Bruker-儀器維護(hù)和參數(shù)校正

1、Bruker核磁儀參數(shù)校正實(shí)驗(yàn)設(shè)置儀器維護(hù) 第一部分：第一部分： 參數(shù)校正參數(shù)校正l通常一個(gè)實(shí)驗(yàn)中最后真正的采樣只是采集一種原子核的信號(hào)，因此BRUKER 儀器中第一通道應(yīng)設(shè)置為需要采樣的原子核頻率，該通道一般也稱為采樣通道或觀察道(F1通道)，其余的通道有時(shí)也稱為去偶通道（F2通道）l90脈沖的測(cè)定就是在一定的功率下，測(cè)試90脈寬對(duì)應(yīng)的時(shí)間；或是在一定的脈寬長(zhǎng)度下，測(cè)試90脈沖對(duì)應(yīng)的功率。功率越大，對(duì)應(yīng)的90脈沖時(shí)間越短900脈沖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)一：H F1（觀察通道）通道的（觀察通道）通道的900脈沖脈沖(P1值值)測(cè)定測(cè)定l 標(biāo)樣0.1%Ethylbenzol-CDCl3 脈沖(zg3

2、0)，如下圖所示具體操作如下：zg30 Pulse Sequence 第一步：第一步： 將0.1%Ethylbenzol-CDCl3標(biāo)準(zhǔn)品放入磁體中，輸入edc命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框，先采一個(gè)H譜第二步：鎖場(chǎng)，勻場(chǎng)第二步：鎖場(chǎng)，勻場(chǎng)l勻場(chǎng)完成后，輸入wobb命令進(jìn)行調(diào)諧第三步：調(diào)諧第三步：調(diào)諧l輸入getprosol第四步：（第四步：（1）在）在Acqupars中設(shè)置參數(shù)（中設(shè)置參數(shù)（2）采樣）采樣第五步：第五步： 將2.75ppm左右的四重峰放大，紅線放在四重峰的中間，然后按下列步驟進(jìn)行即可將o1p設(shè)為2.75ppmlns設(shè)為1lds設(shè)為0 ld1設(shè)為3l 第六步：設(shè)置參數(shù)第六步：設(shè)置參數(shù)第七

3、步：第七步：運(yùn)行Paropt命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框， 按提示填好后，采樣即可 Paropt 是一AU程序它可改變某一參數(shù)(P1,D1,O1等)并將一系列處理的譜圖列出。譜圖儲(chǔ)存在處理數(shù)控的文件中。l此處給出的P1值為900時(shí)的值，由于Bruker儀器中H的采樣脈沖為zg30,所以寫(xiě)入edprosol表中的數(shù)值應(yīng)該為15.33（46/3）。如下圖所示：第八步：實(shí)驗(yàn)結(jié)果第八步：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表中1處必須為H，將上面測(cè)得的H的F1值寫(xiě)在2處，點(diǎn)save第九步：第九步：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫(xiě)入探頭將實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫(xiě)入探頭l標(biāo)樣40%ASTM-C6D6 具體操作如下： 1. 先采一個(gè)H譜讀o2p的值，脈沖序列(zg30)如右圖

4、： 2.一個(gè)C譜讀o1p的值，脈沖序列為(zgpg30) 如下圖：實(shí)驗(yàn)二：實(shí)驗(yàn)二：13C F1（觀察通道）通道的（觀察通道）通道的900脈沖脈沖(P1值值)測(cè)定測(cè)定zg30 Pulse Sequence zgpg30 Pulse Sequence zgpg Pulse Sequence F1F23.以脈沖序列zgpg采H譜，測(cè)定P1值，脈沖序列如下圖：第一步：第一步： 將40%ASTM-C6D6標(biāo)樣放入磁體中，先采一個(gè)氫譜讀o2p的值，具體操作如下：edc lock C6D6shimwobbgetprosolg讀o2p的值第二步：第二步：采一個(gè)C譜讀o1p的值，具體操作如下： edc 后出現(xiàn)如

