山東高等學(xué)校國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目

1、山東省高等學(xué)校國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目結(jié)題申請(qǐng)書學(xué) 校煙臺(tái)大學(xué)項(xiàng)目編號(hào)201711066026項(xiàng)目名稱不同砧木對(duì)西瓜含糖量及果型影響的生理和分子機(jī)制的研究項(xiàng)目類型國家級(jí)研究期限項(xiàng)目起始時(shí)間：2017 年 4 月計(jì)劃完成時(shí)間： 2018 年 4 月實(shí)際完成時(shí)間： 2018 年 6 月項(xiàng)目負(fù)責(zé)人及成員姓名年級(jí)學(xué)號(hào)聯(lián)系電話項(xiàng)目分工王楠2015級(jí)20157050123517853509622為項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，參與實(shí)驗(yàn)并重點(diǎn)負(fù)責(zé)團(tuán)隊(duì)內(nèi)成員的分工張前程2015級(jí)20157050123215684150030勤于思考，參與實(shí)驗(yàn)并重點(diǎn)負(fù)責(zé)項(xiàng)目工作的監(jiān)督和檢查吳子文2015級(jí)2015705012411785

2、3509608參與實(shí)驗(yàn)并重點(diǎn)負(fù)責(zé)記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和歸納總結(jié)齊亞平2015級(jí)20157050122317853509635參與實(shí)驗(yàn)并重點(diǎn)負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)前材料的整理指 導(dǎo) 教 師姓名專業(yè)技術(shù)職務(wù)承擔(dān)的工作陳世華副教授負(fù)責(zé)指導(dǎo)小組成員解決學(xué)術(shù)和技術(shù)上的問題一、項(xiàng)目實(shí)施情況（請(qǐng)就研究目標(biāo)、研究過程、研究成果、研究心得作全面總結(jié)，3000字以內(nèi)）： 1、 研究目標(biāo)（1） 完成嫁接西瓜的種植及樣品（芽和幼瓜）的采集工作。（2） 根據(jù)查閱文獻(xiàn)以及對(duì)轉(zhuǎn)錄本的分析篩選出與嫁接西瓜果型和含糖量有關(guān)的基因，并完成相關(guān)基因的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。2、 研究過程（1） 接穗及砧木種子的催芽，光照培養(yǎng)箱中27培養(yǎng)至露白；（2） 露白

3、的種子種在穴盤中；（3） 砧木剛長出真葉，接穗剛長出子葉，多菌靈噴灑砧木及接穗幼苗滅菌，并避光處理一天后，采用斜插法進(jìn)行嫁接（白籽砧木西瓜接穗、黑籽砧木西瓜接穗、葫蘆砧木西瓜接穗、瓠瓜砧木西瓜接穗、西瓜砧木西瓜接穗）；（4） 嫁接后的幼苗避光且保持濕潤約十天，待傷口愈合后將其移栽大田；（5） 對(duì)大田里的幼苗定期進(jìn)行澆水、除草并進(jìn)行一定程度的松土；（6） 嫁接后的幼苗抽蔓并長出幼果時(shí)，及時(shí)摘取長勢一致且品質(zhì)優(yōu)良的幼果和嫩芽，做好標(biāo)記并立即放入冰中，分成兩份。隨后，將一份收集到的幼果及嫩芽及時(shí)進(jìn)行-80冷凍處理并保存，作為接下來的實(shí)驗(yàn)材料，然后將另一份送入安諾優(yōu)達(dá)基因科技（北京）有限公司進(jìn)行轉(zhuǎn)錄本

4、基因組測序；（7） 根據(jù)轉(zhuǎn)錄本基因組測序結(jié)果，從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選與嫁接西瓜含糖量及果型遺傳相關(guān)的關(guān)鍵基因，找到這些基因?qū)?yīng)的cDNA序列并設(shè)計(jì)引物；（8） 與嫁接西瓜含糖量及果型遺傳相關(guān)的關(guān)鍵基因均在各嫁接品系中表達(dá)且表達(dá)量不同，我們選擇提取黑籽砧木嫁接西瓜所得幼果和瓠瓜砧木嫁接西瓜所得嫩芽的總RNA；（9） 將提取的總的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄：RNA溶液，T25（1L），DEPC水（補(bǔ)齊10L）。共10L體系。72，3min；4，5×Buffer（4L），10mM dNTP（1L），RRI（0.3L），M-M（1L），DEPC水（3.7L）。共20L體系。42，90min；70，15mi

