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1、專題 1基因工程基因工程的概念基因工程是指根據(jù)人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過(guò)體外 d na重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù) ,給予生物以 新的遺傳特性 ,制造出 更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品;基因工程是在dna分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做dna重組技術(shù) ;(一)基因工程的基本工具1. “分子手術(shù)刀” 限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)( 1)來(lái)源:主要是從 原核生物 中分別純化出來(lái)的;( 2)功能:能夠識(shí)別雙鏈 dna分子的某種 特定 的核苷酸序列, 并且使每一條鏈中 特定 部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵 斷開(kāi),因此具有 專一性 ;( 3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的dna片段末端通常有兩種形式: 黏

2、性末端和平末端 ;2. “分子縫合針” dna連接酶(1) 兩種 dna連接酶( e·colidna 連接酶和 t4- dna連接酶) 的比較:相同點(diǎn):都縫合 磷酸二酯 鍵;區(qū)分:e· colidna 連接酶來(lái)源于 t4 噬菌體 ,只能將雙鏈 dna片段互補(bǔ)的 黏性末端 之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái); 而 t4dna連接酶能縫合兩種末端 ,但連接平末端的之間的效率 較低 ;(2) 與 dna聚合酶作用的異同dna聚合酶只能將 單個(gè)核苷酸 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵;dna連接酶是連接兩個(gè) dna片段 的末端,形成磷酸二酯鍵;3. “分子運(yùn)輸車” 載體( 1)載體

3、具備的條件: 能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)固儲(chǔ)存; 具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源dna片段插入 ; 具有標(biāo)記基因,供重組dna的鑒定和挑選 ;( 2)最常用的載體是 質(zhì)粒 ,它是一種 暴露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有自我復(fù)制才能的雙鏈環(huán)狀dna分子 ;( 3)其它載體: 噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒; 二 基因工程的基本操作程序第一步: 目的基因的獵取1. 目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因;2. 原核基因?qū)嵭?直接分別 獲得, 真核基因是 人工合成 ;人工合成目的基因的常用方法有 反轉(zhuǎn)錄法 _和化學(xué)合成法 _;3. pcr技術(shù)擴(kuò)增目的基因( 1)原理: dna雙鏈復(fù)制( 2)過(guò)程:

4、第一步:加熱至9095 dna解鏈 ;其次步:冷卻到 55 60, 引物結(jié)合到互補(bǔ)dna鏈 ;第三步:加熱至 70 75, 熱穩(wěn)固 dna聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成 ;其次步: 基因表達(dá)載體的構(gòu)建1. 目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)固存在 ,并且可以 遺傳至下一代,使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮作用 ;2. 組成: 目的基因 啟動(dòng)子 終止子 標(biāo)記基因( 1)啟動(dòng)子:是一段有特別結(jié)構(gòu)的dna片段 ,位于基因的 首端 ,是 rna聚合酶 識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mrn,a 最終獲得所需的 蛋白質(zhì) ;( 2)終止子: 也是一段有特別結(jié)構(gòu)的dna片段 ,位于基因的 尾端 ;( 3)標(biāo)記基因的

5、作用: 是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因 ,從而將 含有目的基因的細(xì)胞 挑選出來(lái);常用的標(biāo)記基因是 抗生素基第三步: 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞_1. 轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維護(hù)穩(wěn)固和表達(dá)的過(guò)程;2. 常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞: 采納最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ,其次仍有基因槍法 和 花粉管通道法 等;將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:最常用的方法是顯微注射技術(shù) ;此方法的受體細(xì)胞多是受精卵 ;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:ca+處理法3. 重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后, 挑選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá) ;第四步: 目的基因的檢測(cè)和表達(dá)1. 第一要

6、檢測(cè) 轉(zhuǎn)基因生物的染色體dna上是否插入了目的基因,方法是采納 dna分子雜交技術(shù) ;2. 其次仍要檢測(cè) 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mrn,a 方法是采納 用標(biāo)記的目的基因作探針與mrna雜交 ;3. 最終檢測(cè) 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì) ,用相應(yīng)的 抗體 進(jìn)行 抗原抗體雜交 ;4. 有時(shí)仍需進(jìn)行 個(gè)體生物學(xué)水平 的鑒定;如 轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植物是否顯現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀 ;(三)基因工程的應(yīng)用1. 植物基因工程: 抗蟲(chóng)、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì);2. 動(dòng)物基因工程: 提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物;3. 基因治療: 把正常的外源基因?qū)氩?/p>