5、下對(duì)話框lockshimwobbgetprosolg第三步：第三步：在AcquPars中完成以下操作o1p=66.81o2p=3.46ds=0ns=1d1=40運(yùn)行paropt（對(duì)某一實(shí)驗(yàn)參數(shù)做漸進(jìn)式的調(diào)整）命令p1,ok1,ok1,ok16,okgl 由于我們?cè)O(shè)置的P1起始值為1，步長(zhǎng)為1，所以我們可以知道在1800脈沖時(shí)的時(shí)間為16.34，所以900脈沖的為8.17 ,將8.25填入edprosol表中，如下圖所示：第四步：實(shí)驗(yàn)結(jié)果第四步：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表中1處必須為13C，將上面測(cè)得的13C的F1值寫(xiě)在2處，點(diǎn)save第五步：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫(xiě)入探頭第五步：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果寫(xiě)入探頭去偶通道去偶通道900脈

6、沖的測(cè)定脈沖的測(cè)定 在去偶通道中激發(fā)的原子核磁化矢量隨脈沖作用時(shí)間的變化是無(wú)法直接觀察到的，只能通過(guò)偶合作用反應(yīng)到采樣通道中的原子核磁化矢量的變化上。例如確定1H 在去偶通道的90脈寬，需要通過(guò)觀察采樣通道中與之有偶合的13C 磁化矢量信號(hào)隨去偶通道1H的脈沖作用時(shí)間的變化。 實(shí)驗(yàn)三：實(shí)驗(yàn)三：H F2（去偶通道）通道的（去偶通道）通道的900脈沖脈沖(P3值值)測(cè)定測(cè)定DEPT90 Pulse Sequencel當(dāng)P3值準(zhǔn)確時(shí)譜圖中只顯示CH的C信號(hào)，CH3和CH2的C信號(hào)將消失lP1 是采樣通道原子核的90脈沖，P3 是所要確定的去偶通道原子核的90脈沖，d2 是一段時(shí)間延遲，長(zhǎng)度為1/2J

7、，J 是兩個(gè)通道的原子核之間的偶合常數(shù)值，在90脈沖測(cè)定時(shí)，J 值必須是已知的。l標(biāo)樣0.1%Ethylbenzol-CDCl3，脈沖(dept90）如下圖所示：l將0.1%Ethylbenzol-CDCl3標(biāo)準(zhǔn)品放入磁體中，輸入edc命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框l在AcquPars中完成以下操作 o1p設(shè)為100 o2p設(shè)為45 d1設(shè)為2l輸入p3出現(xiàn)對(duì)話框，改變圖中p3的值，可得到不同的C譜lP3值太小出現(xiàn)如下C譜P3值太大出現(xiàn)如下C譜P3值合適時(shí)會(huì)出現(xiàn)如下C譜l將合適的p3值輸入到edprosol表中H F2通道中，如下圖所示：表中1處必須為H，將上面測(cè)得的H的F2值寫(xiě)在2處，點(diǎn)save13C

8、 F2通道（去偶通道）的通道（去偶通道）的900脈沖（脈沖（P3值）測(cè)定值）測(cè)定l標(biāo)樣1%CDCl3-Acetone 具體操作如下： 1.先采一個(gè)H譜讀o1p和cnst2的值，脈沖序列（zg30）如右圖： 2.一個(gè)C譜讀o2p的值，脈沖序列為（zgpg30）如下圖： zgpg30 Pulse Sequence zg30 Pulse Sequence 3.以脈沖序列decp90采H譜，測(cè)定P3值，脈沖序列如下圖： DECP90 Pulse Sequence 上圖所示的脈沖序列是通過(guò)觀察采樣通道的13C信號(hào)強(qiáng)度的變化測(cè)定去偶通道1H的900脈寬，這里我們想確定去偶通道13C的900脈寬，只需輸入e

9、dasp命令將兩個(gè)通道設(shè)置的原子核互換即可。l將1%CDCl3-Acetone標(biāo)樣放入磁體中，先采一個(gè)H譜讀o1p和cnst2的值，具體操作如下： edc 后出現(xiàn)如下對(duì)話框lnsldslrglgetprosollgl再采一個(gè)C譜讀o2p的值，具體操作如下：llocklwobblshimminglns=8lds=4lrg=128lgetprosollgl 以脈沖序列decp90采H譜，測(cè)定P3值l運(yùn)行edasp命令，出現(xiàn)如下對(duì)話框，將F2通道換為13C，然后點(diǎn)擊default，savel注意：這里的F1和F2通道和脈沖序列里的不同。此處的F1和F2通道對(duì)應(yīng)儀器中的F1和F2通道，而脈沖序列中所有