5、n；4，利用以上方法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得cDNA；對(duì)反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增：2×Taq Plus Master Mix（5L），正反向引物各0.4L，10×cDNA 1L，ddH2O 3.2L。共10L體系。 95，3min（預(yù)變性）；95，15sec；Tm,20sec；72，60sec/kb；72，5/10min；4，利用所得的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，40個(gè)循環(huán)，1%的瓊脂糖凝膠電泳，得目的條帶；（10）目的條帶測序 方法一：溶膠回收測序 紫外燈下切取目的條帶置于1.5mL EP管中，利用FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit D

6、NA片段回收試劑盒對(duì)目的條帶進(jìn)行回收，回收后電泳檢查目的條帶的濃度和純度。將濃度和純度較優(yōu)的條帶及時(shí)送去華大科技測序部測序。 方法二:連接質(zhì)粒測序?qū)Τ霈F(xiàn)目的條帶的產(chǎn)物進(jìn)行切膠回收（若無雜帶則無需回收），并把得到的濃度高的目的基因片段與質(zhì)粒載體連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)繁，提取重組載體，并對(duì)其進(jìn)行酶切檢測，將檢測效果好的質(zhì)粒載體進(jìn)行測序。 （11）對(duì)比NCBI數(shù)據(jù)庫中的和測序公司給出的基因序列，判斷嫁接西瓜含糖量及果型遺傳相關(guān)的關(guān)鍵功能基因的正確序列。3、 研究成果（詳見附件1）（1） 轉(zhuǎn)錄組概況分析在ClBZf_Clf、ClHGf_Clf、ClHLf_Clf、ClHZf_Clf、

7、HGy_XGy、HLy_XGy、HZy_XGy、BZy_XGy品系中，我們分別測出18771個(gè)，18695個(gè)，18557個(gè)，18673個(gè)，19075個(gè)，19180個(gè)，19141個(gè)，19133個(gè)基因，其中有表達(dá)差異顯著的基因如下表所示：NameClBZf_ClfClHGf_ClfClHLf_ClfClHZf_ClfHGy_XGyHLy_XGyHZy_XGyBZy_XGyUp2,8725903402,2581,3951,791734756Down3,5441,3911,9794,4243,6611,4901,1211,121Total6,4161,9812,3196,6825,0563,2811,

8、8551,877附注：（1）Up：表示在第一組（前者）中表達(dá)上調(diào)的基因；（2）Down：表示在第一組（后者）中表達(dá)下調(diào)的基因；（3）Total：表示在兩組中有差異基因數(shù)目總和。（2）在不同品系中表達(dá)差異的基因表Gene品系countnormalizeClf_countClf_normalizeFoldChangeLog2FoldChangeUp/Down含糖量Cla006123（瓜）白籽10011532.4803719192121187.8821180.448260281-1.157591424down黑籽12905701.4982709192121187.8821180.590545358-

9、0.759880222down瓠瓜13097689.2759203192121187.8821180.580256163-0.785238154down葫蘆17132979.2706937192121187.8821180.824383732-0.27861206downCla005565（瓜）白籽92949.4130721768142.10637741.1735294080.230853996up黑籽123066.8611292768142.10637741.5879097990.667128963up瓠瓜85244.8395116568142.10637741.0649102210.090

10、731806up葫蘆87249.8438036968142.10637741.1837590120.243375408upCla017594（瓜）白籽82243.721792681350.267965980.869774453-0.201286761down黑籽37620.4388492781350.267965980.406597897-1.29832534down瓠瓜83443.8921980281350.267965980.873164394-0.195674795down葫蘆62435.6680430181350.267965980.709558112-0.495007252downC

11、la020400（芽）白籽1641559160.1919521435410821.453940.846484401-0.240444613down黑籽1118406677.52640421435410821.453940.6170637-0.696508667down瓠瓜46570024893.8390321435410821.453942.3004153761.201894386up葫蘆641524134.40156321435410821.453940.382056015-1.388143922downCla003995（芽）白籽14789825.257097252081272.60144

12、80.648480401-0.624865123down黑籽204691222.123462252081272.6014480.960334804-0.058390631down瓠瓜399692136.529637252081272.6014481.6788678340.747488661up葫蘆11205722.1282192252081272.6014480.567442557-0.817453742down果型Cla005676（瓜）白籽1286.80825967495158.800535850.115785674-3.110471333down黑籽894.8379191195158.8

