外周血HIV-1DNA在艾滋病療效評(píng)估中的應(yīng)用

1、    外周血hiv-1dna在艾滋病療效評(píng)估中的應(yīng)用    方星張信輝劉水青鄭燕楊興林付琳柳興鳳關(guān)鍵詞 人類免疫缺陷病毒;抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療;hiv-1 dna;hiv-1 rna;cd4+t淋巴細(xì)胞中圖分類號(hào) r512.9          文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 b          文章編號(hào) 1673-9701（2021）22-0152-04application of peripheral blood hiv-1 dna in the evaluation o

2、f aids efficacyfang xing1   zhang xinhui1   liu shuiqing2   zheng yan2   yang xinglin2   fu lin1   liu xingfeng31.guizhou provincial center for disease control and prevention/experimental center， guiyang   550000， china; 2. guiyan

3、g public health rescue center， guiyang   550000， china; 3.zunyi medical university/key laboratory of brain science characteristics of of guizhou colleges and universities， zunyi   563000， chinaabstract objective to study the relationship between hiv-1 dna and hiv-1 rna and cd4+t

4、lymphocytes of hiv-infected persons， and to explore the application of peripheral blood hiv-1 dna in the efficacy evaluation of aids. methods a total of 80 hiv-infected patients in the guiyang public health rescue center from june to september 2018 were selected. face-to-face questionnaire surveys w

5、ere used to collect patient data， and k2edta anticoagulant blood was collected from patients. the cd4+ t lymphocytes， hiv-1 the rna and hiv-1 dna were tested， and the results were obtained. the virus pool level of hiv-infected persons， the correlation between hiv-1 dna and hiv clinical stage， cd4+t

6、lymphocyte count and hiv-1 rna were analyzed through spss. results the higher the number of cd4+t lymphocytes in hiv-infected persons， the lower the hiv-1 rna content and the lower the hiv-1 dna level in their whole blood. the differences were statistically significant（pkey words human immunodeficie

7、ncy virus; antiretroviral therapy; hiv-1 dna; hiv-1 rna; cd4+ t lymphocytes高效聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（highly active anti-retroviral therapy，haart）通過有效抑制hiv復(fù)制，降低人體內(nèi)病毒載量，重建患者免疫功能，顯著降低了hiv相關(guān)疾病的發(fā)生率和病死率1-2。目前，艾滋病抗病毒治療已證實(shí)是最有效的治療手段3，一旦停藥，多數(shù)患者2周左右便會(huì)出現(xiàn)外周血病毒反彈，使得hiv患者需要終身堅(jiān)持haart治療，且存在著藥物毒副作用、耐藥、依從性差及沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)等問題。有研究顯示，在 hiv

8、感染早期 hiv-1 dna就已經(jīng)整合到感染細(xì)胞中并持續(xù)存在，形成病毒儲(chǔ)存庫(kù)（reservoir），而被整合的感染細(xì)胞處于靜息狀態(tài)，不表達(dá)病毒蛋白，不被體內(nèi)免疫細(xì)胞識(shí)別，亦不受抗病毒治療的影響，可在感染者體內(nèi)長(zhǎng)期存在，因此雖然通過haart能夠有效降低血漿艾滋病病毒載量，但因 hiv-1 dna 的持續(xù)存在不能徹底清除體內(nèi)的病毒，從而造成hiv感染難以治愈4-7。目前，hiv病毒儲(chǔ)存庫(kù)造成艾滋病病毒的反彈已被廣泛認(rèn)同是haart無(wú)法徹底清除hiv和治愈艾滋病的主要原因8?？刂苃iv病毒儲(chǔ)存庫(kù)可能成為艾滋病功能性治愈的新策略9-11。根據(jù)已成熟的方法12，本研究旨在通過研究hiv感染者h(yuǎn)iv-1

