鹽析法分離蛋白質

1、第第4 4章章 鹽析法鹽析法n知識點知識點：鹽析法，等電點沉淀法，有機溶劑 沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。n重點重點：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對沉淀效果的影響，并能根據(jù)實際情況予以靈活應用和選擇。 n難點難點：常用沉淀方法的靈活運用。 沉淀定義沉淀特點應用范圍沉淀分類1. 沉淀法概述n鹽析法 n有機溶劑沉淀法n選擇性變性沉淀法n等電點沉淀法n離子型聚合物沉淀法n聚電解質沉淀法 n高價金屬離子沉淀法沉淀法分類n活性蛋白n非活性蛋白n理化性質n溶解度n提取方法蛋白質的理化性質的回顧 n鹽析沉淀步驟n加沉淀劑方式n陳化條件n脫鹽處理2. 鹽析沉淀鹽析機理

2、示意圖 n鹽離子與蛋白質分子爭奪水分子，降低了用于溶解蛋白質的有效水量，減弱了蛋白質的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導致蛋白質溶解度下降；n鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質溶解度下降；n鹽離子引起原本在蛋白質分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機理nCohn方程式logS=-KsInKs鹽析n鹽析n二次鹽析鹽析沉淀基礎圖1 碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強度的關系圖不同蛋白質的溶解度曲線蛋白質的鹽析分布曲線溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b) n對影響n對Ks影響n鹽種類n鹽濃度n溫度npH值鹽析影響因素無機鹽種類的影響圖7 不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強度的關系

3、（25）()NaCl; ()KCl; ( )MgSO4; ()NH4)SO4; ()Na2SO4; ()K2SO4; ()檸檬酸三鈉溫度的影響pH對的影響蛋白質起始濃度的影響二次鹽析鹽析操作3 等電點沉淀實例n從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI8.9，可先于pH 3.0左右進行等電點沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(pI=3O)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI5.3)時，先調pH至8.0除去堿性蛋白質，再調pH至3.0除去酸性蛋白質(同時加入一定濃度的有機溶劑以提高沉淀效果)。n堿性磷酸酯酶的pI沉淀提?。喊l(fā)酵液調pH 4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 m

4、ol/L Tris-HCl緩沖液重新溶解，加入2040%飽和度的硫酸銨分級，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。 4 有機溶劑沉淀原理圖有機溶劑沉淀實例酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氫二鈉溶液，37水浴保溫2 h，室溫攪拌3 h，離心收集上清液，升溫至55，保溫20 min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5 選擇性熱變性沉淀實例n（1）非離子型聚合物沉淀法）非離子型聚合物沉淀法n（2）聚電解質沉淀法）聚電解質沉淀法n（3）金屬離子沉淀法）金屬離子沉淀法n（4）親和沉淀親和沉淀6 其他沉淀法凝聚技術凝聚技術絮凝技術絮凝技術7 凝聚和絮凝技術 第五章 沉淀法課后練習1.名詞解釋： 鹽析法，有機溶劑沉淀法，選