13、00535850.082276786-3.60337075down瓠瓜79741.9449422495158.800535850.713342857-0.487332443down葫蘆158390.4847950195158.800535851.5388430340.621846081upCla005676（芽）白籽82846.20412985117359.217768120.780240987-0.358008308down黑籽94556.42223222117359.217768120.952792279-0.069766373down瓠瓜71538.22008784117359.2177

14、68120.645415879-0.631699023down葫蘆66142.59944247117359.217768120.719369267-0.475195568down（3）Cla017594基因序列驗(yàn)證及功能分析Cla017594基因編碼蔗糖磷酸酶1（sucrose-phosphatase 1），該酶催化蔗糖合成的最后一步，其表達(dá)量與蔗糖的含量正相關(guān)。對(duì)Cla017594基因進(jìn)行測序的核苷酸序列長為1540bp，ORF區(qū)為178-1477，編碼423個(gè)氨基酸，與NCBI上的相應(yīng)的氨基酸序列相似度達(dá)到了93%。 4、研究心得 在不斷探索中求得真知，在無盡未知中探索真理?？蒲械倪M(jìn)步需要

15、創(chuàng)新點(diǎn)的激發(fā)，本次課題以嫁接西瓜含糖量及果型遺傳相關(guān)的關(guān)鍵功能基因的正確序列的研究為創(chuàng)新出發(fā)點(diǎn)，以扎實(shí)的科學(xué)理論知識(shí)為基礎(chǔ)，并聯(lián)系社會(huì)生產(chǎn)實(shí)踐。但是在課題進(jìn)行的過程中，我們也遇到了一些挫折，導(dǎo)致我們的實(shí)驗(yàn)進(jìn)度有點(diǎn)推遲，盡管如此，我們還是在全團(tuán)隊(duì)成員的積極努力下，相對(duì)成功的完成了此次課題。課題伊始，我們對(duì)購買來的接穗及砧木的種子進(jìn)行催芽、培養(yǎng)、栽種。查閱網(wǎng)絡(luò)上相關(guān)視頻，咨詢有經(jīng)驗(yàn)的嫁接工作者，進(jìn)行各品系砧木和接穗的有效嫁接。查閱相關(guān)嫁接信息，對(duì)嫁接苗進(jìn)行合理的管理。吃苦耐勞，走進(jìn)大田，對(duì)嫁接苗進(jìn)行及時(shí)的除草澆水工作。善于觀察，及時(shí)整理，收集大量的不同品系幼果嫩芽，積累實(shí)驗(yàn)所需材料。由于本組成員不

16、具備嫁接經(jīng)驗(yàn)，第一批嫁接苗嫁接效果并不理想，加之缺乏大田管理經(jīng)驗(yàn)，出現(xiàn)嫁接幼苗枯萎凋謝等現(xiàn)象。對(duì)于嫁接苗成活率低的這一問題，我組成員及時(shí)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，通過轉(zhuǎn)變嫁接技術(shù)，由之前對(duì)砧木損傷較大的頂插技術(shù)換成了簡便快速的斜插技術(shù)，注意嫁接苗的避光濕潤處理，并且及時(shí)詢問有經(jīng)驗(yàn)的指導(dǎo)老師，及時(shí)松土，按時(shí)澆水，做好大田嫁接苗管理工作。而后，我們才順利的得到了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)材料并得以進(jìn)行接下來的實(shí)驗(yàn)。這使我們認(rèn)識(shí)到知識(shí)的學(xué)習(xí)不僅限于課堂書本的基礎(chǔ)知識(shí)，還要積極主動(dòng)地去動(dòng)手實(shí)踐，而且知識(shí)的來源不只僅限于課本，實(shí)踐也是知識(shí)很主要也是很重要的來源。此后，我們勇于探索，大膽猜想，仔細(xì)剖析不同砧木轉(zhuǎn)錄本基因組信息，解鎖性

