實(shí)驗(yàn)第4 細(xì)菌分離培養(yǎng)

1、（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬?shí)驗(yàn)?zāi)康模ǘ?shí)驗(yàn)原理（二）實(shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)器材（三）實(shí)驗(yàn)器材（四）實(shí)驗(yàn)方法（四）實(shí)驗(yàn)方法（五）實(shí)驗(yàn)作業(yè)（五）實(shí)驗(yàn)作業(yè)1.1.了解細(xì)菌分離和純化的原理了解細(xì)菌分離和純化的原理 2.2.掌握倒平板的方法和幾種常用的分離掌握倒平板的方法和幾種常用的分離培養(yǎng)的基本操作技術(shù)。培養(yǎng)的基本操作技術(shù)。3.3.掌握細(xì)菌的無(wú)菌操作技術(shù)掌握細(xì)菌的無(wú)菌操作技術(shù)4.4.掌握細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)。掌握細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)。v細(xì)菌動(dòng)物體內(nèi)呈混雜狀態(tài)存在，必須從中進(jìn)行分離。細(xì)菌動(dòng)物體內(nèi)呈混雜狀態(tài)存在，必須從中進(jìn)行分離。v分離純化即將待分離樣品進(jìn)行稀釋，并使細(xì)菌盡量分離純化即將待分離樣品進(jìn)行稀釋

2、，并使細(xì)菌盡量以分散狀態(tài)存在，然后使其長(zhǎng)成一個(gè)個(gè)純種單菌落。以分散狀態(tài)存在，然后使其長(zhǎng)成一個(gè)個(gè)純種單菌落。v接種即將一種細(xì)菌移接到另一滅菌培養(yǎng)基上的過程。接種即將一種細(xì)菌移接到另一滅菌培養(yǎng)基上的過程。v從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物生物的過程稱為微生物分離分離與與純化純化。v平板分離法普遍用于微生物的分離與純化，即選擇平板分離法普遍用于微生物的分離與純化，即選擇適合于待分離細(xì)菌的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、適合于待分離細(xì)菌的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求溫度和氧等要求, ,或加入某種抑制劑造成只利于該

3、細(xì)或加入某種抑制劑造成只利于該細(xì)菌生長(zhǎng)，而抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些菌生長(zhǎng)，而抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的細(xì)菌。不需要的細(xì)菌。n微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落，通常微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落，通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲取單個(gè)菌落的方法可獲取單個(gè)菌落的方法可通過通過稀釋涂布平板稀釋涂布平板或或平板劃線平板劃線等技術(shù)完成。等技術(shù)完成。n將微生物的培養(yǎng)物或含有微生物的樣品移植到培養(yǎng)將微生物的培養(yǎng)物或含有微生物的樣品移植到培養(yǎng)基上的操作技術(shù)稱

4、之為基上的操作技術(shù)稱之為接種接種。接種的關(guān)鍵是。接種的關(guān)鍵是要嚴(yán)格要嚴(yán)格的進(jìn)行無(wú)菌操作。的進(jìn)行無(wú)菌操作。n細(xì)菌的培養(yǎng)特性包括細(xì)菌的生長(zhǎng)條件和生長(zhǎng)表現(xiàn)，細(xì)菌的培養(yǎng)特性包括細(xì)菌的生長(zhǎng)條件和生長(zhǎng)表現(xiàn)，單個(gè)細(xì)菌或單種細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁殖，單個(gè)細(xì)菌或單種細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁殖，形成肉眼可見的菌落，各種細(xì)菌所形成的菌落特征形成肉眼可見的菌落，各種細(xì)菌所形成的菌落特征是不同的，按照各種細(xì)菌所形成的菌落特征，可以是不同的，按照各種細(xì)菌所形成的菌落特征，可以在鑒別細(xì)菌中作為依據(jù)。在鑒別細(xì)菌中作為依據(jù)。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、接種環(huán)、酒精牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、接種環(huán)、酒精燈、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、接

5、種燈、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、接種環(huán)、無(wú)菌培養(yǎng)皿、涂布器、恒溫培養(yǎng)箱環(huán)、無(wú)菌培養(yǎng)皿、涂布器、恒溫培養(yǎng)箱等。等。 倒平板劃線培養(yǎng)挑單菌落接種移植保存 1. 1.倒平板倒平板 右手持盛培養(yǎng)基的三角瓶置火焰右手持盛培養(yǎng)基的三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地?fù)艹?，試管或瓶口保持?duì)著火焰；然撥出，試管或瓶口保持對(duì)著火焰；然后左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近后左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速倒人培養(yǎng)基約打開一縫，迅速倒人培養(yǎng)基約1515mlml，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌勻分布在培養(yǎng)

6、皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。面上，待凝后即為平板。 2 2. .平板劃線分離平板劃線分離 最常用的平板接種法是劃線法。先將最常用的平板接種法是劃線法。先將接種環(huán)用火焰滅菌，待冷卻后挑取檢查接種環(huán)用火焰滅菌，待冷卻后挑取檢查材料，涂于平板的上端，隨即向下連續(xù)材料，涂于平板的上端，隨即向下連續(xù)平行劃線至平板的底部，劃線時(shí)接種環(huán)平行劃線至平板的底部，劃線時(shí)接種環(huán)與平板表面所成的角度要小，以免劃破與平板表面所成的角度要小，以免劃破瓊脂。劃線要密而不重復(fù)，充分利用平瓊脂。劃線要密而不重復(fù)，充分利用平板的表面。劃線完畢，先蓋好平板，再板的表面。劃線完畢，先蓋好平板，再將接種環(huán)上殘留的細(xì)菌用火