9、 dna與hiv-1 rna及cd4+t淋巴細(xì)胞間的關(guān)系，探討外周血hiv-1 dna在艾滋病療效評(píng)估中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)貴州省的“三個(gè)90%”和艾滋病的治療提供更精準(zhǔn)的監(jiān)測(cè)手段，現(xiàn)報(bào)道如下。1 對(duì)象與方法1.1研究對(duì)象選取貴州省貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心2018年69月入組年齡18歲的80例hiv感染者，在提供書面知情同意書后，按初始的art時(shí)間先后順序入組，采用面對(duì)面問卷調(diào)查收集流行病學(xué)資料，并采集k2edta抗凝靜脈血，運(yùn)送到貴州省艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室。1.2 方法1.2.1 血漿病毒載量檢測(cè)  采集患者的k2edta抗凝靜脈血并分離血漿，在貴州省貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室

10、采用cobas taqman 48 病毒載量?jī)x和cap_ctm hiv 2.0定量試劑盒（德國(guó)，roche）進(jìn)行血漿hiv病毒載量檢測(cè)。1.2.2 cd4+t淋巴細(xì)胞檢測(cè)  采集患者的k2edta抗凝靜脈血，在貴州省貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室采用facscount流式細(xì)胞儀和bd facscount試劑盒（美國(guó)，bd）進(jìn)行全血cd4+t淋巴細(xì)胞檢測(cè)。1.2.3 外周血中的hiv-1 dna檢測(cè)  采集人外周抗凝全血，采用廣州海力特公司生產(chǎn)的qiaamp dna blood min kit，按說明書操作提取全血中總dna，最后采用廣州海力特公司生產(chǎn)的 hiv-1

11、dna 定量檢測(cè)試劑盒（熒光探針pcr）定量檢測(cè)hiv-1 dna 的水平。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用excel和spss 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件整理和分析數(shù)據(jù)。分類計(jì)數(shù)變量以構(gòu)成比或比例表示，采用2檢驗(yàn)，采用logistic回歸模型分析 hiv-1 dna 定量與患者不同who臨床分期、hiv-1 rna及cd4+t淋巴細(xì)胞間的相關(guān)性，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 調(diào)查對(duì)象的基本特征共調(diào)查貴州省貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心年齡18歲的hiv感染者80例，并采集k2edta抗凝血樣。其中，納入對(duì)象性別比為764（男女），年齡1955歲，平均（27.23±6.54）歲。調(diào)查時(shí)

12、cd4+t淋巴細(xì)胞200個(gè)/l占12.50%（10/80），201350個(gè)/l占40.00%（32/80），351500個(gè)/l占21.25%（17/80），>500個(gè)/l占20.00%（16/80），缺失cd4+t淋巴細(xì)胞的占6.25%（5/80）。病毒載量檢測(cè)比例為90.00%（72/80），病毒載量999 copies/ml占5.00%（4/80），1 0009 999 copies/ml占17.50%（14/80），10 000copies/ml占67.50%（54/80）?；橐鰻顩r，未婚者占83.75%（67/80），已婚或同居者占12.50%（10/80），離婚或喪偶者占3.7

13、5%（3/80）。傳播途徑以同性性傳播為主（85.00%，68/80），異性性傳播占13.75%（11/80），雙性性傳播占1.25%（1/80）。見表1。2.2不同who臨床分期患者h(yuǎn)iv-1 dna的變化按照hiv感染者who臨床分期不同分為三組，hiv臨床期組共71例感染者，hiv臨床期組共3例感染者，hiv臨床期組共6例感染者。分析不同who臨床分期對(duì)患者全血中hiv-1 dna含量的影響，結(jié)果顯示，hiv感染者who臨床分期越高，其全血中hiv-1 dna的水平越高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05），可能與期、期樣本數(shù)量較少有關(guān)。見表2。2.3不同cd4+t淋巴細(xì)胞數(shù)對(duì)患者h(yuǎn)