10、的觀察通道叫做F1通道，另一個(gè)通道叫做F2通道lgetprosollns=1lo1p=8lo2p=78lds=0ld1=5lCNST2=215lp3=1l將上圖調(diào)整相位，具體方法如下：l1.將調(diào)整相位時(shí)的紅線放在C的衛(wèi)星峰，使C的衛(wèi)星峰一正一負(fù)2.在Procpars中設(shè)置參數(shù) Baseline correctionlefp,出現(xiàn)如下譜圖l將上圖中紅線區(qū)域放大并運(yùn)行如下命令lDpllParopt(對(duì)某一實(shí)驗(yàn)參數(shù)做漸進(jìn)式的調(diào)整)lp3,okl1,okl1,okl16,ok 當(dāng)P3 脈沖為90時(shí)，采樣通道中全部是不可檢測(cè)的多量子相干信號(hào)，而大于或小于90時(shí)，都含有可檢測(cè)到的單量子相干信號(hào)，只是峰的相

11、位正好相反。因此通過(guò)采樣通道峰的變化可以間接確定去偶通道的90脈寬。l由于我們?cè)O(shè)置的起始值為1，步長(zhǎng)為1，所以我們可以知道在1800脈沖時(shí)的時(shí)間為16.5，所以900脈沖即P3的值為8.25。將8.25填入edprosol表中，如下圖所示：表中1處必須為13C，將上面測(cè)得的13C的F2值寫(xiě)在2處，點(diǎn)saveEdlock表中Field的校準(zhǔn)原理 超導(dǎo)磁體的磁場(chǎng)會(huì)隨時(shí)間而逐漸減小.為了保持特征頻率(如: 400.13MHz)下氫正共振所需磁場(chǎng)不變,而需改變室溫勻場(chǎng)線圈中的電流,以補(bǔ)償磁場(chǎng)的變化.室溫線圈中的補(bǔ)償電流由Filed值表示. Filed值為正值時(shí)，室溫線圈補(bǔ)償磁場(chǎng)的方向與超導(dǎo)線圈的磁場(chǎng)方

12、向相反 Filed值為負(fù)值時(shí)，室溫線圈補(bǔ)償磁場(chǎng)的方向與超導(dǎo)線圈的磁場(chǎng)方向相同校準(zhǔn)步驟 Bruker儀器的基礎(chǔ)場(chǎng)是以CDCL3為溶劑的標(biāo)樣勻出的，所以校準(zhǔn)Field值時(shí)需用CDCL3 為溶劑的標(biāo)樣 具體操作如下l將以CDCL3 為溶劑的標(biāo)樣放入磁體中l(wèi)選取CDCL3 , Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值l按lock鍵,取消鎖場(chǎng)l調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置l鍵入Edlock命令點(diǎn)擊下圖中的1圖標(biāo),系統(tǒng)讀入此時(shí)的Field的值,并更改表頂部的Field值l選擇SAVE鍵保存甲醇鎖偏場(chǎng)問(wèn)題的處理l將以CDCL3 為溶劑的標(biāo)樣放入磁體中l(wèi)選取CDCL3 , Lock命令鎖場(chǎng)(

13、目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值l按lock鍵,取消鎖場(chǎng)l調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置l鍵入Edlock命令點(diǎn)擊下圖中的1圖標(biāo),系統(tǒng)讀入此時(shí)的Field的值,并更改表頂部的Field值l選擇SAVE鍵保存l將以MeOD 為溶劑的樣品放入磁體中l(wèi)選取MeOD, Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值l按lock鍵,取消鎖場(chǎng)l調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置l按lock鍵, 鎖場(chǎng)l輸入loopadj命令(需在lock鎖定的狀態(tài)下) ，將反饋lockfilt, lockgain, locktime的數(shù)值并數(shù)值填入到edlock表中相應(yīng)的位置l將CDCL3和MeOD的field

