流式細(xì)胞儀介紹 ppt課件

1、流式細(xì)胞儀產(chǎn)品介紹流式細(xì)胞儀產(chǎn)品介紹 楊海霞楊海霞德國(guó)美天旎生物技術(shù)公司德國(guó)美天旎生物技術(shù)公司 (僅供內(nèi)部培訓(xùn)僅供內(nèi)部培訓(xùn)) 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 流式細(xì)胞儀基本原理流式細(xì)胞儀基本原理 macsquant流式的性能流式的性能 流式的競(jìng)爭(zhēng)分析流式的競(jìng)爭(zhēng)分析流式細(xì)胞儀基本原理流式細(xì)胞儀基本原理 流式細(xì)胞術(shù)（流式細(xì)胞術(shù)（fcm）：）： 就是對(duì)在高速流動(dòng)的鞘液包括下的細(xì)胞、粒子進(jìn)就是對(duì)在高速流動(dòng)的鞘液包括下的細(xì)胞、粒子進(jìn)行分析和分選的技術(shù)，這種細(xì)胞或粒子是經(jīng)過(guò)特異熒行分析和分選的技術(shù)，這種細(xì)胞或粒子是經(jīng)過(guò)特異熒光標(biāo)記的。其特點(diǎn)是測(cè)量速度快，每秒鐘能測(cè)數(shù)千個(gè)光標(biāo)記的。其特點(diǎn)是測(cè)量速度快，每秒鐘能測(cè)數(shù)千個(gè)乃至

2、上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，且可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量。乃至上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，且可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量。流式細(xì)胞術(shù)的概念流式細(xì)胞術(shù)的概念流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展趨勢(shì)流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展趨勢(shì) 單純到復(fù)雜單純到復(fù)雜 檢測(cè)熒光參數(shù)檢測(cè)熒光參數(shù) 定量定量 手動(dòng)到自動(dòng)手動(dòng)到自動(dòng) 熒光試劑熒光試劑液流檢測(cè)器 光源電子計(jì)算機(jī)層流鞘液細(xì)胞樣本鞘液注射口激光流動(dòng)室流式細(xì)胞檢測(cè)原理流式細(xì)胞檢測(cè)原理細(xì)胞可被檢測(cè)的參數(shù)細(xì)胞可被檢測(cè)的參數(shù)(無(wú)探針標(biāo)記)散射光信號(hào)散射光信號(hào): 細(xì)胞內(nèi)在的結(jié)構(gòu)參數(shù) 細(xì)胞大小細(xì)胞大小 前向角散射前向角散射 (fsc) 細(xì)胞內(nèi)部顆粒性細(xì)胞內(nèi)部顆粒性 側(cè)向角散射側(cè)向角散射 (ssc) forward light detector cell sur

3、face areaincident light source 是細(xì)胞或細(xì)胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出是細(xì)胞或細(xì)胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長(zhǎng)不同。的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長(zhǎng)不同。 區(qū)分陰陽(yáng)性區(qū)分陰陽(yáng)性：通過(guò)熒光強(qiáng)度可將同一個(gè)細(xì)胞群體通過(guò)熒光強(qiáng)度可將同一個(gè)細(xì)胞群體中的有熒光標(biāo)記的細(xì)胞與無(wú)熒光標(biāo)記的細(xì)胞區(qū)分中的有熒光標(biāo)記的細(xì)胞與無(wú)熒光標(biāo)記的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。開(kāi)來(lái)。 區(qū)分陽(yáng)性強(qiáng)弱：區(qū)分陽(yáng)性強(qiáng)弱：也可以將陽(yáng)性細(xì)胞中的高也可以將陽(yáng)性細(xì)胞中的高fl的的細(xì)胞與低細(xì)胞與低fl的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。相對(duì)熒光強(qiáng)度相對(duì)熒光強(qiáng)度（fl） (需探針標(biāo)記需探針標(biāo)記) 散點(diǎn)

