iCelligence 基本實(shí)驗(yàn)方案

1、 iCELLigence 基本實(shí)驗(yàn)方案艾森生物iCELLigence系統(tǒng)的核心技術(shù)原理及基本應(yīng)用概況細(xì)胞生物學(xué)是通過(guò)研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能闡明其生命活動(dòng)基本規(guī)律的科學(xué)。細(xì)胞生物學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容包括基因，信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和發(fā)育的分子機(jī)制及其遺傳控制，細(xì)胞識(shí)別及免疫及分子細(xì)胞生物學(xué)。目前大部分細(xì)胞學(xué)研究的檢測(cè)形式多是終點(diǎn)檢測(cè)法，僅僅給實(shí)驗(yàn)提供了一個(gè)最終結(jié)果，而且經(jīng)常需要標(biāo)記和破壞細(xì)胞。但因?yàn)榧?xì)胞是活體，生物和細(xì)胞進(jìn)程是動(dòng)態(tài)而非靜態(tài)的，終點(diǎn)檢測(cè)法大大局限了生物信息的全程動(dòng)態(tài)收集。iCELLigence系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用解決了傳統(tǒng)細(xì)胞檢測(cè)的局限性。iCELLigence的核心技術(shù)是基于非標(biāo)記、動(dòng)態(tài)

2、實(shí)時(shí)細(xì)胞分析檢測(cè)。該技術(shù)采用微機(jī)械加工技術(shù), 在細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)孔的底上設(shè)計(jì)了金微電極陣列，用以構(gòu)建能實(shí)時(shí)、連續(xù)、定量跟蹤細(xì)胞形態(tài)和增殖分化改變的細(xì)胞阻抗測(cè)試傳感器，貼壁生長(zhǎng)在微電極表面的細(xì)胞可引起貼壁電極界面阻抗的改變，從而可以獲得細(xì)胞生理功能相關(guān)的生物信息。iCELLigence系統(tǒng)的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)包括： 高信息量：可連續(xù)檢測(cè)生物反應(yīng)的全過(guò)程，提供大量重要的動(dòng)態(tài)反應(yīng)信息。 無(wú)標(biāo)記：分析無(wú)需昂貴的標(biāo)記或報(bào)告。 無(wú)創(chuàng)傷：電子檢測(cè)不會(huì)干擾細(xì)胞生長(zhǎng)和分析。 高準(zhǔn)確度和精確度：定量衡量細(xì)胞生長(zhǎng)，提供高于2個(gè)數(shù)量級(jí)的動(dòng)態(tài)范圍，孔對(duì)孔CV通常低于10。 自動(dòng)實(shí)時(shí)檢測(cè)：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程自動(dòng)收集數(shù)據(jù)，實(shí)時(shí)分析

3、，大大改善僅僅在最終點(diǎn)分析的結(jié)果。 靈活性：獨(dú)特的設(shè)計(jì)允許自定義分析項(xiàng)目，提高實(shí)驗(yàn)室的效率。 易操作：用戶(hù)友好的軟件，簡(jiǎn)單直接的安裝，簡(jiǎn)化培訓(xùn)和操作。 活細(xì)胞品質(zhì)控制：在培養(yǎng)孔中檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)量。 基于iCELLigence系統(tǒng)的檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，目前開(kāi)發(fā)的一系列應(yīng)用包括：細(xì)胞質(zhì)量控制；細(xì)胞增殖；化合物、細(xì)胞和病毒介導(dǎo)的細(xì)胞毒性；細(xì)胞粘附和擴(kuò)展； 細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)；IgE介導(dǎo)的肥大細(xì)胞致敏活化及脫顆粒；受體介導(dǎo)的信號(hào)通路傳導(dǎo) (GPCR, RTK)；NK細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷腫瘤細(xì)胞; 病毒CPE及中和實(shí)驗(yàn)的監(jiān)測(cè); 細(xì)菌毒素介導(dǎo)的細(xì)胞病變的監(jiān)測(cè); 心臟細(xì)胞功能和毒性監(jiān)測(cè)等等。該技術(shù)已經(jīng)在細(xì)胞研究中廣泛應(yīng)用，近年的已

4、經(jīng)在SCI收錄的雜志上發(fā)表的文獻(xiàn)已達(dá)200多篇。 實(shí)驗(yàn)方案:實(shí)驗(yàn)1 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)2 化合物介導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)3 細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)4 配體-受體相互作用介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 實(shí)驗(yàn)1. 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)1. 概述 細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞；細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是觀察細(xì)胞生長(zhǎng)基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定生長(zhǎng)特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長(zhǎng)變化的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長(zhǎng)特性觀察中，生長(zhǎng)曲線的測(cè)定是最為基本的指標(biāo)。傳統(tǒng)方法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線一般利