14、差值填入edlock表中field-correction列中l(wèi)savel在ICON-NMR中選擇noauto 點(diǎn)保存即可。水峰壓制(Water Suppression)l 核磁共振實(shí)驗(yàn)樣品有許多是溶在水中,而水的共振信號(hào)又是實(shí)際樣品的數(shù)千甚至數(shù)萬(wàn)倍.ADC的資源基本上被用來(lái)描述水峰而很少一部分用來(lái)描述實(shí)際的樣品以致樣品的信號(hào)被淹沒(méi)在噪音.l存在的問(wèn)題: - 動(dòng)態(tài)范圍; - 實(shí)際樣品的信號(hào)低S/N; -實(shí)際樣品的信號(hào)淹沒(méi)在基線噪音中; - 接近水峰的信號(hào)”騎”在水峰上.l解決方法 在采樣前壓制水峰. 一經(jīng)常用到的方法是預(yù)飽和x 64預(yù)飽和(Presaturation) 使用一長(zhǎng)約定1-2s而低的

15、脈沖選擇的使水峰達(dá)飽和狀態(tài),然后用一硬900脈沖激發(fā)樣品.其結(jié)果是使接受器的增益參數(shù)增加而提高動(dòng)態(tài)范圍及S/N. 運(yùn)用的脈沖序列為zgpr,如下圖所示： zgpr Pulse Sequence 壓水峰實(shí)驗(yàn)具體操作如下：1.脈沖序列 zgpr2. 預(yù)飽和時(shí)間為 1.5s3. O1移到水峰位置4. 逐漸的增加脈沖強(qiáng)度5. 優(yōu)化勻場(chǎng)條件,并準(zhǔn)確調(diào)整O1位置5.14.64.13.6ppmzgrg=1zgprrg=64Water suppression can be achieved for instance by applying a long, low power pulse to the wate

16、r resonance, followed by a hard 90 degree pulse to excite the spins of interest. This so-called presaturation pulse typically lasts 1-2s and it has the effect that it saturates the water resonance, which means that by the time we apply an RF pulse to observe the spectrum, there is no net water magne

17、tization left. (Remember that a long pulse has a narrow frequency response). As a result the receiver gain can be properly set for the low intensity resonances, resulting in a better signal to noise and a better dynamic range.一般水峰壓制步驟如下: lO1p定為水峰的位置l在pulprog中將脈沖程序改為zgprlGetprosolld1=3lPL9=5060dblg 討

18、論： 1.PL9 可改變，如果溶劑峰很大可放大，溶劑峰小或不想完全壓為0， 可放小。 2.PL9不宜太大，太大會(huì)導(dǎo)致壓制的范圍很寬。水峰或溶劑峰很大時(shí)可用下列方法壓制l在 pulprog 中選取noesygppr1d脈沖程序lGetprosollD8=0.1lGPZ1=50%，GPZ2=-10%l將o1p設(shè)為要壓制的水峰或溶劑峰的位移值多峰壓制1.先采一個(gè)H譜2.rpar LC*出現(xiàn)如下界面lL30=n(n為要壓制的峰的個(gè)數(shù)，順序?yàn)橛纱蟮叫?lF1p=15,f2p=-1 （F1p,f2p為要壓制的譜圖的范圍）lCNST29=1lgetprosollnsl運(yùn)行xaua命令壓制前后對(duì)比比較單峰壓制

19、和雙峰壓制 如何在Solvent表中增加新的溶劑 以DCl(30%DCl+D2O)為例l將已知的DCl的位移值寫(xiě)入Edlock表中Distance列，其它列值可參照CDCl3的值填寫(xiě)Edlock 表中DCl的lockfilt, lockgain, locktime的編輯l將以DCl 為溶劑的樣品放入磁體中l(wèi)選取DCl, Lock命令鎖場(chǎng)(目的將lockshift)設(shè)為對(duì)應(yīng)值l按lock鍵,取消鎖場(chǎng)l調(diào)整field使信號(hào)處于中間位置l按lock鍵, 鎖場(chǎng)l輸入loopadj命令,將反饋的lockfilt, lockgain, locktime數(shù)值填入到edlock表中相應(yīng)的位置lsave 重新起