4、圖 密度圖二維等高圖直方圖圖 報(bào)告中常見(jiàn)的幾種流式細(xì)胞圖如何看流式圖如何看流式圖流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用 染色體核型分析在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用 用于性別的預(yù)選擇 在微生物學(xué)中的應(yīng)用在細(xì)胞周期研究中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在免疫學(xué)中的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)上的應(yīng)用在血液學(xué)研究中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)新的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)新的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用=hivhiv免疫分型，免疫分型，cd4cd4絕對(duì)計(jì)數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù)=白血病和淋巴瘤的免疫分型白血病和淋巴瘤的免疫分型=腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分

5、析腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分析=網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)=細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)=干細(xì)胞計(jì)數(shù)干細(xì)胞計(jì)數(shù)=殘量白血病細(xì)胞檢查殘量白血病細(xì)胞檢查=hla-b27hla-b27檢查檢查=血小板功能及相關(guān)疾病血小板功能及相關(guān)疾病11臨床意義臨床意義 了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài) 輔助臨床疾病的診斷 探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后 監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案 免疫系統(tǒng)疾病 免疫缺陷病，aids 移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè) 腫瘤病人化療后免疫力檢測(cè)流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用=樹(shù)突細(xì)胞研究樹(shù)突細(xì)胞研究=干細(xì)胞研究干細(xì)胞研究=癌癥病人的多藥

6、耐藥性癌癥病人的多藥耐藥性=細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡=流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究=細(xì)胞系的鑒定細(xì)胞系的鑒定=細(xì)胞內(nèi)蛋白的分析細(xì)胞內(nèi)蛋白的分析=細(xì)胞膜電位測(cè)定細(xì)胞膜電位測(cè)定=細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定流式細(xì)胞儀潛在客戶流式細(xì)胞儀潛在客戶 醫(yī)院醫(yī)院：血液科，檢驗(yàn)科，風(fēng)濕免疫病科，：血液科，檢驗(yàn)科，風(fēng)濕免疫病科，腫瘤科，細(xì)胞治療科腫瘤科，細(xì)胞治療科,開(kāi)展移植（肝腎）的開(kāi)展移植（肝腎）的科室?？剖?。 科研院所及大專院?？蒲性核按髮Ｔ盒＃好庖呦祷蛎庖邔?shí)驗(yàn)：免疫系或免疫實(shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)室，腫瘤研室，中心實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)室，腫瘤研究所，血液病研究

7、所。究所，血液病研究所。macsquantmacsquant流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀細(xì)胞分析的里程碑細(xì)胞分析的里程碑多參數(shù)細(xì)胞分析多參數(shù)細(xì)胞分析macsquant光學(xué)參數(shù)光學(xué)參數(shù)excitation (nm)405 nm488 nm635 nm488 nmoptical channelfl1fl2fl3fl4fl5fl6fl7ssc/fscfilters450/50525/50585/40655-730750(lp)655-730750(lp)488/10fluorochromesvioblue/pacificblue fitcpepi/7-aad/pe-cy5.5/percppe-cy7apca

8、pc-cy7fsc/sscn三激光三激光紫色 (405 nm)40 mw藍(lán)色 (488 nm)25 mw紅色(635 nm)20 mwn9 9個(gè)光學(xué)參數(shù)個(gè)光學(xué)參數(shù)nfsc/ssc + 7 fsc/ssc + 7 個(gè)熒光通道個(gè)熒光通道m(xù)acsquant光路系統(tǒng)光路系統(tǒng)macsquant流式細(xì)胞儀的創(chuàng)新特性：流式細(xì)胞儀的創(chuàng)新特性：n 集成，臺(tái)式數(shù)字化流式細(xì)胞儀強(qiáng)大并且直觀的軟件n多參數(shù)：3激光，9個(gè)參數(shù)（fsc,ssc,fl1-7)n12寸觸摸屏（內(nèi)置）n不同用戶登錄模式，可用密碼進(jìn)行保護(hù)n2種不同的模式（針對(duì)有豐富經(jīng)驗(yàn)和無(wú)流式經(jīng)驗(yàn)的人員）n分析速度可達(dá)10000個(gè)細(xì)胞/秒,無(wú)需計(jì)數(shù)微珠進(jìn)行絕對(duì)計(jì)