5、用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)過(guò)程繁瑣且耗時(shí)（見(jiàn)附件），使用iCelligence實(shí)時(shí)細(xì)胞分析系統(tǒng)方便實(shí)時(shí)地動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞貼壁和增殖過(guò)程。2. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢測(cè)細(xì)胞的增殖曲線，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后觀察細(xì)胞在xCELLigence系統(tǒng)上的增殖生長(zhǎng)過(guò)程，并以該曲線為基礎(chǔ)，判斷細(xì)胞的質(zhì)量。3. 實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株 · A549 (ATCC: Cat No:CCL-185): 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(株)儀器設(shè)備:· CO2 培養(yǎng)箱及其它細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備· iCELLigence 系統(tǒng)· E-Plate L8細(xì)胞培養(yǎng)板試劑:· A549細(xì)胞培養(yǎng)基: F-12K Nutrient Mi

6、xture(Gibco; Cat No. 211127)containing 10% Fetal Bovine Serum (FBS) (Gibco; Cat No. 16000-044), · 1%Penicilline-Streptomycin solution (Gibco; Cat No. 15140-122)· 0.25%/Trypsin/EDTA solution (Gibco; Cat No. 25300054) · Phosphate buffered saline (PBS， Hyclone ; Cat No. SH30256.01B）4. 實(shí)驗(yàn)

7、操作流程:4.1 細(xì)胞懸液準(zhǔn)備：4.1.1 在超凈工作臺(tái)內(nèi)，于無(wú)菌條件下，吸除培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液。4.1.2 以PBS液清洗1-2次，于培養(yǎng)皿內(nèi)加入1mL（T75培養(yǎng)瓶）含EDTA的胰蛋白酶溶液。蓋好蓋，置37C溫箱中溫育2-6 min后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞被消化的情況，若細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間歇增大，終止消化。4.1.3 輕輕吸除消化液，加入培養(yǎng)基10mL/培養(yǎng)瓶，用移液管反復(fù)輕輕吹打貼壁的細(xì)胞，使它們形成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，1000 x rpm 離心 5 min，去除上清，加入新鮮培養(yǎng)基，并用移液管將細(xì)胞吹打均勻。用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液濃度后，配制成實(shí)驗(yàn)細(xì)胞濃度為2&#

8、215;105/ml；1×105/ml；0.5×105/ml；0.25×105/ml。 4.2 使用iCelligence系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè): 4.2.1在E-Plate L8的孔中加入150 µl 培養(yǎng)基。4.2.2將E-Plate L8放到iCelligence 系統(tǒng)上，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)行掃描，檢查是否接觸良好，若接觸良好則可進(jìn)行下一步。4.2.3點(diǎn)擊主頁(yè)上“New Experiment”，進(jìn)入“Protocol”頁(yè)面，選擇需要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型“Cell QC”，選擇“Standard Protocol”，確定實(shí)驗(yàn)流程。 4.2.4 點(diǎn)擊“Layout”頁(yè)面，設(shè)

9、置實(shí)驗(yàn)孔的細(xì)胞名稱(chēng)、數(shù)目。4.2.5 點(diǎn)擊左下角開(kāi)始的標(biāo)志，開(kāi)始檢測(cè)基線。4.2.6取出E-Plate L8，在孔中加入300 µl 混合均勻的A549細(xì)胞懸液，使每孔中細(xì)胞數(shù)目為60,000；30,000；15,000；7,500 cells。 4.2.7將E-Plate L8置于超凈臺(tái)中室溫放置30min。4.2.8將E-Plate L8放到培養(yǎng)箱中的iCelligence上。4.2.9在系統(tǒng)自動(dòng)掃描“Scan Plate”后，開(kāi)始Step2檢測(cè)細(xì)胞增殖曲線。5. 典型結(jié)果及數(shù)據(jù)分析:不同密度梯度A549細(xì)胞的增殖曲線：60k30k15k7.5kMedia14實(shí)驗(yàn)2. 化合物介導(dǎo)