7、人體內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用;(四)蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以 蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò) 基因修飾或基因合成 ,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行 改造 ,或制造一種 新的蛋白質(zhì) ,以滿意人類的生產(chǎn)和生活的需求;(基因工程在原就上只能生產(chǎn)自然界已存在 的蛋白質(zhì))專題 2細(xì)胞工程細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用法植物體細(xì)細(xì)胞膜的流淌性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)離心、電刺激、克服了遠(yuǎn)緣雜交的胞雜交原生質(zhì)體融合振動(dòng),聚乙二醇不親和性,獲得雜等試劑誘導(dǎo)種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流淌性使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外再加制備單克隆抗體的技術(shù)之一滅活的病毒誘導(dǎo)溫度 :相宜溫

8、度:哺乳動(dòng)物多是 36.5 0.5 ;ph:7.2 7.4 ;氣體環(huán)境 :95%空氣 5%co2;o2 是細(xì)胞代謝所必需的,co2 的主要作用是 維護(hù)培育液的 ph;(5)動(dòng)物細(xì)胞培育技術(shù)的應(yīng)用:(一)植物細(xì)胞工程1. 理論基礎(chǔ)(原理): 細(xì)胞全能性全能性表達(dá)的難易程度:受精卵生殖細(xì)胞干細(xì)胞體細(xì)胞; 植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞2. 植物組織培育技術(shù)( 1)過(guò)程: 離體的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織 試管苗植物體制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培育醫(yī)學(xué)討論的各種細(xì)胞;2. 動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物(1)哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞 核移植(比較簡(jiǎn)潔) 和體細(xì)胞 核移植(比較難);( 2

9、)用途:微型繁衍、作物脫毒、制造人工種子、單倍體育種、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn) ;( 3)位置:是培育 轉(zhuǎn)基因植物 、植物體細(xì)胞雜交 培育植物新品種的最終一道工序;3. 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)( 1)過(guò)程:( 2)誘導(dǎo)融合的方法:物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等;化學(xué)法一般是用 聚乙二醇( peg) 作為誘導(dǎo)劑;( 3)意義: 克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙;(二)動(dòng)物細(xì)胞工程1. 動(dòng)物細(xì)胞培育( 1)概念:動(dòng)物細(xì)胞培育就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織 ,將它分散成( 2)選用去核 卵 母 細(xì)胞 的緣由: 卵 母 細(xì)胞比較大,簡(jiǎn)潔操作 ;卵 母 細(xì)胞 細(xì)胞質(zhì)多,養(yǎng)分豐富 ;( 3)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用: 加

10、速家畜遺傳改良進(jìn)單個(gè)細(xì)胞 ,然后放在相宜的 培育基 中,讓這些細(xì)胞 生長(zhǎng)和繁衍 ;( 2)動(dòng)物細(xì)胞培育的流程:取動(dòng)物組織塊 ( 動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織 )剪碎 用胰蛋白酶或膠原蛋白酶 處理分散成 單個(gè)細(xì)胞 制成 細(xì)胞懸液 轉(zhuǎn)入培育瓶中進(jìn)行 原代 培育貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞連續(xù)傳代培育;( 3)細(xì)胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細(xì)胞很快就 貼附在瓶壁上 ,稱為 細(xì)胞貼壁 ;細(xì)胞數(shù)目不斷增多, 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面 相互抑制 時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖 ,這種現(xiàn)象稱為 細(xì)胞的接觸抑制 ;( 4)動(dòng)物細(xì)胞培育需要滿意以下條件: 無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 :培育液應(yīng)

11、進(jìn)行 無(wú)菌 處理;通常仍要在培育液中添加肯定量的抗程,促進(jìn)良畜群 繁 育; 愛(ài)護(hù)瀕危 物 種,增大存活抗原注入小鼠體內(nèi)分別b 淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培育挑選培育細(xì)胞生素 ,以防培育過(guò)程中的污染;此外,應(yīng)定期更換培育液,防止 代數(shù)量;注入小鼠培育基謝產(chǎn)物積存對(duì)細(xì)胞自身造成危害; 養(yǎng)分 :合成培育基成分:糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等;通常需加入 血清、血漿 等自然成分; 生產(chǎn)寶貴的體內(nèi)培育體外培育從腹水提取從培育液提取單克隆抗體醫(yī)用蛋白; 作為異種移植的供體; 用于組織器官的移植等;( 4)體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題:克隆動(dòng)物存在著 健康 問(wèn)題、表現(xiàn)出 遺傳和生理

12、缺陷等;3. 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合也稱 細(xì)胞雜交 ,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程; 融合后形成的具有原先兩個(gè)或多個(gè) 細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為 雜交細(xì)胞 ;動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電刺激等;動(dòng)物細(xì)胞融合的意義: 克服了 遠(yuǎn)緣雜交的不親和性 ,成為討論細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段;4. 單克隆抗體抗體:一個(gè) b 淋巴細(xì)胞只分泌一種 特異性抗體 ;從血清中分別出的抗體 產(chǎn)量低、純度低、特異性差;雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能大量 繁衍 ,又能產(chǎn)生 專一