20、動(dòng)Topspin軟件第二部分第二部分 : 實(shí)驗(yàn)設(shè)置實(shí)驗(yàn)設(shè)置 一.二維實(shí)驗(yàn)2D NMR 譜圖常以輪廓圖表示而不用三維的方式.相同情況同樣使用在地圖上1020304050602040600.511.52102030405060102030405060l絕對(duì)值與相敏(phase sensitive)的COSY 絕對(duì)值COSY的峰都為正峰，相敏COSY的峰有正負(fù)（可調(diào)相位）。相敏COSY中的峰比絕對(duì)值COSY的峰更尖銳（可減小譜峰的重疊程度，但需要增加累加的數(shù)據(jù)點(diǎn)）。l多量子濾波(MQF)COSY 雙量子濾波DQFCOSY：濾掉（減小）單量子峰（對(duì)角線峰和沒(méi)有 偶合的溶劑峰）。 叁量子濾波TQFCOS

21、Y：濾掉（減?。﹩瘟孔雍碗p量子峰 1H1H COSY的種類 二者是可以互相結(jié)合的，如：二者是可以互相結(jié)合的，如：DQFCOSY可以是絕對(duì)值可以是絕對(duì)值的也可以是相敏的的也可以是相敏的COSYRFp/2FIDp/2t1NONHSOOR3b2b1b1a5b4a4bppm12345678910ppm123456789105b2b4a4b1b1a3b5b2b1b1a3b4a4b2D COSY experiment(magnitude mode)ppm12345678910ppm123456789105b2b4a4b1b1a3b5b2b1b1a3b4a4bNONHSOOR3b2b1b1a5b4a4b2D

22、 COSY experiment(magnitude mode) 與H-HCOSY900 相比，選用H-HCOSY450 減少平行躍遷間的磁化轉(zhuǎn)移強(qiáng)度，限制了多重峰內(nèi)的間接躍遷，對(duì)角線則因自身的自相關(guān)峰消失而被簡(jiǎn)化， H-HCOSY450 譜中的對(duì)角線峰沿對(duì)角線變窄，減小了對(duì)鄰近的交叉峰的干擾ppm12345678910ppm123456789105b2b4a4b1b1a3b5b2b1b1a3b4a4bNONHSOOR3b2b1b1a5b4a4b2D long-range COSY(magnitude mode)ppm12345678910ppm123456789105b2b4a4b1b1a3

23、b5b2b1b1a3b4a4bNONHSOOR3b2b1b1a5b4a4b2D COSY-DQF experiment(phase-sensitive)NONHSOOR3b2b1b1a5b4a4bppm12345678910ppm123456789105b2b4a4b1b1a3b5b2b1b1a3b4a4b2D COSY experiment(phase-sensitive) DQF-COSY與相敏COSY的圖形基本相同，但DQF-COSY有以下的優(yōu)點(diǎn)： 1.在二維譜中抑制了包括化合物所固有的強(qiáng)峰（如叔丁基，甲氧基等）和溶劑峰 2.在相敏COSY中，交叉峰為吸收性，對(duì)角線峰為色散型，對(duì)角線旁的

24、交叉峰易受干擾； DQF-COSY中，對(duì)角線峰與交叉峰峰均為吸收型，對(duì)角線的峰型有很大的改善1H1H TOCSYl兩個(gè)（組）氫原子只要是在一個(gè)自旋體系中，無(wú)論是有直接偶合或是間接偶合，它們之間都會(huì)有相關(guān)峰出現(xiàn)。l自旋體系是由多個(gè)原子核組成的體系，體系中任一原子核至少與本體系中另一原子核有J偶合，而體系中所有原子核都不與體系外的原子核有J偶合l一個(gè)自旋體系中，原子核之間有一個(gè)自旋體系中，原子核之間有J偶合存在，稱為直接偶偶合存在，稱為直接偶合，沒(méi)有合，沒(méi)有J偶合的，稱為間接偶合偶合的，稱為間接偶合lTOCSY是運(yùn)用自旋鎖定的方法，將同一自旋系統(tǒng)中的所有氫均關(guān)聯(lián)，可以逐步增加自旋鎖定時(shí)間，使自旋系