17、狀與基因之間的聯(lián)系，尋找本課題相關(guān)功能基因。積極學(xué)習(xí)，多方面查閱網(wǎng)絡(luò)資源，充分利用NCBI（美國國立生物技術(shù)信息中心）。了解新軟件，通過Primer premier 5.0等，對(duì)初步確定的基因序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。走進(jìn)實(shí)驗(yàn)室，對(duì)收集的材料進(jìn)行分子水平鑒定，提取RNA、進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增、目的條帶回收測序等。在此過程中，我們遇到的主要問題是PCR擴(kuò)增無法擴(kuò)增出目的條帶，在我們查閱了大量文獻(xiàn)并與指導(dǎo)老師進(jìn)行交流與溝通后，我們決定采取調(diào)整Tm值（退火溫度）、增加循環(huán)次數(shù)以及潮式PCR技術(shù)等方法，最終，我們擴(kuò)增出目的條帶，并對(duì)目的條帶進(jìn)行測序驗(yàn)證。接下來，我們將進(jìn)一步驗(yàn)證候選基因的功能，然后從對(duì)

18、嫁接西瓜含糖量果型的研究轉(zhuǎn)移到抗逆性的研究，在生理水平上測得不同品系的嫁接西瓜在抗逆性等方面上的差異。二、項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)與特色目前多數(shù)研究集中在單一砧木生理分析階段，缺少對(duì)其遺傳及分子機(jī)理的深入系統(tǒng)的研究。本實(shí)驗(yàn)通過在分子水平探究不同砧木對(duì)接穗含糖量及其果型影響的原因，可為西瓜生產(chǎn)選擇合適的砧木及砧木選育提供一定理論支持，具有重要的生產(chǎn)實(shí)用價(jià)值。三、項(xiàng)目成果： 項(xiàng)目申請(qǐng)書中的預(yù)期成果及成果提交形式：公開發(fā)表論文（ 0 ）篇、專利（ 0 ）項(xiàng)、調(diào)查報(bào)告（ 0 ）份軟件、著作 （ 0 ）份、實(shí)物（ 1 ）件、競賽獲獎(jiǎng)（ 0 ）次其它 （2 ）項(xiàng)目結(jié)題時(shí)取得的成果：公開發(fā)表論文（ 0 ）篇、專利（ 0

19、）項(xiàng)、調(diào)查報(bào)告（ 0 ）份軟件、著作 （ 0 ）份、實(shí)物（ 1 ）件、競賽獲獎(jiǎng)（ 0 ）次其它 （ 2）項(xiàng)目主要研究成果情況序號(hào)成果名稱（獲獎(jiǎng)名稱及等級(jí)）成果形式作者（獲獎(jiǎng)?wù)撸┏霭嫔?、發(fā)表刊物或頒獎(jiǎng)單位時(shí)間（刊期）1嫁接西瓜的有參轉(zhuǎn)錄組建庫測序自動(dòng)化分析結(jié)題報(bào)告其它2嫁接西瓜轉(zhuǎn)錄本的基因表達(dá)差異及其驗(yàn)證其它3嫁接西瓜及其芽實(shí)物456四、研究體會(huì)和心得（500字以內(nèi)）： 不斷實(shí)踐方能探索出真理，不斷摸索方能找尋優(yōu)秀方法。在探索與實(shí)踐中前進(jìn)，在挫折與失敗中堅(jiān)持，堅(jiān)定目標(biāo)，多多實(shí)踐。任何成功都不是一蹴而就的，于實(shí)驗(yàn)而言，更是如此。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中遇到過大大小小的困難，在當(dāng)時(shí)看來或許真的有些殘酷，但是

20、只有克服以后才會(huì)發(fā)現(xiàn)原來這些都是為了讓我們距離成功更進(jìn)一步。所以，困難并不可怕，克服困難就會(huì)走向成功。本次實(shí)驗(yàn)對(duì)我們小組的每一位成員也是一次莫大的磨練，使得我們小組的每一位成員不僅是有實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ奶岣?，而且在團(tuán)隊(duì)分工協(xié)作等方面也有了新的進(jìn)步。五、經(jīng)費(fèi)使用明細(xì)情況項(xiàng)目獲批總經(jīng)費(fèi)： 10000 元項(xiàng)目實(shí)際投入經(jīng)費(fèi)： 10200 元實(shí)際使用資金：10200 元結(jié)余資金： 0 元項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)開支情況名目用途金額備注論文版面費(fèi)專利申請(qǐng)費(fèi)調(diào)研、差旅費(fèi)打印、復(fù)印費(fèi)資料費(fèi)試劑等耗材費(fèi)Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP等1000元器件、軟硬件測試、小型硬件購置費(fèi)等；其它西瓜轉(zhuǎn)錄組的構(gòu)建、接穗和砧木種子的購置、快遞費(fèi)9200