13、的抗體 ;單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn): 特異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備 ;單克隆抗體的作用: 作為診斷試劑 :精確識(shí)別各種 抗原 物質(zhì)的微小差異,并跟 肯定抗原 發(fā)生特異性結(jié)合,具有 精確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn); 用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療 癌癥治療 ,可制成“ 生物導(dǎo)彈 ” ,也有少量用于治療其它疾??;專題 3胚胎工程(一)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程1、胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物 早期胚胎或配子 所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù),如 胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培育 等技術(shù);經(jīng)過(guò)處理后獲得的 胚胎,仍需移植到 雌性動(dòng)物體內(nèi) 生產(chǎn)后代,以滿意人類的各種需求; 2、動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程( 1

14、)受精場(chǎng)所是母體的 輸卵管上段 ;( 2) 卵裂期:特點(diǎn): 細(xì)胞 有絲 分裂, 細(xì)胞數(shù)量不斷增加, 但胚胎的總體體積并不增加,或略有減??;( 3) 桑椹胚:特點(diǎn):胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32 個(gè)左右時(shí),胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán),形似桑椹;是 全能細(xì)胞 ;( 4) 囊胚:特點(diǎn):細(xì)胞開(kāi)頭顯現(xiàn) 分化 (該時(shí)期細(xì)胞的 全能性仍比較高 );集合在胚胎一端個(gè)體較大的細(xì)胞稱為內(nèi)細(xì)胞團(tuán) ,將來(lái)發(fā)育成胎兒的 各種組織;中間的空腔稱為囊胚腔 ;( 5)原腸胚:特點(diǎn):有了三胚層 的分化,具有 囊胚腔 和原腸腔 ;(二)胚胎干細(xì)胞1、哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱es或 ek 細(xì)胞,來(lái)源于 早期胚胎或從原始性腺 中分別出來(lái);2、具有

15、胚胎細(xì)胞 的特性,在形狀上表現(xiàn)為體積小,細(xì)胞核大,核仁明顯 ;在功能上,具有 發(fā)育的全能性 ,可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞;另外,在體外培育的條件下,可以增殖而不發(fā)生 分化,可進(jìn)行 冷凍 儲(chǔ)存,也可進(jìn)行 遺傳改造 ;3、胚胎干細(xì)胞的主要用途是:可用于討論哺乳動(dòng)物 個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律;是在體外條件下討論 細(xì)胞分化 的抱負(fù)材料,在培育液中加入 分化誘導(dǎo)因子 ,如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí),就可以誘導(dǎo)es 細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化, 這為揭示 細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡 的機(jī)理供應(yīng)了有效的手段;可以用于治療 人類的某些頑疾 ,如帕金森綜合癥、 少年糖尿病等;利用可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞 的特性,移

16、植 es細(xì)胞可使壞死或退化 的部位得以修復(fù)并復(fù)原正常功能;隨著組織工程技術(shù)的進(jìn)展,通過(guò)es細(xì)胞 體外誘導(dǎo)分化 ,定向培育出 人造組織器官 ,用于 器官移植 ,解決供體器官不足和器官移植后 免疫排斥 的問(wèn)題;(三)胚胎工程的應(yīng)用1. 體外受精和胚胎的早期培育(1) 卵母細(xì)胞的采集和培育:主要方法:用 促性腺激素 處理,使其排出更多的卵子,然后, 從輸卵管 中沖取卵子, 直接與獲能的精子在體外受精; 其次種方法: 從剛 屠宰母畜的卵巢 中采集卵母細(xì)胞; 第三種方法是借助超聲波探測(cè)儀、腹腔鏡等直接從 活體動(dòng)物的卵巢 中吸取卵母細(xì)胞; 采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng) 人工培育成熟 后,才能與 獲能的精子

17、 受精;(2) 精子的采集和獲能:在體外受精前,要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理;(3) 受精:獲能的精子和培育成熟的卵細(xì)胞在 獲能溶液或?qū)S玫氖芫?溶液中完成受精過(guò)程;(4) 胚胎的早期培育:精子與卵子在體外受精后, 應(yīng)將受精卵移入 發(fā)育培育液 中連續(xù)培育,以檢查 受精狀況和受精卵的發(fā)育才能 ;培育液成分較復(fù)雜, 除一些無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽外, 仍需添加 維生素、 激素、 氨基酸、 核苷酸等養(yǎng)分成分, 以及血清 等物質(zhì); 當(dāng)胚胎發(fā)育到相宜的階段時(shí), 可將其取出向 受體移植或冷凍儲(chǔ)存 ;不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同; 牛、羊一般要培育到 桑椹胚或囊胚 階段才能進(jìn)行移植,小鼠、家兔等試驗(yàn)動(dòng)物可在 更早的階段 移植,