25、統(tǒng)中的各個(gè)1H依次相關(guān)，達(dá)到推定結(jié)構(gòu)的目的。有些象接力COSY譜。 ppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc10EXPNO 1PROCNO 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001102Time 4.14INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2345700

26、 secRG 16DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.01000000 secD11 0.03000000 secD16 0.00010000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.00110800 secFACTOR1 0IN0 0.00045765 secl1 0l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 usecP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 usecP7 58.00

27、usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmFnMODE undefined

28、F2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 3LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 echo-antiechoSF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 3LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HH混合時(shí)間50msppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc50EXPNO 1PROCNO 1

29、F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001101Time 16.43INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2343412 secRG 18DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.05000000 secD11 0.03000000 secD16 0.00010

30、000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.00110800 secFACTOR1 4IN0 0.00045765 secl1 24l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 usecP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 usecP7 58.00 usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00

31、%GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmF2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW QSINESSB 4LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 echo-antiechoSF 50

32、0.1300144 MHzWDW QSINESSB 4LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HHt1MLEV17AQPulse sequence for a TOCSY spectrum.HOCH1HCCCH2HH3HH4HHHOCH1HCCCH2HH3HH4HHHOCH1HCCCH2HH3HH4HH混合時(shí)間10msppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc10EXPNO 1PROCNO 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 200

33、01102Time 4.14INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2345700 secRG 16DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.01000000 secD11 0.03000000 secD16 0.00010000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.0

34、0110800 secFACTOR1 0IN0 0.00045765 secl1 0l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 usecP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 usecP7 58.00 usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1

35、 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmFnMODE undefinedF2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 3LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 echo-antiechoSF 500.1300144 MHzWDW SINESS

36、B 3LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HHppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME butcosyEXPNO 1PROCNO 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001102Time 8.04INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG cosygpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 1DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2345700

37、secRG 40.3DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 288.0 KD0 0.00000300 secD1 1.60000002 secD13 0.00000300 secD16 0.00010000 secIN0 0.00045765 sec= CHANNEL f1 =NUC1 1HP0 3.00 usecP1 6.00 usecPL1 -4.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2

38、0.00 %GPZ1 10.00 %GPZ2 10.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmFnMODE undefinedF2 - Processing parametersSI 2048SF 500.1300144 MHzWDW QSINESSB 0LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 QFSF 500.1300144 MHzWDW QSINES

39、SB 0LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HH混合時(shí)間20msppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc20EXPNO 1PROCNO 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001102Time 5.28INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzA

40、Q 0.2345700 secRG 16DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.02000000 secD11 0.03000000 secD16 0.00010000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.00110800 secFACTOR1 1IN0 0.00045765 secl1 6l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 usecP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 us

41、ecP7 58.00 usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmFnMOD

42、E undefinedF2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 2LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 echo-antiechoSF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 2LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HHppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc20EXPNO 1PROCN

43、O 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001102Time 5.28INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2345700 secRG 16DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.02000000 secD11 0.03000000 secD16 0.000

44、10000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.00110800 secFACTOR1 1IN0 0.00045765 secl1 6l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 usecP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 usecP7 58.00 usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00

45、 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmFnMODE undefinedF2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 2LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 ec

46、ho-antiechoSF 500.1300144 MHzWDW SINESSB 2LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HH混合時(shí)間50msppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc50EXPNO 1PROCNO 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001101Time 16.43INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8

47、DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2343412 secRG 18DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.05000000 secD11 0.03000000 secD16 0.00010000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.00110800 secFACTOR1 4IN0 0.00045765 secl1 24l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 u

48、secP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 usecP7 58.00 usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100GPX1 0.00 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.131

49、1 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmF2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW QSINESSB 4LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 echo-antiechoSF 500.1300144 MHzWDW QSINESSB 4LB 0.00 HzGB 0ppm1.01.52.02.53.03.5ppm1.01.52.02.53.03.5Current Data ParametersNAME buttoc50EXPNO