9、數(shù)n不同的流速控制：25/50/100ul/分鐘n自動(dòng)化處理樣本，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清潔，自動(dòng)補(bǔ)償,自動(dòng)標(biāo)記n矩陣補(bǔ)償和脫機(jī)補(bǔ)償n小巧（60x35x40cm）、低噪、低熱。 流式細(xì)胞儀基本特征流式細(xì)胞儀基本特征n細(xì)胞富集系統(tǒng)n絕對(duì)計(jì)數(shù)，無(wú)需微珠n自動(dòng)補(bǔ)償n自動(dòng)進(jìn)樣n自動(dòng)標(biāo)記a new milestone in cell analysismacsquant 分析儀分析儀功能強(qiáng)大、操作簡(jiǎn)單的多參數(shù)細(xì)胞分析的理想工具功能強(qiáng)大、操作簡(jiǎn)單的多參數(shù)細(xì)胞分析的理想工具 (高端儀器 操作簡(jiǎn)單 多種自動(dòng)化選擇) macs 富集系統(tǒng)富集系統(tǒng)n使用macs微珠磁性富集細(xì)胞n細(xì)胞被富集后再進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析預(yù)富集的應(yīng)用：

10、預(yù)富集的應(yīng)用：n內(nèi)皮祖細(xì)胞檢測(cè)頻率:每 105 pbmcs 中有1個(gè)細(xì)胞(如 cd34的預(yù)富集)n腫瘤細(xì)胞檢測(cè)頻率: 每 107 pbmcs 中有1個(gè)細(xì)胞 (如 epcam的預(yù)富集)n抗原特異性t細(xì)胞檢測(cè)(如 cd154的預(yù)富集)成分檢測(cè)成分檢測(cè)n可以只檢測(cè)富集后組分或者同時(shí)檢測(cè)原始標(biāo)本、陰性組分和陽(yáng)性組分macsquant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：高靈敏度地分析稀有細(xì)胞高靈敏度地分析稀有細(xì)胞n每次反應(yīng)后，自動(dòng)計(jì)算每 l體積中的細(xì)胞數(shù)無(wú)須計(jì)數(shù)磁珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，可以完全替代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀ncd4絕對(duì)計(jì)數(shù)用于輔助hiv監(jiān)測(cè)治療ncd34絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)用于干細(xì)胞移植macsquant流式細(xì)胞儀獨(dú)

11、有特征：絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)(容積型容積型)自動(dòng)化的多樣本處理：自動(dòng)化的多樣本處理：使用使用 macs minisampler 和和 macs 冷凍試管架冷凍試管架n靈活性高，可使用不同的試管靈活性高，可使用不同的試管 5 ml tubes 15 ml tubes 50 ml tubesn通量高通量高(從從chill 96 rack 到到 96孔板孔板)macsquant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)進(jìn)樣macsquant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：自動(dòng)標(biāo)記自動(dòng)標(biāo)記macs微型載樣器上的試劑架，可最多放置微型載樣器上的試劑架，可最多放置4支染色試劑，如：支染色試劑，如：npi / 7-aadn熒

12、光素標(biāo)記的抗體n抗體混合物 (如macs mc cocktails)全系列試劑全系列試劑 (抗體抗體 和試劑盒和試劑盒),如如:nmacs 對(duì)照抗體混合物:mc cd14 monocyte cocktail, humanmc cd19 b cell cocktail, humanmc cd34/cd133 cocktail, humanmc cd34 cocktail, human mc cd4 t cell cocktail, mousemc cd90 pan t cell cocktail, mousemc cd19 b cell cocktail, mousemacsquant流式細(xì)胞儀

