza, wer ners,et exp

14、r ession andph ospho rylati onin angioge nic andquies ce ntadultti s sues j ci rcrep，1997,81:567?74.4 korff t，kimminas，ma rtiny?b aron g, etve sselm atura tionin a3?d imensio nal spheroid a.lcoculture m odel:direc tcontactwit hsmoothmusclecellsreg u latesendo th elialcel lqu iescenc eand abroga tesv

15、e gfres ponsiv enes s j . fa seb j, 2001, 1 5(2) :447?45 7 .5 teic hert?kulisz ewskak, mai s onpierrep c, jonesn, e tac tionofa ngio poieti n?2in afibr inmatr ixmo delofan gio genesisi sa ssociated w ithactivat ionoftie2 j cardiovas cres，2001, 4 9:659?670 .6 fie dler u, reis sy, sc harpf enecke rm, e t?2sens iti zesendot he lialcells t otnf?alpha andhasacruc ialroleinth einduction o finflamma ti onj . na tme d, 2017, 12(2) : 1717172.7 lemieux cr, malibaj，fa vierjf, et c andirectly activateend oth