50、 1PROCNO 1F2 - Acquisition ParametersDate_ 20001101Time 16.43INSTRUM DRX500PROBHD 5 mm TBI 1H/PULPROG mlevetgpTD 1024SOLVENT CDCl3NS 8DS 16SWH 2185.315 HzFIDRES 2.134096 HzAQ 0.2343412 secRG 18DW 228.800 usecDE 6.00 usecTE 300.0 KD0 0.00000300 secD1 1.79999995 secD9 0.05000000 secD11 0.03000000 secD

51、16 0.00010000 secDELTA 0.00109943 secDELTA1 0.00110800 secFACTOR1 4IN0 0.00045765 secl1 24l3 128SCALEF 6= CHANNEL f1 =NUC1 1HP1 5.60 usecP2 11.20 usecP5 19.33 usecP6 29.00 usecP7 58.00 usecP17 2500.00 usecPL1 -4.00 dBPL10 10.00 dBSFO1 500.1310815 MHz= GRADIENT CHANNEL =GPNAM1 sine.100GPNAM2 sine.100

52、GPX1 0.00 %GPX2 0.00 %GPY1 0.00 %GPY2 0.00 %GPZ1 30.00 %GPZ2 30.00 %P16 1000.00 usecF1 - Acquisition parametersND0 1TD 256SFO1 500.1311 MHzFIDRES 8.535453 HzSW 4.369 ppmF2 - Processing parametersSI 1024SF 500.1300144 MHzWDW QSINESSB 4LB 0.00 HzGB 0PC 0.20F1 - Processing parametersSI 1024MC2 echo-ant

53、iechoSF 500.1300144 MHzWDW QSINESSB 4LB 0.00 HzGB 0HOCH1HCCCH2HH3HH4HHABX abyAaB, bX?y?COSYAaB, byXTOCSYABX abyAaB, bX?y?COSYAaB, byXTOCSYy?lCOSY和和TOCSY譜比較譜比較 （1）COSY交叉峰中主動(dòng)偶合的磁化矢量是反相組分，小J偶合信息可能被抵 消，而TOCSY實(shí)驗(yàn)的主動(dòng)偶合是同相組分，提高了小J偶合的檢測(cè)靈敏度。 （2）TOCSY譜的特征是提供COSY和同核接力相干轉(zhuǎn)移信息，接力轉(zhuǎn)移信息，接力轉(zhuǎn)移步數(shù)由自旋鎖定混合脈沖長(zhǎng)度控制，因此，可以不同的m參

54、數(shù)得到不同偶合相關(guān)信息，在2D譜線橫截面等高圖上可以觀察到一個(gè)完整的自旋體系，簡(jiǎn)化譜線歸屬。NOESY Noesy的交叉峰表示原子相互在空間上相鄰.其強(qiáng)度可用來(lái)估算原子間距并以此推斷分子的空間結(jié)構(gòu).HaHbHc012345543210fafblNOE實(shí)驗(yàn)對(duì)環(huán)境變化非常敏感，為了得到高質(zhì)量的譜圖，有如下建議l1）高質(zhì)量的樣品高質(zhì)量的樣品。樣品的分子量最好小于800或者大于2000。不然NOE信號(hào)會(huì)很小。在這種條件下，最好做ROE實(shí)驗(yàn)。l2）樣品穩(wěn)定性好樣品穩(wěn)定性好。l3）高質(zhì)量的核磁管高質(zhì)量的核磁管l4）最好預(yù)先超聲或者通氬氣除氧最好預(yù)先超聲或者通氬氣除氧l5）NOE實(shí)驗(yàn)過(guò)程中最好做到恒溫實(shí)驗(yàn)過(guò)

55、程中最好做到恒溫。NONHSOOR3b2b1b1a5b4a4bppm12345678910ppm123456789105b2b4a4b1b1a3b5b2b1b1a3b4a4b2D NOESY experiment(phase-sensitive)NONHSOOR3b2b1b1a5b4a4bppm123456789101112ppm1234567891011125b2b4a4b1b1a3b5b2b1a1b3b4a4bge-2D NOESY experiment(phase sensitive) NOESY和ROESY的區(qū)別： ROESY是旋轉(zhuǎn)坐標(biāo)系的NOESY譜，都提供通過(guò)空間作用的核自旋相關(guān)信