13、獨(dú)有特征：完全自動(dòng)化的儀器設(shè)置完全自動(dòng)化的儀器設(shè)置n全自動(dòng)的儀器校準(zhǔn) (使用 macs calibration beads) n7x7 矩陣補(bǔ)償n自動(dòng)補(bǔ)償，對(duì)多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償值n手動(dòng)補(bǔ)償儀器操作簡(jiǎn)單、易行儀器操作簡(jiǎn)單、易行:n溶液瓶 (1.5l) 附著在儀器兩側(cè)(通過(guò)瓶子上不同的指示燈來(lái)顯示機(jī)器狀態(tài))結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)：n數(shù)字化n分析速率 10,000 events /秒n流速: 25 / 50 / 100 l/minmacsquant analyzer自動(dòng)化的儀器設(shè)置自動(dòng)化的儀器設(shè)置n自動(dòng)校準(zhǔn)儀器（使用macs校準(zhǔn)微珠）n自動(dòng)補(bǔ)償n7x7自動(dòng)矩陣補(bǔ)償n自動(dòng)清洗自動(dòng)化進(jìn)樣和抗體標(biāo)記自動(dòng)化進(jìn)樣和抗體

14、標(biāo)記帶有清洗工作站（帶有清洗工作站（washing station）的進(jìn)樣針）的進(jìn)樣針n自動(dòng)化進(jìn)樣針臂（y,z方向移動(dòng)）n無(wú)加壓系統(tǒng)溶液瓶附著在儀器上溶液瓶附著在儀器上n儀器狀態(tài)能夠通過(guò)溶液瓶的不同顏色來(lái)指示用戶友好的儀器操作用戶友好的儀器操作n12觸摸屏（內(nèi)嵌）觸摸屏（內(nèi)嵌）nlive support 遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，德國(guó)工程師進(jìn)遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，德國(guó)工程師進(jìn)行遠(yuǎn)程在線檢修機(jī)器行遠(yuǎn)程在線檢修機(jī)器nvga 接口接口 (連接第二個(gè)顯示器或者代替的顯示連接第二個(gè)顯示器或者代替的顯示器器)n功能強(qiáng)大、易于操作功能強(qiáng)大、易于操作直觀的操作界面 (用于儀器控制, 數(shù)據(jù)獲取和數(shù)據(jù)分析)不同的用戶模式拖拉式安裝含

15、預(yù)設(shè)程序在個(gè)人電腦上進(jìn)行獨(dú)立數(shù)據(jù)分析macsquant 數(shù)據(jù)（mqd)文件 -fcs格式-fcs3.0 -與其它流式軟件兼容軟件基本特征軟件基本特征簡(jiǎn)捷的數(shù)據(jù)處理簡(jiǎn)捷的數(shù)據(jù)處理:n個(gè)人用戶登錄n數(shù)據(jù)自動(dòng)保存在對(duì)應(yīng)的用戶文件夾中nmqd 文件 (內(nèi)部格式)n數(shù)據(jù) 儲(chǔ)存/備用: 可用硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器 / dvd rw 驅(qū)動(dòng)器, usb 接口, 以太網(wǎng)絡(luò)連接軟件基本特征軟件基本特征軟件簡(jiǎn)單易操作軟件簡(jiǎn)單易操作:n鍵盤(pán)在顯示屏上 (觸摸式顯示屏)nusb接口 可用來(lái)連接外設(shè)的鼠標(biāo)、鍵盤(pán)n條形碼讀碼器macsquant analyzer a new milestone in cell analysismacs

16、quant analyzer a new milestone in cell analysismacsquant analyzer a new milestone in cell analysis流式相關(guān)抗體針對(duì)流式檢測(cè)的全系列抗體。-fitc-pe-apc-vioblue-北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所流式細(xì)胞儀檢測(cè)報(bào)告流式細(xì)胞儀檢測(cè)報(bào)告姓名： 性別： 年齡： 標(biāo)本：病歷： 診斷： 編號(hào)：淋巴細(xì)胞占有核細(xì)胞 %cd3+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %cd4+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %cd8+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %cd14+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %簽名： 審核者： 日期：競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì):n 預(yù)富集