7、焰滅菌。將接種環(huán)上殘留的細(xì)菌用火焰滅菌。平板劃線分離培養(yǎng)結(jié)果3.3.斜面接種法斜面接種法v斜面培養(yǎng)基不易污染，常用于培養(yǎng)純種細(xì)菌。也斜面培養(yǎng)基不易污染，常用于培養(yǎng)純種細(xì)菌。也采用劃線接種法。右手持接種環(huán)，先將接種環(huán)滅采用劃線接種法。右手持接種環(huán)，先將接種環(huán)滅菌，待冷后挑取平板上孤立菌落的細(xì)菌。菌，待冷后挑取平板上孤立菌落的細(xì)菌。v將平板放回原處后，用左手取斜面培養(yǎng)基，用右將平板放回原處后，用左手取斜面培養(yǎng)基，用右手小指和手掌拔去試管棉塞，將試管口通過火焰手小指和手掌拔去試管棉塞，將試管口通過火焰略微加熱滅菌，再將接種環(huán)插入試管略微加熱滅菌，再將接種環(huán)插入試管( (勿觸碰管勿觸碰管壁壁) )，從

8、斜面底部向上連續(xù)平行劃線。劃線完畢，從斜面底部向上連續(xù)平行劃線。劃線完畢，再將試管口通過一下火焰，棉塞滅菌后，塞好，再將試管口通過一下火焰，棉塞滅菌后，塞好棉塞，最后將接種環(huán)上的殘留細(xì)菌用火焰滅菌。棉塞，最后將接種環(huán)上的殘留細(xì)菌用火焰滅菌。v所接種的細(xì)菌經(jīng)培養(yǎng)生長(zhǎng)為均質(zhì)的菌苔。此培養(yǎng)所接種的細(xì)菌經(jīng)培養(yǎng)生長(zhǎng)為均質(zhì)的菌苔。此培養(yǎng)物來(lái)自孤立菌落，為純種，可用于該菌的各種生物來(lái)自孤立菌落，為純種，可用于該菌的各種生物學(xué)性狀檢查。物學(xué)性狀檢查。接種環(huán)滅菌法接種環(huán)滅菌法細(xì)菌培養(yǎng)物的取材細(xì)菌培養(yǎng)物的取材 雙管移植法雙管移植法雙管移植法雙管移植法 4.4.液體接種法液體接種法 多用于增菌液進(jìn)行增菌培養(yǎng)，也可多

9、用于增菌液進(jìn)行增菌培養(yǎng)，也可用純培養(yǎng)菌接種液體培養(yǎng)基進(jìn)行生化用純培養(yǎng)菌接種液體培養(yǎng)基進(jìn)行生化試驗(yàn)，用接種環(huán)從斜面上沾取少許菌試驗(yàn)，用接種環(huán)從斜面上沾取少許菌苔，將接種環(huán)在液體內(nèi)振搖幾次即可苔，將接種環(huán)在液體內(nèi)振搖幾次即可。 半固體培養(yǎng)基穿刺接種法半固體培養(yǎng)基穿刺接種法 5.5.培養(yǎng)培養(yǎng) 分離好的平板做好標(biāo)分離好的平板做好標(biāo)記，記，倒置倒置于于3737溫箱溫箱培養(yǎng)培養(yǎng)18182424h h 。 接種好的斜面、液體接種好的斜面、液體、半固體培養(yǎng)基做好、半固體培養(yǎng)基做好標(biāo)記，放標(biāo)記，放3737溫箱培溫箱培養(yǎng)養(yǎng)18182424h h 。 6.6.菌落形態(tài)菌落形態(tài) 首先一般先觀察整個(gè)平板培養(yǎng)基上的菌首先

10、一般先觀察整個(gè)平板培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)及種類，然后再選有代表性的各落形態(tài)及種類，然后再選有代表性的各種孤立菌落做如下的詳細(xì)觀察。種孤立菌落做如下的詳細(xì)觀察。 其項(xiàng)目有其項(xiàng)目有大小、形態(tài)、隆起、邊緣、表大小、形態(tài)、隆起、邊緣、表面狀況、質(zhì)地、顏色、透明度面狀況、質(zhì)地、顏色、透明度等等。 大小大小：針尖大、粟粒大等：針尖大、粟粒大等 形狀形狀：點(diǎn)狀、圓形、卵圓形、葉狀等。：點(diǎn)狀、圓形、卵圓形、葉狀等。 邊緣邊緣：整齊、鋸齒狀、毛發(fā)狀等。：整齊、鋸齒狀、毛發(fā)狀等。 表面表面：光滑、皺紋、濕潤(rùn)、干燥等。：光滑、皺紋、濕潤(rùn)、干燥等。 隆起度隆起度：凸起、扁平、中心凹陷等。：凸起、扁平、中心凹陷等。 結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：均質(zhì)性、顆粒狀等。：均質(zhì)性、顆粒狀等。 色調(diào)色調(diào)：無(wú)色、白色、黃色、褐色等。：無(wú)色、白色、黃色、褐色等。 透明度透明度：透明、半透明、不透明等。：透明、半透明、不透明等。菌落形態(tài)q 觀察菌落時(shí)，不要將空氣中落入培養(yǎng)基觀察菌落時(shí)，不要將空氣中落入培養(yǎng)基而生長(zhǎng)的雜菌誤認(rèn)為目的細(xì)菌。而生長(zhǎng)的雜菌誤認(rèn)為目的細(xì)菌。q 雜菌一般生長(zhǎng)于劃線痕跡外，或?yàn)閭€(gè)別雜菌一般生長(zhǎng)于劃線痕跡外，或?yàn)閭€(gè)別