10、的細(xì)胞毒性檢測(cè)1. 概述 研究化合物介導(dǎo)的細(xì)胞毒性是新藥發(fā)現(xiàn)與開(kāi)發(fā)(例如：抗腫瘤藥物的篩選，藥物心臟毒性檢測(cè))的重要領(lǐng)域；另外，新的藥物、化妝品、食品添加劑等在投入使用之前，則必須進(jìn)行大量的細(xì)胞毒性試驗(yàn)來(lái)證明它們是無(wú)毒安全的。使用iCELLigence 實(shí)時(shí)細(xì)胞分析系統(tǒng)評(píng)估化合物介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，細(xì)胞會(huì)通過(guò)細(xì)胞和微電極之間的相互作用產(chǎn)生電信號(hào)。當(dāng)加藥以后，化合物作用于細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)，粘附能力等狀態(tài)發(fā)生綜合的變化。這些實(shí)時(shí)的變化可以通過(guò)RTCA系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)用電信號(hào)的形式反映出來(lái)。如果該化合物最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡，那么信號(hào)就會(huì)降低至零；反之，則對(duì)信號(hào)沒(méi)有影響。2. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢測(cè)細(xì)胞的增殖曲線，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)

11、始后觀察細(xì)胞在xCELLigence系統(tǒng)上的增殖生長(zhǎng)過(guò)程，并以該曲線為基礎(chǔ)選擇合適的藥物添加時(shí)間。添加藥物后計(jì)算藥物的IC50及獲得藥物濃度梯度依賴(lài)性反應(yīng)曲線。3. 實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株 · A549 (ATCC: Cat No:CCL-185): 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(株)儀器設(shè)備:· CO2 培養(yǎng)箱及其它細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備· iCELLigence 系統(tǒng)· E-Plate L8細(xì)胞培養(yǎng)板試劑:· A549細(xì)胞培養(yǎng)基: F-12K Nutrient Mixture(Gibco; Cat No. 211127)containing 10% Fetal Bov

12、ine Serum (FBS) (Gibco; Cat No. 16000-044), · 1%Penicilline-Streptomycin solution (Gibco; Cat No. 15140-122)· 0.05%/Trypsin/EDTA solution (Gibco; Cat No. 25300054) · Phosphate buffered saline (PBS， Hyclone ; Cat No. SH30256.01B）3. 化合物信息:Paclitaxel: 抗腫瘤藥?？纱龠M(jìn)微管雙聚體裝配成微管，使微管穩(wěn)定，從而阻礙細(xì)胞分裂，抑制

13、腫瘤生長(zhǎng)?；衔飪?chǔ)存液配制:1,02mg Paclitaxel （MW = 853.9 g/mol）溶于 1 ml DMSO, 配制成1.2 mM儲(chǔ)存液，并分裝凍存 (-20°C) 4. 實(shí)驗(yàn)操作流程:第一天：4.1 細(xì)胞懸液準(zhǔn)備：4.1.1 在超凈工作臺(tái)內(nèi)，于無(wú)菌條件下，吸除培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液。4.1.2 以PBS液清洗1-2次，于培養(yǎng)皿內(nèi)加入1mL（T75培養(yǎng)瓶）含 EDTA的胰蛋白酶溶液。蓋好蓋，置37C溫箱中溫育2-6 min后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞被消化的情況，若細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間歇增大，終止消化。4.1.3 輕輕吸除消化液，加入培養(yǎng)基10mL/培養(yǎng)瓶，用移液管反復(fù)輕輕吹打

14、貼壁的細(xì)胞，使它們形成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，1000 x rpm 離心 5 min，去除上清，加入新鮮培養(yǎng)基，并用移液管將細(xì)胞吹打均勻。用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液濃度后，配制成實(shí)驗(yàn)需要的細(xì)胞濃度5 x 104 cells/ml。 4.2 使用iCelligence系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè): 4.2.1在E-Plate L8的孔中加入150 µl 培養(yǎng)基。4.2.2將E-Plate L8放到iCelligence 系統(tǒng)上，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)行掃描，檢查是否接觸良好，若接觸良好則可進(jìn)行下一步。4.2.3點(diǎn)擊主頁(yè)上“New Experiment”，進(jìn)入“Protocol”頁(yè)面，選擇需要進(jìn)行的

15、實(shí)驗(yàn)類(lèi)型“Cytotoxicity”，選擇“Standard Protocol”，確定實(shí)驗(yàn)流程。 4.2.4 點(diǎn)擊“Layout”頁(yè)面，設(shè)置實(shí)驗(yàn)孔的細(xì)胞名稱(chēng)、數(shù)目和藥物的名稱(chēng)及濃度。4.2.5 點(diǎn)擊左下角開(kāi)始的標(biāo)志，開(kāi)始檢測(cè)基線。4.2.6取出E-Plate L8，在孔中加入300 µl 混合均勻的A549細(xì)胞懸液，使每孔中細(xì)胞數(shù)目為 15,000 cells。 4.2.7將E-Plate L8置于超凈臺(tái)中室溫放置30min。4.2.8將E-Plate L8放到培養(yǎng)箱中的iCelligence上。4.2.9在系統(tǒng)自動(dòng)掃描“Scan Plate”后，開(kāi)始Step2檢測(cè)細(xì)胞增殖曲線。第二