21、項(xiàng)目組承諾：我保證上述填報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性，經(jīng)費(fèi)使用規(guī)范合理，項(xiàng)目成果無弄虛作假情況。主持人簽名： 項(xiàng)目組其他成員簽名： 年 月 日指導(dǎo)教師意見（包括項(xiàng)目的組織實(shí)施、研究成果、經(jīng)費(fèi)使用等情況）：本實(shí)驗(yàn)以五種嫁接品系的生長狀態(tài)一致且健康的幼果和嫩芽為材料，進(jìn)行cDNA文庫的構(gòu)建和轉(zhuǎn)錄本測序, 小組找出與含糖量與果型有關(guān)的候選基因并完成了其擴(kuò)增和測序，為西瓜生產(chǎn)選擇合適的砧木及砧木選育提供一定理論支持。實(shí)驗(yàn)具有一定的創(chuàng)新性，小組成員分工協(xié)作，較好地完成了實(shí)驗(yàn)任務(wù)，基本達(dá)到了預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果。經(jīng)費(fèi)使用合理。 指導(dǎo)教師簽名： 年 月 日學(xué)校評(píng)審意見（項(xiàng)目的完成質(zhì)量、學(xué)術(shù)水平以及推廣應(yīng)用價(jià)值） 年 月 日綜合評(píng)

22、定課題完成情況按計(jì)劃完成，取得預(yù)期成果成果的創(chuàng)新性很好基本完成，但是與預(yù)期目標(biāo)尚有差距較好一般未達(dá)到預(yù)期目標(biāo)較差評(píng)價(jià)等級(jí)優(yōu)秀 良好 合格 不合格 建議終止項(xiàng)目附件1：對(duì)相關(guān)基因差異表達(dá)的分析Gene品系countnormalizeClf_countClf_normalizeFoldChangeLog2FoldChangeUp/Down含糖量Cla006123（瓜）白籽10011532.4803719192121187.8821180.448260281-1.157591424down黑籽12905701.4982709192121187.8821180.590545358-0.75988022

23、2down瓠瓜13097689.2759203192121187.8821180.580256163-0.785238154down葫蘆17132979.2706937192121187.8821180.824383732-0.27861206downCla005565（瓜）白籽92949.4130721768142.10637741.1735294080.230853996up黑籽123066.8611292768142.10637741.5879097990.667128963up瓠瓜85244.8395116568142.10637741.0649102210.090731806up葫蘆

24、87249.8438036968142.10637741.1837590120.243375408upCla017594（瓜）白籽82243.721792681350.267965980.869774453-0.201286761down黑籽37620.4388492781350.267965980.406597897-1.29832534down瓠瓜83443.8921980281350.267965980.873164394-0.195674795down葫蘆62435.6680430181350.267965980.709558112-0.495007252downCla020400（芽

25、）白籽1641559160.1919521435410821.453940.846484401-0.240444613down黑籽1118406677.52640421435410821.453940.6170637-0.696508667down瓠瓜46570024893.8390321435410821.453942.3004153761.201894386up葫蘆641524134.40156321435410821.453940.382056015-1.388143922downCla003995（芽）白籽14789825.257097252081272.6014480.6484804

26、01-0.624865123down黑籽204691222.123462252081272.6014480.960334804-0.058390631down瓠瓜399692136.529637252081272.6014481.6788678340.747488661up葫蘆11205722.1282192252081272.6014480.567442557-0.817453742down果型Cla005676（瓜）白籽1286.80825967495158.800535850.115785674-3.110471333down黑籽894.8379191195158.800535850.0

27、82276786-3.60337075down瓠瓜79741.9449422495158.800535850.713342857-0.487332443down葫蘆158390.4847950195158.800535851.5388430340.621846081upCla005676（芽）白籽82846.20412985117359.217768120.780240987-0.358008308down黑籽94556.42223222117359.217768120.952792279-0.069766373down瓠瓜71538.22008784117359.217768120.6454

28、15879-0.631699023down葫蘆66142.59944247117359.217768120.719369267-0.475195568down附注：a、含糖量l 在收集的幼果中，Cla006123基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系、瓠瓜嫁接品系以及葫蘆嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量下調(diào)，其中在白籽嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。l 在收集的幼果中，Cla005565基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系、瓠瓜嫁接品系以及葫蘆嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量升高，其中在黑籽嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。l 在收集的幼果中，Cla017594基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系、瓠瓜嫁