17、功能，高敏感性檢測(cè)罕見(jiàn)細(xì)胞，比如臨床最常用的造血干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、pdc等。n 非常節(jié)省細(xì)胞，對(duì)于科研珍貴標(biāo)本尤為重要！n 絕對(duì)的細(xì)胞計(jì)數(shù)，無(wú)需計(jì)數(shù)微珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，可以完全代替細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。n 自動(dòng)標(biāo)記，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清洗，節(jié)省時(shí)間。n 自動(dòng)補(bǔ)償，對(duì)多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償數(shù)值n 小巧的臺(tái)式機(jī)設(shè)計(jì),低噪，低熱n 非加壓系統(tǒng)進(jìn)樣macsquant analyzer a new milestone in cell analysis34(25)儀器的競(jìng)爭(zhēng)分析儀器的競(jìng)爭(zhēng)分析 bd的各種機(jī)型（一）的各種機(jī)型（一）caliburarialsr iibd的各種機(jī)型（二）的各種機(jī)型（二） ca

18、nto iiinfluxbeckman的各種儀器（一）的各種儀器（一）epics xl-adc cytomics fc500gallios mofloepics xl-altra quanta partec公司各種機(jī)型（適合植物學(xué)研究）公司各種機(jī)型（適合植物學(xué)研究）amnis公司的imagestreamx圖像流式細(xì)胞儀 被評(píng)為被評(píng)為2008年年度生命科學(xué)十度生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品之大創(chuàng)新產(chǎn)品之一，是流式細(xì)一，是流式細(xì)胞儀上的新突胞儀上的新突破破 .milipore公司的公司的guavaeasycyte mini/easycyte plus無(wú)鞘液毛細(xì)管細(xì)胞分析儀無(wú)鞘液毛細(xì)管細(xì)胞分析儀 accuri

19、 的的c6-流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀 一種全功能、二激光、六探測(cè)器分析流式細(xì)胞儀系統(tǒng)一種全功能、二激光、六探測(cè)器分析流式細(xì)胞儀系統(tǒng) macsquant analyzer “add-ons” macs minisampler chill racks (chill 5, 15, 50 or 96 well adapter) macsquant columns additional years of service fluorochromes, macs control cocktails and microbeads instrument training macsquant calibration

20、beads macsquant starting buffer kit individual buffer/solution boxes macsquant analyzers in the world belgium canada china france germany iceland ireland italy japan russia south korea syria united kingdom united states coming soon to the list is: australia flow cytometry market estimated to be $1.5

21、 billion in 2008 (cagr 10-15%, $3.7 billion in 2015) instruments 68% - $1.02 billion reagents 32% - $480 million sales in 2009 total 6.1 million (4.7 million ) instruments 2.632 million (0.36%) reagents 3.4 million ( 0.99%) who buys the macsquant analyzer innovators are the first to purchase instrum

22、ents and new gadgets most countries are currently selling to the early adopters some countries have sold a few mq and are now selling to the researchers who want/need greater scientific arguments . must be targeted to maximize our success guidelines have been followed in several countries and succes

23、s is seen!what have we learned? miltenyi biotec is still a new player in flow cytometry what is the mb track record in flow cytometry? what is the capability of mb service (in us, eu and around the world) macsquant is a huge project underestimated level of need on all levels we need an improved macs

24、quant support structure combination with macsquant is a powerful tool fluorochromes automacs pro gentlemacs macsquant is the unifier of macs brand not the divider goals 2010 macs cell analysis gain customer awareness in the market place introduce macs cell analysis as a flow cytometry provider (flow cytometer, fluorochromes and kits, assays and application