18、人的體外受精胚胎可在8 16個(gè)細(xì)胞 階段移植; 2. 胚胎移植(1) 胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過(guò)體外受精及其它方式得到的胚胎, 移植到 同種的、 生理狀態(tài)相同的 其它雌性動(dòng)物的體內(nèi), 使之連續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù);其中供應(yīng)胚胎的個(gè)體稱為 “供體” ,接受胚胎的個(gè)體稱為 “受體” ;(供體為 優(yōu)良 品種,作為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為 常見(jiàn)或存量大 的品種;)位置: 如轉(zhuǎn)基因、 核移植, 或體外受精 等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎, 都必需經(jīng)過(guò) 胚胎移植技術(shù) 才能獲得后代, 是 胚胎工程的最終一道“工序”;(2) 胚胎移植的意義: 大大縮短了 供體本身的繁衍周期,充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的

19、繁衍才能;(3) 生理學(xué)基礎(chǔ):動(dòng)物發(fā)情排卵后, 同種動(dòng)物的供、 受體生殖器官的 生理變化是相同的 ;這就為供體的胚胎移入受體供應(yīng)了相同的生理環(huán)境 ;早期胚胎在肯定時(shí)間內(nèi)處于游離 狀態(tài);這就為 胚胎的收集供應(yīng)了可能 ;受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng) ;這為胚胎在受體的存活供應(yīng)了可能;供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織 聯(lián)系,但供體胚胎的遺傳特性 在孕育過(guò)程中不受影響;(4) 基本程序主要包括: 對(duì)供、受體的挑選和處理;挑選 遺傳特性和生產(chǎn)性能 優(yōu)秀的供 體,有健康的體質(zhì)和正常繁衍才能的受體,供體和受體是 同一 物種;并用激素進(jìn)行 同期發(fā)情處理 ,用促性腺激素 對(duì)供體母牛做 超數(shù)

20、排卵處理; 配種或人工授精 ; 對(duì)胚胎的收集、 檢查、培育或儲(chǔ)存 ;配種或輸精后第 7 天, 用特制的 沖卵 裝置,把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái) 也叫沖卵 ;對(duì)胚胎進(jìn)行 質(zhì)量檢查, 此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到 桑椹或胚囊胚 階段;直接向受體移植或放入 196的液氮 中儲(chǔ)存;對(duì) 胚胎 進(jìn)行移植;移植后的檢查;對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠 的檢查;3. 胚胎分割(1) 概念:是指采納機(jī)械方法將早期胚胎 切割 2 等份、 4 等份等,經(jīng)移植獲得 同卵雙胎或多胎 的技術(shù);(2) 意義:來(lái)自同一胚胎的后代具有相同 的遺傳物質(zhì),屬于 無(wú)性 繁衍;(3) 材料:發(fā)育良好,形狀正常的 桑椹胚或囊胚 ;(桑椹胚至囊胚的發(fā)育

21、過(guò)程中, 細(xì)胞開(kāi)頭分化, 但其全能性仍很高 ,也可用于胚胎分割;)(4) 操作過(guò)程:對(duì)囊胚階段的胚胎分割時(shí), 要將 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等 分割,否就會(huì)影響 分割后胚胎的復(fù)原和進(jìn)一步發(fā)育;選修 1 課題 1果酒和果醋的制作一、試驗(yàn)原理1酵母菌的細(xì)胞呼吸注用鹽腌制時(shí),留意鹽都用量;鹽的濃度過(guò)低,不足以抑制微生物生長(zhǎng),可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì);鹽的濃度過(guò)高,會(huì)影響腐乳的口味; 鹵湯酒精含量掌握在 12左右為宜;注酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短有很大關(guān)系;酒精含量越高,對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延長(zhǎng);酒精含量過(guò)低,蛋白酶的活性高,加快蛋白質(zhì)的水解,雜菌繁衍快,豆腐易腐敗,難以成塊;三、留意事項(xiàng)1. 釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進(jìn)行前期發(fā)酵和后期發(fā) 酵;前期發(fā)酵所發(fā)生的主要變化是毛霉在豆腐(白坯)上的生長(zhǎng);發(fā)酵的溫度為15 18,此溫度不適于細(xì)菌、酵母菌和曲霉的生長(zhǎng),而適于毛霉?jié)u漸生長(zhǎng);毛霉生長(zhǎng)大約5d 后使白坯變成毛坯; 前期發(fā)酵的作用,一是使豆腐表面有一層菌膜包住,形成腐乳的“體” ; 二是毛霉分泌以蛋白酶為主的各種酶,有利于豆腐所含有的蛋白質(zhì)水解為各種氨基酸;后期發(fā)酵主要是 酶與微生物協(xié)同參

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