29、接品系以及葫蘆嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量下調(diào)，其中在黑籽嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。l 在收集的嫩芽中，Cla020400基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系以及葫蘆嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量下調(diào)，在瓠瓜嫁接品系中表達(dá)上調(diào)，其中在葫蘆嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。l 在收集的嫩芽中，Cla003995基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系以及葫蘆嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量下調(diào)，在瓠瓜嫁接品系中表達(dá)上調(diào)，其中在葫蘆嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。b、果型l 在收集的幼果中，Cla005676基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系以及瓠瓜嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量下調(diào)，在葫蘆嫁

30、接品系中表達(dá)上調(diào)，其中在黑籽嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。l 在收集的嫩芽中，Cla005676基因在白籽嫁接品系、黑籽嫁接品系、瓠瓜嫁接品系以及葫蘆嫁接品系中與自嫁接西瓜相比表達(dá)量下調(diào)，其中在瓠瓜嫁接品系中下調(diào)最明顯，差異最顯著。l Cla017594基因的測序分析核苷酸序列長為1540bp，ORF區(qū)為178-1477，編碼423個(gè)氨基酸，與NCBI上的相應(yīng)的氨基酸序列相似度達(dá)到了93%。測得Cla017594基因的核苷酸序列為1 AATTGAGCTC GGTACCGGGG ACCTCTAGAG ATTCACTCTT CTCCACTTAT TCCTTTAATC61 TGTCACCTCC

31、CAATTTCACA GCGTCAATTC TTGGTGGGTT ACGCTCATTT TCGGGTGGAG121 TAATTGAACT GCTTGAGATT GACACAGAAC TAAAGGATCA GGCTGAGTAT TGCAATCATG181 GACAGGCTTA GCACTTCAGC ACGTCTCATG ATAGTTTCAG ATCTTGATCA TACCATGGTC241 GATCATCATG ATTCTGAGAA TTTTTCTCTG TTGAGGTTTA ATGCATTATG GGAAGCCAAT301 TACCGTCATG ATTCTCTGCT TGTTTTCTCG AC

32、CGGCAGAT CCCCTACACT GTACAAAGAG361 CTAAGGAAAG AGAAACCTAT GTTAACTCCT GACATTACCA TAATGTCTGT AGGAACCGAG421 ATAACATATG GTCACTTGAT GGTGCCAGAT GAGGGGGGGG TTGAAGTTTT AAATCAGAAA481 TGGGATAAGA AAATAGTCAT TGAGGAAGCG AGCAAGTTTT CCGAACTTAC TCCACAGGCA541 GAGTCGGAAC AACGGCCACA CAAGGTTAGC TTCTATACTG AGAAAGACAA GGCT

33、CAGGCT601 GTCACCAAGG CCCTTTCTGA GTCGCTGGAG AAACGCGGGT TGGATGTAAA AATAATCTAC661 AGTGGTGGGA TAGATCTGGA TATATTACCA CAAGGTGCTG GAAAAGGACA AGCTCTTGCT721 TACTTGCACA AAAAATTCAA CAGCATTGGG AAACTACCAA CTAGTACACT TGTTTGTGGT781 GACTCACGAA ATGATGCCGA GCTATTTAGC ATTCCAGATG TATTCGGTGT CATGGTTAGC841 AATGCTCAAG AGG

34、AATTGCT GCAATGGCAT GCTGAAAATG CAAAAGATAA CAGTAAGATT901 ATTCATGCTT CAGAGAGGTG TGCAGCTGGC ATTATACAAG CTATTGGCCA TTTTAAACTT961 GGTCCCAATA TTTCTCTTAG AGATGTCAAG GACTTCTTGG ACTCTAATCT GGAAACTAAA1021 AGCATTGGTC ATGAAATTGT GAAGTTTTAC TTATTTTACG AGAAATGGAG GCGTGCAGAA1081 GTCGAGGAAT CTTGCTTGGA TCACTTGAAA AATTCCTTTA ATCCATCTGG TGTTTTTGTT1141 CATCCGTCTG GTCTTGAGCA ATCTCTTTCA GACAGCTTGA GTTCAATACA AAAGCATTAT1201 GGAGATTCTC ACGGAAAACA GTACCGAGTT TGGGTTGATC GAGTATTGCC TACGAAGATT1261 GGTTCGGATG CGTGGCTCGT GAAGTTTGAC AAGTGGGAAT TATCTGGTGA GGAGCGACTA1321 TGCTGCAGGA CAACTGCCAT ATTAAGTTCA AAGGATTCAA