16、天: 4.3 藥物工作液配制及添加藥物：4.3.1 用培養(yǎng)基將細(xì)胞毒性藥物3倍系列稀釋?zhuān)仓苽?個(gè)濃度的工作液，工作液最高濃度為5µM。選擇濃度時(shí)應(yīng)以最高濃度下多數(shù)細(xì)胞被殺死，而最低濃度時(shí)不會(huì)殺死細(xì)胞為標(biāo)準(zhǔn)。4.3.2終止step2，將E-Plate L8從Station上取出。 在細(xì)胞中加入配制好的工作液10µl。4.3.3重新將E-Plate L8 放入Station中，開(kāi)始step3，持續(xù)測(cè)量72小時(shí)。5. 典型結(jié)果及數(shù)據(jù)分析:Paclitaxel引起的濃度依賴(lài)性作用曲線及計(jì)算的IC50：100nM33.3nM11.1nM3.7nM1.23nM0.41nM0.14nM

17、ControlTime after add drug24hr48hr72hrIC5013.8nM18.3nM30.3nM實(shí)驗(yàn)3. 細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn) 1. 概述 細(xì)胞黏附性是維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的基本條件，也是細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和發(fā)揮功能的調(diào)節(jié)因素，并且對(duì)細(xì)胞的增值、分化有重要影響。 通?？煞譃閮深?lèi)，即細(xì)胞與細(xì)胞黏附和細(xì)胞與基質(zhì)黏附。機(jī)體內(nèi)許多細(xì)胞，如上皮細(xì)胞，需要牢固地定在某處發(fā)揮功能；另一些細(xì)胞，如白細(xì)胞，活躍運(yùn)動(dòng)，就需要不斷調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附。細(xì)胞黏附性的改變?cè)谀[瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。惡性腫瘤具有從原發(fā)瘤分離及在體內(nèi)擴(kuò)散的能力，提示這些細(xì)胞相互識(shí)別及黏附機(jī)制發(fā)生了改變。2. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?用iCelligen

18、ce細(xì)胞分析系統(tǒng)細(xì)胞使用外基質(zhì)蛋白或者抗體等包被電極傳感器來(lái)觀察細(xì)胞黏附和鋪展過(guò)程的變化。實(shí)驗(yàn)材料：細(xì)胞株 · 3T3 (ATCC: Cat No: CRL-1658 )儀器設(shè)備:· CO2 培養(yǎng)箱及其它細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備· iCELLigence系統(tǒng)· E-Plate L8細(xì)胞培養(yǎng)板試劑:· 3T3 細(xì)胞培養(yǎng)基: DMEM (Hyclone; SH30022.01) containing 10% Donor Bovine Serum（FCS）(Invitrogen; Cat No16030-074), 1%Penicilline-Streptomy

19、cin solution (Gibco; Cat No. 15140-122)· 0.05%/Trypsin/EDTA (Gibco; Cat No. 25300054) · Phosphate buffered saline (PBS， Hyclone ; Cat No. SH30256.01B）· Fibronectin (1 mg/ml (0.1% w/v) (Sigma, Cat No. F1141-1MG)4. 實(shí)驗(yàn)操作流程:4.1 E-plate L8 包被：4.1.1 將Fibronectin配制成10ug/ml 的工作液備用。4.1.2在E-Pla

20、te L8的孔中加入150µl 10ug/ml的FN工作液，將E-Plate L8置于CO2培養(yǎng)箱30min。4.1.3 取出E-Plate L8檢測(cè)板，吸出Fibronectin。4.2細(xì)胞懸液準(zhǔn)備：4.1.1 取出3T3細(xì)胞，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，于無(wú)菌條件下，吸除培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液。4.1.2 以PBS液清洗1-2次，于培養(yǎng)皿內(nèi)加入1mL（T75培養(yǎng)瓶）含 EDTA的胰蛋白酶溶液。蓋好蓋，置37C溫箱中溫育2-6 min后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞被消化的情況，若細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間歇增大，終止消化。4.1.3 輕輕吸除消化液，加入培養(yǎng)基10mL/培養(yǎng)瓶，用移液管反復(fù)輕輕吹打貼壁的細(xì)胞，使