14、iv-1 dna的影響按照hiv感染者cd4+t淋巴細(xì)胞數(shù)不同分為四組，其中，cd4+t淋巴細(xì)胞200個(gè)/l的感染者共有10例，cd4+t淋巴細(xì)胞在201350個(gè)/l的感染者共有32例，cd4+t淋巴細(xì)胞為351500個(gè)/l的感染者共有17例，cd4+t淋巴細(xì)胞均>500個(gè)/l的感染者共有16例，另有5例不詳。分析cd4+t淋巴細(xì)胞數(shù)的不同對(duì)患者全血中hiv-1 dna含量的影響，結(jié)果顯示，hiv感染者cd4+t淋巴細(xì)胞數(shù)量越多，其全血中hiv-1 dna的水平越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p2.4 不同hiv-1 rna（病毒載量）對(duì)患者h(yuǎn)iv-1 dna的影響按照hiv感染者h(yuǎn)iv-1 r

15、na含量不同分為三組，其中，hiv-1 rna含量在1999 copies/ml 之間的感染者共有4例，hiv-1 rna在1 0009 999 copies/ml之間的感染者共有14例，hiv-1 rna均10 000 copies/ml的感染者共有54例，缺失/不詳8例。分析獲得hiv-1 rna含量對(duì)患者全血中hiv-1 dna含量的影響，結(jié)果顯示，hiv感染者h(yuǎn)iv-1 rna含量越低，其全血中hiv-1 dna的水平越低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p3 討論在艾滋病疾病監(jiān)測(cè)中，hiv-rna核酸定量（病毒載量）和cd4+t淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)已作為兩項(xiàng)重要指標(biāo)被廣泛應(yīng)用12-15，cd4+t細(xì)胞是觀

16、察患者抗病毒治療后免疫系統(tǒng)是否重建的一個(gè)重要指標(biāo)，而hiv-1 rna檢測(cè)是目前評(píng)估艾滋病患者抗病毒治療是否成功的評(píng)價(jià)指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，目前的 haart 療法很容易控制hiv-1 病毒，大部分感染者經(jīng)有效治療后 hiv-1 rna 可持續(xù)檢測(cè)不到，導(dǎo)致無(wú)法持續(xù)監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展16-17，而cd4+t細(xì)胞的顯著性變化也晚于病毒學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，使兩者無(wú)法全面監(jiān)測(cè)患者病情，無(wú)法滿足目前臨床需要。hiv dna能夠提供病毒儲(chǔ)藏庫(kù)的重要信息，預(yù)測(cè)艾滋病疾病進(jìn)展且可作為長(zhǎng)期抗病毒治療有效性的指標(biāo)6-11。本研究結(jié)果顯示，hiv感染者的cd4+t淋巴細(xì)胞數(shù)量越多，hiv-1 rna含量越低，其全血中hiv-1 dn

17、a的水平越低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p綜上所述，hiv dna可反映haart期間病毒庫(kù)水平、提示疾病進(jìn)展情況及評(píng)價(jià)治療效果。因此，有學(xué)者建議將hiv dna與血漿rna和cd4+t淋巴細(xì)胞數(shù)一同納入haart隨訪評(píng)價(jià)。因此建議在貴州省建立一整套更敏感、特異的方法，以準(zhǔn)確衡量?jī)?chǔ)存庫(kù)的存在與否及大小、變化，輔助臨床治療時(shí)機(jī)選擇、療效評(píng)估，為實(shí)現(xiàn)貴州省的“三個(gè)90%”和艾滋病的治療提供更精準(zhǔn)的監(jiān)測(cè)手段。參考文獻(xiàn)1 輔海平.桐鄉(xiāng)市艾滋病患者接受haart后生存狀況調(diào)查研究j.中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2020，21（11）：1161-1165.2 王瑩瑩，楊海濤，王永紅，等.石家莊市358例艾滋病患者抗逆轉(zhuǎn)錄

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