β-胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定

1、b 胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定b 胡蘿卜素和番茄紅素的提取分離與測定一、實驗目的1. 掌握從胡蘿卜或番茄屮提取分離b 胡蘿卜素和番茄紅素的原理與 方法；2鞏固用柱色譜和薄層色譜分離、檢測有機化合物的實驗技術；3.學會用分光光度法測定b 胡蘿卜素和番茄紅素的方法。二、胡蘿卜素和番茄紅素的主要理化性質三、實驗原理b 胡蘿卜素和番茄紅素是脂溶性的不飽和碳氫化合物，難溶于甲醇、 乙醇，可溶于乙醯、石油瞇、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯 等有機溶劑?？衫檬歪j、乙酸乙酯等弱極性溶劑將它們從植物材料中 浸提出來。然后，根據(jù)它們對吸附劑吸附能力的差異，用柱色譜進行分離， 用薄層色譜檢測分離

2、效果。四、初步設計實驗方案1類胡蘿卜素的提取%1 稱取20g新鮮番茄果肉，搗碎，置于50 ml三角瓶中，再加入5g 食鹽，用玻棒攪拌，使食鹽與番茄果肉充分混合均勻，放置一定時間，便 會看到果肉組織屮水分大量滲出。脫水時間持續(xù)15-30 mine隨后將脫除 下來的水分濾入150 ml分液漏斗中。%1 向經(jīng)過食鹽脫水的番茄果肉加入10 ml m酮，用玻棒攪拌，并靜置510 mine然后將丙酮提取液也濾入分液漏斗中。%1 向經(jīng)過丙酮處理的番茄果肉加入10 ml乙酸乙酯浸提5 mine浸提 過程中應不時振搖三角瓶，使番茄果肉與溶劑充分接觸；若室溫過低，可 將三角瓶置于溫水浴中溫熱，但應注意不能使浸提溶

3、劑明顯揮發(fā)損失。5 min后將提取液也濾入分液漏斗屮，并用玻棒輕壓殘渣盡量使溶劑流盡。 再用乙酸乙酯重復提取2次，每次10 ml,合并提取液至分液漏斗中。 充分振搖分液漏斗中的混合溶液，靜置，完全分層后，分去水層，有機層 （酯層）再用蒸憾水洗2次，每次810ml,棄去水層。酯層自分液漏斗 上口倒入干燥的小三角瓶中，加入適量無水硫酸鎂（或無水硫酸鈉）干燥 15 min （注意：應避光）。干燥后的酯層濾入50 ml干燥的蒸憾瓶中，水浴加熱，小心蒸憾（最 好減壓蒸鐳）濃縮至1-2 mlo所得濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。2. 類胡蘿卜素的柱色譜分離選一支1.5x 20cm色譜柱，用適量層析用氧化鋁（10

4、0200目）作吸 附劑干法裝柱，高度約1020cm,要求緊密勻實。分離方式為梯度洗脫， 第一步用石油醸（60-90°c ）洗脫。先沿色譜柱管壁滴加58ml石油醍至 柱體（各方向要均勻），待溶劑液面降至氧化鋁柱面頂端時，用滴管迅速 地小心滴加5-10滴樣品至柱子中,待樣品液曲即將在柱曲上消失時，沿管 壁小心滴加石油瞇35滴，沖洗粘在管壁上的有色物質。如此重復操作34 次，直至管壁沖冼干凈為止。隨后，在管內加入盡可能多的石油讎進行洗 脫，第一步收集到的洗脫液為黃色。待洗脫液清亮無色后用石油醯：丙酮=3： 2 （v/v）的混合液洗脫，第二步收集到的洗脫液為紅色。最后用丙酮 將前兩步不能洗脫

5、的剩余組分洗脫下來。分別收集三步洗脫液，用作薄層 色譜檢測。13. 類胡蘿卜素的薄層色譜檢測對前面得到的類胡蘿卜素樣品以及柱色譜分離得到的樣品分別進行 薄層分析，以檢查柱色譜分離效果。薄層層析板預先用硅膠g制備并活化 (110°c, 1小時)，展開劑為石油醯(6090°c)：丙酮=3： 2 (v/v)o薄層 分離后觀察斑點位置，計算各斑點的rf值，并明確各斑點歸屬。在本實驗條件下，薄層檢測結果為：13 胡蘿卜素，黃色，rf值為0.89； 番茄紅素，深紅色，rf值為0.84o五、修改完善后的實驗類胡蘿卜的提取做出修改后，方法如下：%1 稱取0.3g番茄(或胡蘿卜)干粉，置于干燥的研缽中，加入2ml 石油醍研磨，以利提取完全。未研磨細之前，若石油醍揮發(fā)，應補加2ml 繼續(xù)研磨。%1 將研缽中的番茄細粉轉移到干燥的50ml燒瓶中，用5ml石油醸洗 滌研缽和研缽錘，洗滌液一并加入燒瓶中，回流lomino冷卻至室溫，傾 出提取液至另一干燥的50ml的燒瓶中。水浴加熱，小心蒸憾，濃縮提 取液至lmlo所得的濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。類胡蘿卜素的柱色譜分 離和薄層色譜檢驗仍按上述設