21、它們形成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，1000 x rpm 離心 5 min，去除上清，加入新鮮培養(yǎng)基，并用移液管將細(xì)胞吹打均勻。用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液濃度后，配制成實(shí)驗(yàn)需要的細(xì)胞濃度5 x 104 cells/ml。 4.2 使用iCelligence系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè): 4.2.1在E-Plate L8的孔中加入150 µl 培養(yǎng)基。4.2.2將E-Plate L8放到iCelligence 系統(tǒng)上，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)行掃描，檢查是否接觸良好，若接觸良好則可進(jìn)行下一步。4.2.3點(diǎn)擊主頁(yè)上“New Experiment”，進(jìn)入“Protocol”頁(yè)面，選擇需要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型“Ad

22、hesion”，選擇“Standard Protocol”，確定實(shí)驗(yàn)流程。 4.2.4 點(diǎn)擊“Layout”頁(yè)面，設(shè)置實(shí)驗(yàn)孔的細(xì)胞名稱(chēng)和數(shù)目。4.2.5 點(diǎn)擊左下角開(kāi)始的標(biāo)志，開(kāi)始檢測(cè)基線。4.2.6取出E-Plate L8，在孔中加入300 µl 混合均勻的3T3細(xì)胞懸液，使每孔中細(xì)胞數(shù)目為 15,000 cells。 4.2.7加入細(xì)胞懸液后立即將E-Plate L8放到培養(yǎng)箱中的iCelligence上。4.2.8在系統(tǒng)自動(dòng)掃描“Scan Plate”后，開(kāi)始Step2檢測(cè)細(xì)胞黏附曲線6小時(shí)。FN coatingNo coating5. 典型細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)4. 受體-配體

23、相互作用1. 實(shí)驗(yàn)背景及目的 細(xì)胞通過(guò)化學(xué)信息進(jìn)行通訊的能力取決于信號(hào)分子的合成與分泌以及受體與配體的相互識(shí)別和結(jié)合。細(xì)胞通訊中，由信號(hào)傳導(dǎo)細(xì)胞送出的信號(hào)分子必須被靶細(xì)胞接收才能觸發(fā)靶細(xì)胞的應(yīng)答，接收信息的分子稱(chēng)為受體，信號(hào)分子則被稱(chēng)為配體。受體與配體相互作用，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的一系列生物化學(xué)反應(yīng)以及蛋白間相互作用，直至細(xì)胞生理反應(yīng)所需基因開(kāi)始直至細(xì)胞生理反應(yīng)所需基因開(kāi)始表達(dá)、及發(fā)生各種生物學(xué)效應(yīng)形成。 G蛋白與配體間的相互作用是典型的受體與配體的相互作用。配體通過(guò)不同的G蛋白，介導(dǎo)影響質(zhì)膜上某些離子通道或酶的活性，繼而影響細(xì)胞內(nèi)第二信使?jié)舛群秃罄m(xù)的生物學(xué)效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)iCELLigence系統(tǒng)實(shí)

24、現(xiàn)了對(duì)GPCR功能的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)。在此例中，表達(dá)組胺H1受體（Gq）的HeLa細(xì)胞在組胺刺激下的激活作用表現(xiàn)在短時(shí)的細(xì)胞指數(shù)變化上。使用iCELLigence的GPCR檢測(cè)， 除檢測(cè)敏感性與傳統(tǒng)檢測(cè)方法例如鈣濃度檢測(cè)和cAMP檢測(cè)相同外，優(yōu)勢(shì)還體現(xiàn)在： 可用于檢測(cè)不同G蛋白家族例如Gq, Gs 和 Gi 介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路； 可用于與疾病有關(guān)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株上的內(nèi)源性受體；既可檢測(cè)短期反應(yīng)亦可檢測(cè)長(zhǎng)期反應(yīng)； 均一性好。2. 實(shí)驗(yàn)材料· 檢測(cè)系統(tǒng)：iCELLigence 系統(tǒng)· 檢測(cè)板： E-Plate L8 微金電極檢測(cè)板· 細(xì)胞株： HeLa 細(xì)胞 · 試劑： 組胺(Histamine)3. 實(shí)驗(yàn)流程第一天:1. 細(xì)胞懸液準(zhǔn)備：使用常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)處理方法，制備實(shí)驗(yàn)需要的HeLa細(xì)胞濃度1.6 x 105 cells/ml; 2 iCelligence系統(tǒng)的基線測(cè)定: 2.1 在E-Plate L8的孔中加入150 µl 培養(yǎng)基;2.2 將E-Plate L8放到iCelligence 系統(tǒng)上，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)進(jìn)行掃描，檢查是否接觸良好，若接觸良好則可進(jìn)行下一步;2.3 點(diǎn)擊主頁(yè)上“New Experiment”，進(jìn)入“Protoco