實驗一槐米中蘆丁的提取分離和鑒定

1、實驗一槐米中蘆丁的提取、分離和鑒定一、概述槐米系豆科植物槐樹sophoiw japonica l.）的花蕾（槐米）。具有清熱、 涼血、止血的功效，用于治療便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，風(fēng)熱 目赤，痛疽瘡毒，還可用于預(yù)防中風(fēng)。近年來被用作治療高血壓的輔助藥物。藥理實驗證明，槐花米具有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管的滲透作用，抗炎作用，解痙、抗 漬瘍作用，影響脂質(zhì)代謝，抗菌等多種生物活性?；被族饕悬S酮昔，皂 甘、笛醇和糅質(zhì)等成分,其中蘆t（rutin）含量最高,達(dá)1220%。主耍化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)：蘆丁 （rutin）： c27h3oo16 - 3h20,淺黃色針狀結(jié)晶,mpl74178&#

2、176;c （含三分子 水）；188°c （無水物）。難溶于冷水（1： 800010000）,可溶于熱水（1： 180 200）,熱甲醇（1： 10）,冷甲醇（1： 100）,熱乙醇（1： 60）,冷乙醇（1： 650）； 難溶于乙醞、三氯甲烷、石油醞、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于堿液。桝皮素（quercetin）： ci5hloo7 2h20,黃色結(jié)晶,mp313314°c （2 分子結(jié) 晶水），316°c （無水物）。能溶于冷乙醇（1： 290）,易溶于沸乙醇（1： 23）,可 溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、毗噪、丙酮等；難溶于水、苯、石油儲等溶劑。r=glc-(6

3、-l)-glcr=h二、實驗部分（-）實驗?zāi)康?、通過蘆丁的制備,掌握黃酮類化合物提取分離的原理和操作。2、掌握酸水解將蘆丁生成桝皮素的方法。3、常握蘆丁與懈皮索的鑒別方法，聚酰胺薄膜的操作方法，電子天平的使用方法。（二）實驗原理1、蘆丁的捉取原理：蘆丁屮含冇多個酚疑基，具有酸性，故用堿捉酸沉法。2、蘆丁的分離原理：蘆丁在沸水中溶解，在冷水中析出。3、蘆丁的鑒定原理：蘆丁與蒯皮素分別為黃酮類化合物的昔與昔元，用 molish反應(yīng)可以進(jìn)行鑒別，也可以利用聚酰胺的氫鍵吸附性質(zhì)進(jìn)行定性分析， rf值也應(yīng)不同。（三）實驗藥材、儀器與試劑1、藥材:槐米50g （每組）。2、儀器：電爐子、不銹鋼鍋、量杯、

4、1000ml燒杯、冰箱、濾紙、ph試紙、 減壓抽濾裝置、錐形瓶、玻璃漏斗、紗布、電子天平、聚酰胺薄膜。3、試劑：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、濃鹽酸、蒸憾水、鎂粉、 濃硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化鋁醇溶液、醋酸鎂乙醇液等。（四）實驗方法1、蘆丁的提?。海▔A提酸沉法）取槐米50g,加0.4%硼砂水溶液400ml至小鍋屮，加熱煮沸，用右灰乳調(diào)節(jié) ph二9,加熱微沸30min,隨時補(bǔ)充失去的水分及控制ph值，四層紗布過濾，藥 渣再重復(fù)處理一次（不用調(diào)ph值）。合并兩次濾液，用濃鹽酸調(diào)ph=3,放入冰 箱屮析品。2、蘆丁的精制：（水重結(jié)品法）（1）抽濾：用虹吸法先除去上清液，再進(jìn)行抽

5、濾，可更換濾紙。（2）精制：取全部蘆丁粗品，加入蒸飾水800ml,煮沸至全部溶解（15min）, 趁熱抽濾，放入冰箱析晶。3、蘆丁的水解：（酸水解法）取蘆t lg,加入2%硫酸150ml,小火加熱微沸30min,注意觀察現(xiàn)象:溶液 曲渾濁變澄清，逐漸析出黃色結(jié)晶，抽濾，得到桝皮索粗品。剩下的蘆丁要妥善 保管，下次課還要帶來。4、鑒別反應(yīng)（1）稱榊皮素重量，計算水解率。（2）薄層色譜鑒定樣品：自制蘆丁及懈皮索的luig/ml甲醇溶液。（每組稱取20mg）對照品：蘆丁及榊皮素對照品的lmg/ml甲醇溶液。展開劑：90%乙醇溶液顯色：噴三氯化鋁溶液，紫外光（365mn）觀察熒光。實驗結(jié)果記錄：觀察斑

6、點顏色，記錄圖譜并計算rf值。（3）顯色反應(yīng)©molish反應(yīng)：取蕓香昔及懈皮素樣品分別lml,加入3%a -蔡酚溶液1滴, 振搖，沿壁滴加濃硫酸lml,觀察現(xiàn)象。%1 鹽酸-鎂粉反應(yīng)：分別取樣品51,加入濃鹽酸2-3滴，再加入少許鎂粉, 觀察現(xiàn)彖。%1 紙片反應(yīng)：取一張濾紙，分別滴加樣品1滴，在上面再滴加三氯化鋁溶液 1滴，觀察現(xiàn)象。（同理，再用醋酸鎂顯色）（五）注意事項1、提取吋控制小火加熱，微沸即可。2、加熱完成后要放冷抽濾。3、用石灰水調(diào)節(jié)蘆丁提取溶液的ph,既可以達(dá)到堿提取蘆丁的口的，還可 以除去槐米中含有的大量粘液質(zhì)。但鈣離子濃度及pll值均不宜過高，否則多余 的鈣能與蘆丁形成螯合物沉淀，同時黃酮母核在強(qiáng)堿性條件下易被破壞。4、用hc1調(diào)ph時,應(yīng)注意ph不要過低,因為ph過低（ph2以下）會使蘆 丁形成鋅鹽而使已形成的沉淀重新溶解，同時黃酮母核也會在強(qiáng)堿性條件下被 破壞，導(dǎo)