56、息，但兩者有區(qū)別：（1）NOESY和ROESY的交叉峰都取決于相關(guān)自旋間存在交叉馳豫，但NOE是縱向交叉馳豫（Longitudinal cross relaxation）nn 而ROE是橫向交叉馳豫（trasbverse cross relaxation）。（2）檢測(cè)靈敏度的差異。NOE和ROE交叉峰強(qiáng)度與對(duì)角線峰強(qiáng)比值與相關(guān)時(shí)間m有關(guān)。NOESY交叉峰在分子量大和小兩個(gè)極端，靈敏度很大。而ROESY交叉峰在不同分子量的分子中變化不大。（3）NOESY相關(guān)峰為反相組分，而ROESY相關(guān)峰為同相組分，可以檢測(cè)小的相互作用。ppm1211109876543210ppm121110987654321

57、0NHNHNSOORge-2D NOESY experiment(phase sensitive)ppm1211109876543210ppm1211109876543210NHNHNSOOR2D ROESY experiment(phase sensitive)異核相關(guān)譜可通過(guò)觀測(cè)碳異核相關(guān)譜可通過(guò)觀測(cè)碳(1H-13C Hetcor) 或觀測(cè)氫 (HMQC, HSQC). 觀測(cè)氫的實(shí)驗(yàn)也稱做反相實(shí)驗(yàn).FID1Hp/2p13Cp/2p/2DDt11H 13C HSQC 碳?xì)渲苯酉嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)碳?xì)渲苯酉嚓P(guān)實(shí)驗(yàn) 1H-13C HSQC 實(shí)驗(yàn)是異核二維譜，沒(méi)有對(duì)角線峰。每個(gè)相關(guān)峰表示相交的氫、碳峰所對(duì)應(yīng)的

58、氫、碳原子是直接（一鍵）相連的。 HSQC實(shí)驗(yàn)可以使氫譜和碳譜中的譜峰指認(rèn)信息相互利用、相互印證。 當(dāng)CH2上兩個(gè)氫的化學(xué)位移不等時(shí)，HSQC譜上，一個(gè)碳峰就會(huì)與兩個(gè)氫峰有相關(guān)峰。ppm876543210ppm1801601401201008060402002D 1H-13C HSQC using presaturation(phase sensitive)Pl9=55-60dbD1=1.5-2sge-2D 1H-13C HSQC with a z-filter (phase sensitive)ppm876543210ppm140120100806040200ppm876543210ppm1

59、40120100806040200ge-2D 1H-13C HSQC using echo-antiecho(phase sensitive)ppm876543210ppm140120100806040200ge-2D 1H-13C HSQC with improved sensitivity(phase sensitive)ppm876543210ppm140120100806040200ge-2D 1H-13C edited-HSQC with a z-filter(phase sensitive)ppm876543210ppm140120100806040200ge-2D 1H-13C

60、multiplicity-edited HSQC using echo-antiecho(phase sensitive)1H-13C HMBC氫碳遠(yuǎn)程相關(guān)實(shí)驗(yàn)氫碳遠(yuǎn)程相關(guān)實(shí)驗(yàn)l HMBC是異核二維譜，沒(méi)有對(duì)角線峰。每個(gè)相關(guān)峰表示相交的氫、碳峰所對(duì)應(yīng)的氫碳原子是以兩鍵、叁鍵或四鍵相連的。l HMBC 譜上是否出峰與氫、碳原子相隔幾鍵沒(méi)有直接關(guān)系，只與實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置中所設(shè)的J值有直接關(guān)系。氫碳兩鍵、三鍵或四鍵的J值范圍有很大部份是重疊的。l 由于脈沖序列的關(guān)系，HMBC譜中有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)一鍵偶合的峰，是以一對(duì)相隔一百多Hz的小峰出現(xiàn)在對(duì)應(yīng)氫峰的化學(xué)位移兩邊。ppm123456789ppm-20220